扩展的西红柿染色体图及拷贝脱氧核糖核酸库制造技术

本发明专利技术提供用一种带有大量ｃＤＮＡ克隆及同工酶标记物所定位的标记物标记的扩展的西红柿染色体图。该ｃＤＮＡ克隆存放在ＶｉｔｒｏＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ。可结合图的使用找出西红柿植物的所需繁殖特征之间的连锁。建立如此的连锁以后，它们可用于快速确定西红柿植物中存在或不存在所需的特性，并可将这种所需的特性渗入至另外的西红柿植物的变种中。（*该技术在2007年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及使用重组DNA克隆的遗传工程及植株的培育。人们已经发展了多种生物体的基因连锁图，它们把特定的染色体或染色体区段渗入到种种遗传背景中时具有不可估量的价值(参见Rick，C.M.及Khush，G.S(1969)“西红柿基因组中细胞基因组的探索”45～68页，发表在“遗传学讲座”(Genetic Lectures Bogart编)，俄勒冈州立大学出版社，Corvalis;以及C.Rhyne(1960)”由于二倍体品种基因转移而产生的异源四倍体G.hirsutum L.连锁群中GossypiumⅡ重组值改变的连锁研究”。遗传学45673～683页。有关基因的定位也可以用做过图谱的标记物通过连锁分析来实现，如Patterson，E.B(1982)“用染色体畸变及多标记物品系作基因(染色体)图”85～88页(发表在“生物研究用玉米”，W.F.Sheridan编，North Dakota大学，大学出版社出版)一文所述。这里加以引用作为参考。在高等植物中，西红柿(Lycopersicon esculentum)是具有最详尽的连锁图的一个。在西红柿中曾使用标记物位点来组成染色体替代体系(Rick，C.M.(1969)”Solanum Pennellii染色体基因有控制地渗入Lycopersicon esculentum分离及重组”，遗传学62753～768页;以及Rick，C.M.(1971)“二倍体植株品种基因组的某些细胞基因特征”，Stadler Symposia卷1/2153～174页，以及在自不亲和性中作为基因鉴别的一种辅助方法(Tanksley.S.D及Loaiza-Figueroa，F.(1985)“遗传自不亲和性被Lycop-er-sicon Peruvianum中染色体1上的一个单一的主位点所控制”，Proc.Nat′l.Acad.Sci.825093～5096页)具有经济价值的特定基因渗入诸如雄不育性(Tanksley，S.D.，Rick，C.M及Vallejos，C.E(1964)，“西红柿中核的雄不育位点及一个酶标记物之间的紧密连锁”Theor.Appl.Genet.68109～113页)及nematode抗性(Medina-Filho，H.P(1980)，“染色体6上的APS-1，mi及其他标记物的连锁”，Rep.Tomato Genet.Coop.3026～28页)也由于使用比较容易选择的连锁标记物位点而比较方便。虽然西红柿的遗传图上有着良好分布的标记物，但是，它和大多数植株品种一样，是由基本上是形态突变位点所组成。一般说来，这些形态标记物在植株培育的选择方案中是没有什么用处的，因为它们通常是隐性的，并且它们具有不希望有的表(现)型。电泳以及酶专门染色剂的发展扩大了西红柿基因(染色体)图并且提供了许多新的标记物，它们的变异体往往对于表现(型)没有显著的影响。这些同功酶标记物虽然非常有用，但为数极少而且只能用于西红柿基因组的一小部分(Tanksley，S.D.及Rick，C.M.(1980)，“西红柿的同功酶连锁图在遗传学及育种中的应用”，Theor.Appl.Genet.57161～170页;Tanksiey，S.D.