赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化技术制造技术

本发明专利技术是赤豆叶肉原生质体分离培养与绿苗分化的组织培养技术。本发明专利技术采用特定的酶液及酶解方法游离得叶肉原生质体；采用特定的大量元素及维生素成份，采用特定的碳源及渗透压稳定剂，采用特定的激素配比方式等制成赤豆叶肉原生质体生长培养基；采用特定的激素配比方式制成愈伤组织扩增及分化培养基；采用特定波长的光照及温度作培养条件。采用本发明专利技术技术，原生质体能持续分裂，形成愈伤组织并最终分化成绿苗。（*该技术在2007年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术是赤豆(Phaseolus angularis)叶肉原生质体的分离制备、培养、愈伤组织诱导、扩增及绿苗分化的整套方法。本专利技术适用于豆科植物菜豆属赤豆(Phaseolus angularis Wight)叶肉原生质体分离，培养与绿苗分化。豆科植物的原生质体培养是具重要经济价值的豆类作物遗传操作的重要手段，它在植物基因工程遗传转化受体系统方面的应用，以及在细胞融合，体细胞变异的选择利用等研究方面已显示出巨大潜力。但据1986年报导，豆科植物从原生质体再生植株仅限于苜蓿、车轴草、胡芦巴等少数种类。至于籽粒用豆科植物原生质体培养成苗的研究工作至今未见报道。本专利技术在赤豆原生质体分离、培养、愈伤组织形成及绿苗分化上的成功，是籽粒用豆科植物原生质体培养的一个突破。从赤豆叶肉原生质体培养至绿苗分化的过程中，对于被酶解后分离出来的原生质体进行培养是关键的一环。本专利技术在原生质体培养基中采用0.5-0.65M浓度的葡萄糖作为碳源和渗透压稳定剂。众所周知，试验材料的生理状况是影响豆科植物原生质体培养能否取得成功的重要因素。本专利技术采用接种11-16天的赤豆无菌苗真叶为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从赤豆无菌苗游离和培养叶肉原生质体的方法，其特征是原生质体培养基成份中采用０．５至０．６５Ｍ浓度的葡萄糖作为碳源和渗透压稳定剂，原生质体分裂形成愈伤组织，再扩增，分化成绿苗。

【技术特征摘要】
1.一种从赤豆无菌苗游离和培养叶肉原生质体的方法，其特征是原生质体培养基成份中采用0.5至0.65M浓度的葡萄糖作为碳源和渗透压稳定剂，原生质体分裂形成愈伤组织，再扩增，分化成绿苗。2.按照权利要求1所述的原生质体培养基，其特征是培养基的无机盐成份中含有600-1000mg/L的CaCl2·2H2O，1200-1500mg/L的KNO3，200-300mg/L的NH4NO3，60-90mg/L的KH2PO4，600-900mg/L的MgSO4。3.按照权利要求1所述的原生质体培养基，其特征是培养基的维生素成份中含有0.02-0.08mg/L的生物素，0.1-0.8mg/L的叶酸，100-200mg/L的肌醇，3.0-3.5mg/L的盐酸硫胺素，0.5-0.8mg/L的盐酸吡哆素，1.0-2.0mg/L的甘氨酸，3.0-4.0mg/L的烟酸。4.按照权利要求1所述的原生质体培养基，其特征是培养基的植物激素成份中含有2，4-二氯苯氧乙酸，α-萘乙酸，6-苄氨基嘌呤和玉米素，上述植物激...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛扣麟，王韫珠，袁勋梅，黄培铭，杨金水，聂志平，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]