一种真空渗透辅助农杆菌介导转化苜蓿的方法技术

本发明专利技术公开一种真空渗透辅助农杆菌介导转化苜蓿的方法，包括（１）种子灭菌和试管苗培育，（２）含有目标基因的根癌农杆菌培养，（３）真空渗透辅助农杆菌侵染，（４）抑菌和抗性植株选育培养，（５）抗性植株的生根选育，（６）转化植株炼苗及大田移栽等步骤；本发明专利技术以农杆菌介导转化苜蓿幼嫩真叶的转化方式，在侵染过程中采用真空渗透的方法，从而大大提高转化效率，通过抗性植株的二次抗性生根选育减少了后期检测工作量，得到大量的转化植株；本发明专利技术的方法克服了现有苜蓿遗传转化效率低及转化周期长的难点，提高了苜蓿的转化效率９５％以上，缩短转化周期２～３个月，对于苜蓿基因工程方面的理论研究以及遗传育种实践均具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种农杆菌介导转化苜蓿的方法，尤其涉及一种真空渗透辅助农杆菌介 导转化苜蓿的方法，属于生物技术和现代农业

技术介绍
低温、干旱和盐碱严重影响我国乃至世界的农业生产，我国是干旱频繁发生的国家 之一，根据统计，我国从1991年至2005年干旱发生面积平均每年为2602万公顷，其 中1998年干旱面积最小，为1424万公顷，而2000年干旱面积最大，达4054万公顷， 并且有逐年加大的趋势。水资源短缺以及土壤盐碱化是目前制约农业生产的一个全球性 问题，到目前为止，全球20%的耕地受到盐碱化危害，43%的耕地处于干旱、半干旱地 区。因此，如何提高植物对低温、干旱和盐碱等逆境的抵抗能力，是目前科学研究和生 产上亟待解决的关键问题。苜蓿素有"牧草之王"的美称，是世界上栽培面积最广、应用最广泛的多年生豆科牧 草，它不但具有抗旱、抗寒、高产、优质、营养丰富等特点，还具有改良土壤结构、 理化性质、保持水土和保护环境等方面的重要作用。在我国实施农业三元结构调整中， 苜蓿是发展可持续农业的首选饲料作物，但当今中外现有的苜蓿品种，抗旱、耐盐能力 仍然有限，限制了在干旱和盐碱土壤中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种真空渗透辅助农杆菌介导转化苜蓿的方法，步骤包括：（１）种子灭菌和试管苗培育，（２）含有目标基因的根癌农杆菌培养，（３）真空渗透辅助农杆菌侵染，（４）抑菌和抗性植株选育培养，（５）抗性植株的生根选育，（６）转化植株炼苗及大田移栽；其特征在于：　步骤（２）所述含有目标基因的根癌农杆菌培养的方法是：挑取农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４、ＧＶ３１０１或ＥＨＡ１０５的单菌落接种到５ｍｌ含有５０ｍｇ／ＬＫａｎ的ＹＥＢ液体培养基中，在温度２５～３０℃、震荡转速１６０～２００ｒｐｍ的条件下 ，培养２４～４８小时，然后取１ｍｌ转接于５０ｍｌ含有５０ｍｇ／ＬＫａｎ的ＹＥＢ液体培养基中，在温度２５～３０℃、转...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏阳，梁慧敏，燕丽萍，王太明，刘德玺，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]