(1985)，“西红柿中的酶编码基因(Lycopersicon esculentum)，Isozyme Bulletin1843～45页)。由于这些原因，人们希望发展一种基于从信使核糖核酸RNA(cDNA)中衍生的单拷贝DNA序列的更为详尽的连锁图。近年来，相应于特定染色体位点的单拷贝DNA序列曾在人身上用作遗传标记物(Botstein，D.White，R.L.，Skolnick，M.及Davis，R.(1980)，“用限制片段长度多形质(多形态)组成人的遗传连锁图”，Am.J.Hum.Genet.32314～331页;Jeffreys，A.J.，Wilson，V.及Thein，S.L.(1985)，“人类DNA中的超可变‘小型卫星’区域”，Nature 31467～73页;及White，R.，Leppert，M.，Bishop，D.T.，Barker，D.，Berkowitz，J.，Brown，C.，Callahan，P.，Holm，T.，Jerominski，L.(1985)，“用DNA标记物组成人类染色体连锁图”，Nature 313101～105页;有人提出此法可用于植物(Helentjaris，T.G.，PCT Application，发表于1984年12月6日，“植物遗传图谱(遗传基因作图)及杂交育种”方法)。使用这种方法时，先用一种限制性核酸内切酶消化从被分析的个体中取得的DNA来检测出等位基因变异，然后用电泳将所得片段分离并转移到膜上。然后，用放射性同位素标记的、克隆及同种序列探查过滤器而鉴别等位基因片段。用这种方法探查得的遗传变异常常被称作限制片段长度多形质(多形态)(RFLP)。RFLP的数目实际上是无限制的。它们对表(现)型没有任何影响。它们是等显性并且是以孟德尔方式遗传的(Bostein等，1980，Supra)。用RFLP检测的位点图谱工作(作图工作)在人体上进展得很快，所得到的信息已开始在若干遗传疾病的产前胎儿期的诊断方面得到应用(Murray，J.M.，Davis，K.E.，Harper，P.s.，Meredith，L.，Muller，C.R.，Williamson，R.(1982)，““X染色体短臂上克隆DNA序列与Duchenne遗传性肌肉萎缩症之间的关系”，Nature 30069～70页)。虽然人类(方面的)遗传学家采用RFLP迅速地发展了基因作图分析(Solomon，F.及Goodfellow，P.(1983)，“人类基因图不断向前展开”，Nature 306223～224页)，但是，到目前为止，在高等植物方面的基因图分析方面，进展很少(Polans，N.O.，Weeden，N.F.及Thompson，W.F.(1985)，“豌豆中rbcs及cab多基因家系的遗传、机体组成及基因图分析”，Proc.Nat′l.Acad.Sci.325083～5087页)。R.Bernatzky等人(1986)在Theor.Appl.Genet.72314-321页中刊登的《西红柿中与作用子相关的序列的遗传学》中展示了包括同功酶标记及与作用子相关的序列的西红柿连锁基因图。西红柿的作过基因图谱分析的克隆dNA序列已经由R.Bernatzky等人(1986)在遗传学》112887-898页中的《向基于同功酶及随机cDNA序列的西红柿饱和连锁基因图前进》中作了报道。在上述文章中公开的cDNA克隆是1986年3月20日申请的美国专利申请841，594号的基础，在此引入作为参考。cDNA克隆及扩展的西红柿染色体图谱作为本专利申请的主题，补充了对早先公开的cDNA克隆及基因图谱。R.Bernatzky等人(1986)著的刊登于《分子基因遗传学》2038-14页上的“大部分随机cDNA克隆对应于西红柿基因组中单一位点”一文显示了用该专利技术的方法得到本文档来自技高网...

