新的ｘ—１，６—葡萄糖苷酶具下列酶学性质：该酶作用于ｘ—１，６—葡萄糖苷键产生线性淀粉，最适ｐＨ５．０—５．５，在４０℃时，在ｐＨ４．５—６．５范围内可稳定３０分钟，在５０℃ｐＨ５．０—６．０时，可稳定３０分钟，最适温度约５５℃。（*该技术在2007年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种，尤其涉及一种新的芽孢杆菌(Bacillus sectorramus)，该菌能在最适pH5.0至5.5、最适温度55℃条件下经培养产生α-1，6-葡萄糖苷酶，另外还涉及一个生产上述新的α-1，6-葡萄糖苷酶的生产过程，其中包括培养上述菌种并收集α-1，6-葡萄糖苷酶。α-1，6-葡萄糖苷酶具有对淀粉类中的α-1，6-葡萄糖苷键发生作用以产生直链淀粉的能力，并且广泛用于制糖工业，生产麦芽糖、葡萄糖和高果糖玉米糖浆(HFCS)。α-1，6-葡萄糖苷酶长期以来发现于高等植物和微生物酵母体中，但近期有报道许多细菌可以产生这种酶，例如产气杆菌(Aerobactor aerogenes)，中间埃希氏菌(Escherichia intermedia)，假单孢菌(Pseudomonas amyloderamosa)，缓症链球菌(Sterptococcus mites)，噬纤维菌(Cytophage)，链霉菌属(Sterptomyces)和α-叶红呋喃菌属(Flavochromogenes)等。另外，在产生α-1，6-葡萄糖苷酶的芽孢杆菌种中，已知的种类有蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)(IFO 300)，芽孢杆菌(Bacillus fermus)(IFO 300)，芽孢杆菌(Bacillus acidopullulyticus)等。大多数已知的α-1，6-葡萄糖苷酶具有中性或弱碱性的最适pH值，不适于在糖化工业中使用，工业上的糖化作用一般在酸性条件下进行。已知由假单孢菌(Pseudomonus amyloderamora)，芽孢杆菌(Bacillus acidopullulyticus)等产生的α-1，6-葡萄糖苷酶具有酸性最适pH值，但是由于抗温性差，前者是不能实际使用的;同时后者菌体培养时间需长达60～70小时，所以是不经济的。因此，本专利技术人试图寻找具备抗温性、酸性的最适pH值和高的α-1，6-葡萄糖苷酶产量的微生物。在发现一种新的芽孢杆菌的基础上，本专利技术人完成了本专利技术。这是一由本专利技术人新近在土壤微生物中发现的芽孢杆菌(Bacillus)，它经过10～15小时短时间的培养再收集其产物能够得到大量的α-1，6-葡萄糖苷酶。根据本专利技术的一个方面，提供了一种生产α-1，6-葡萄糖苷酶的方法，其中包括培养能产生α-1，6-葡萄糖苷酶的芽孢杆菌(Bacillus sectorramus)使其在培养条件下产生α-1，6-葡萄糖苷酶，然后收集所述的α-1，6-葡萄糖苷酶，它具有如下酶化学性质(1)反应该酶对α-1，6-葡萄糖苷酶键起作用并产生线性淀粉;(2)底物专一性该酶对多糖具有下列相对活性多糖 相对活性(%)支链淀粉 100可溶性玉米淀粉 13可溶性淀粉 6.7牡蛎糖元 1.7野兔糖元 2.6玉米淀粉 3.8马玲薯淀粉 4.0(3)米氏常数值(Km)和对支链淀粉的Vmax∶该酶的Km值为0.14mg/ml，Vmax值为70.0μmol/min/mg蛋白质;(4)最适pH5.0～5.5(5)pH稳定性该酶在pH范围4.5～6.0、温度40℃条件下可稳定30分钟;在pH值5.0～6.0，温度50℃也可稳定30分钟;(6)最适温度约5.5℃;(7)热稳定性该酶在pH值为4.5条件下，分别以不同温度处置30分钟所得结果表明在40℃时，该酶仍保留其初始活性的80%;60℃时活性则为10%;(8)抑制剂的影响作用对氯汞苯甲酸或十二烷基硫酸钠至少可抑制该酶活性的70%，但不受邻-菲咯啉或氰铁酸钾的抑制;(9)金属盐类的影响作用该酶几乎不受Ni2+、Ba2+、Zn2+、Cd2+或Mn2+的影响，受Fe3+的抑制，并且Hg2+和Ag2+可使其失活;还有(10)分子量约95，500(用SDS电泳法测得)。图1至5显示本专利技术的α-1，6-葡萄糖苷酶的酶化学性质，图1中的曲线图显示最适pH值，图2中的曲线图显示在40℃(○)和50℃(·)时的稳定pH范围，图3中的曲线图显示最适温度值，图4中的曲线图显示热稳定值，图5中的曲线图在55℃(○)、60℃(□)和65℃(·)及在不同pH条件下酶的稳定性。用于本专利技术的α-1，6-葡萄糖苷酶生产菌是一个新的菌种，被本专利技术人命名为(Bacillus sectorramus)芽孢杆菌。该菌种于1987年9月4日保存号FERM BP-1471(原始保存号码FERM P-8973，贮存于1986年9月22日)贮存于日本工业学技术暑发酵研究所(of 1-3，Higashi 1-chome，Yatabemachi，Tsukuba-gun，Ibaraki 305，Japan)，贮存条件符合“以专利程序为目的的微生物贮存国际认可布达佩斯公约”，该菌种在下文中将命以“主题菌种”(Subject strain)。