【技术保护点】
一个至少含有二个克隆的蕃茄ＤＮＡ相应的ｃＤＮＡ库是选自由ＣＤ１０、ＣＤ７６、ＣＤ２３、ＣＤ５３、ＣＤ６６、ＣＤ７１、ＣＤ６９、ＣＤ６８、ＣＤ３６、ＣＤ７０、ＣＤ７８、ＣＤ７４、ＣＤ２６、ＣＤ６７、ＣＤ７２、ＣＤ１８、ＣＤ１７、ＣＤ１９、ＣＤ３９和ＣＤ２组成的组。

【技术特征摘要】
1.一个至少含有二个克隆的蕃茄DNA相应的cDNA库是选自由CD10、CD76、CD23、CD53、CD66、CD71、CD69、CD68、CD36、CD70、CD78、CD74、CD26、CD67、CD72、CD18、CD17、CD19、CD39和CD2组成的组。2.如权利要求1所述的二个克隆系选自相同的染色体。3.如权利要求1所述的含有所有克隆的cDNA库列在权利要求1。4.一个cDNA克隆是选自由CD10、CD76、CD23、CD53、CD66、CD71、CD69、CD68、CD36、CD70、CD78、CD74、CD26、CD67、CD72、CD18、CD17、CD19、CD39和CD2组成的组。5.一个质粒含有权利要求4的cDNA克隆。6.权利要求5所述的质粒包含PBR322或PUC8。7.染色体图可用作为确定在蕃茄染色体上的蕃茄DNA片段的原来位置或几个位置，包括代表至少一个带有标记的染色体沿着顺序号和已知如下的图单位(CM)之间的间隔染色体 1Idh-1-18cM-Prx-1-21cM-CD15-7cM-CD10和/或CD76-11cM-Skd-1-4cM-CD24-17cM-CD47-4cMCD12-21cM-CD9B和/或CD52A-5cM-CD9A和/或CD16B和/或CD23-5cM-CD16A和/或CD20和/或act-3-10cM-CD44-1cM-CD28-18cM-Est-3;染色体2R45s和/或CD49B-1cM-CD37-7cM-CD1-7cM-Rbcs-1和/或3-91-15cM-CD33A-9cM-CD30B-22cM-Cab-1和/或3-131-1cM-CD11和/或CD53-11cM-Est-7-8cM-Prx-2-6cM-CD43-3cM-CD35-6cM-CD9C-13cM-Rbcs-10cM-CD30A和/或CD33B-9cM-CD66;染色体3CD4A-13cM-CD71-5cM-CD69-30cM-Cab-3-12cM-Pgm-1-18cM-CD50-2cM-Rbcs-2和/或CD68和/或3-167-6cM-CD52B和/或CD36A和/或CD31B和/或CD51-6cM-CD29C和/或Act-4-2cM-CD13A和/或CD6B;染色体46Pgdh-1-11cM-CD59-5cM-CD49A-11cM-Act-1和/或Tpi-2-15cM-Pgm-2和/或CD70-9cM-Adh-1-3cM-Act-10和/或CD55-33cM-CD39;染色体5CD41-9cM-CD64-8cM-CD31A-10cM-CD38B和/或CD36B-42cM-CD78-6cM-CD74A;染色体6CD14-8cM-CD13B和/或CD67-7cM-Aps-1-11cM-CD29B-13cM-Adh-2-5cM-CD25A-8cM-CD42;染色体7CD61-3cM-CD58和/或CD65-8cM-CD48-16cM-Got-3和/或CD26-7cM-Aco-2-2CM-Got-2-7cM-Cab-4-5cM-CD54和/或CD57;染色体8CD46-10cM-CD60-10cM-CD7-10cM-Cab-2和/或3-185-12cM-Aps-2-14cM-CD40-1cM-CD21A，和/或CD16C;染色体9Act-2-6cM-CD5-5cM-CD328;染色体10CD56-7cM-CD45-10cM-Est-8-5cM-CD38A-10cM-CD34B-10cM-CD34A和/或Act-6-4cM-CD72;CD32A-11cM-cD3-3cM-CD8;染色体11Sodl和/或Act5-4cM-CD29D-4cM-CD18-10cM-CD25B-16cM-CD17;染色体12CD21B-1cM-6Pgdh-2and/or CD27-10cM-CD4B和/或CD16D和/或CD22-2cM-CD6A-3cM-Pgi-1-38cM-CD19-2cM-Aco-1-2cM-Cab-5和/或3-48;CD28.权利要求7所述的染色体图与其中提到的cDNA克隆中的至少一个克隆相结合。9.一种蕃茄植物的显著特征与权利要求1的cDNA标记克隆连锁的方法是包括比较权利要求1的cDNA克隆标记和显著特性的重组合百分数并指定把cDNA标记克隆和显著特性之间具...

【专利技术属性】
技术研发人员：史蒂芬D坦克斯列，罗勃特博纳滋基，
申请(专利权)人：卢布瑞佐遗传公司，康纳研究基地公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]