主题菌种具有下列细菌学特性A.形态(1)细胞形状 杆状(2)细胞大小 1.0～1.3×1.5～5.2μ(3)迁移率 无(4)孢子 呈现(5)革兰氏染色 阳性(6)耐酸反应 阴性B.在不同培养基上生长(1)标准琼脂板培养基菌落为环形并具整齐外缘。表面平滑为半透明灰白色。(2)标准琼脂斜面培养基沿培养基直着生长并具平滑的表面、奶黄色具光泽，生长适中。(3)标准液体培养基轻微混浊并具粉状沉淀物。无色素形成。(4)标准明胶穿刺培养基直的并无液化作用。(5)石蕊牛乳无变化。C.生理学特性(1)硝酸盐还原作用 阳性(2)脱氮作用 阳性(3)甲基红试验 阳性(4)乙酰甲基甲醇的形成 阴性(5)吲哚的形成 阴性(6)硫化氢的形成 阴性(7)淀粉的水解 阳性(8)柠檬酸的同化 阳性(9)无机氮源的同化(硝酸盐和铵盐) 阳性(10)色素的形成 阴性(11)脲酶活性 阴性(12)氧化酶活性 阴性(13)过氧化氢酶活性 阳性(14)生长范围pH值 4.0～7.1温度 45.5～15.0℃(15)对氧的行为 厌气性(16)二氧化丙酮的形成 阴性(17)马尿酸的分解 阴性(18)精氨酸的分解 阴性(19)苯丙酸的脱氨基作用 阴性(20)温度抗性(85℃，10分钟) 阳性(21)氯化钠抗性 7% 阴性3.5% 阳性(22)在Sabouraud氏琼脂培养基中生长 阳性(23)在0.001%溶菌酶培养基中生长 阳性(24)酪氨酸的分解 阳性(25)在柠檬酸胺琼脂培养基中的碱性生成作用 阳性(26)酪蛋白的分解 阴性(27)明胶的分解 阴性(28)在厌气性培养基中生长 阳性(29)在Mc Conkey氏培养基中生长 阴性(30)卵磷脂酶反应 阴性(31)在VP培养基中产碱能力 阴性(32)糖的同化作用和产酸能力(a)L-阿拉伯糖 阳性(b)D-木糖 阳性(c)D-葡萄糖 阳性(d)D-甘本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种产生ｘ－１，６－葡萄糖苷酶的方法，其中包括对能够产生ｘ－１，６－葡萄糖苷酶的芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ－ｓｅｃｔｏｒｒａｍｕｓ）的培养使其在营养培养基本产生ｘ－１，６－葡萄糖苷酶，集聚具备下列酶化学特性的该ｘ－１，６－葡萄糖酶：（１ ）反应：该酶作用于ｘ－１，６－葡萄糖苷键产生线性淀粉；（２）底物专一性：该酶对多糖类具如下相对活性：多糖，相对活性（％）支链淀粉，１００可溶性玉米淀粉，１３．５可溶性淀粉６．７牡蛎糖元，１．７野兔糖元，２．６玉米 淀粉，３．８马玲薯淀粉，４．０（３）米氏常数值（Ｋｍ）和对支链淀粉的Ｖｍａｘ值：该酶Ｋｍ值为０．１４毫克／毫升，Ｖｍａｘ值为７０．０μｍｏｌ／ｍｉｎ／ｍｇ蛋白质；（４）最适ｐＨ∶５．０～５．５（５）ｐＨ稳定性：该酶在４０℃ｐ Ｈ范围４．５～６．５时可稳定３０分钟，５０℃ｐＨ范围５．０～６．０时可稳定３０分钟；（６）最适温度：约５．５℃；（７）热稳定性：该酶在ｐＨ值为４．５条件下，分别以不同温度处置３０分钟所得结果：４０℃时该酶仍保留其初始活性的８０％，而 在６０℃时则为１０％（８）抑制剂影响作用：对氯汞苯甲酸或十二烷基硫酸钠至少可抑制该酶活性的７０％但该酶不受邻菲咯啉或氰铁酸钾的抑制；（９）金属盐的影响作用：该酶几乎不受Ｎｉ↑〔２＋〕、Ｂａ↑〔２＋〕、Ｚｎ↑〔２＋〕、Ｃｄ↑〔２＋〕或 Ｍｎ↑〔２＋〕的抑制，受Ｆｅ↑〔３＋〕的抑制并且Ｈｇ↑〔２＋〕和Ａｇ↑〔＋〕可令其失活；还有（１０）分子量：约９５，５００（ＳＤＳ电泳法测得）；并回收所述的ｘ－１，６－葡萄糖苷酶。...
【技术特征摘要】
JP 1986-9-26 228904/198;JP 1987-3-11 56149/19871.一种产生α-1，6-葡萄糖苷酶的方法，其中包括对能够产生α-1，6-葡萄糖苷酶的芽孢杆菌(Bacillus sectorramus)的培养使其在营养培养基本产生α-1，6-葡萄糖苷酶，集聚具备下列酶化学特性的该α-1，6-葡萄糖酶(1)反应该酶作用于α-1，6-葡萄糖苷键产生线性淀粉；(2)底物专一性该酶对多糖类具如下相对活性多糖 相对活性(%)支链淀粉 100可溶性玉米淀粉 13.5可溶性淀粉 6.7牡蛎糖元 1.7野兔糖元 2.6玉米淀粉 3.8马玲薯淀粉 4.0(3...
【专利技术属性】
技术研发人员：中井国治，崎正义，广二，森茂治，广濑进，横井信正，大矢隆一，
申请(专利权)人：天野制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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