甘蔗愈伤组织原生质体的分离与纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种甘蔗愈伤组织原生质体的分离与纯化方法，包括甘蔗愈伤组织培养、甘蔗悬浮细胞培养、甘蔗原生质体的分离和甘蔗原生质体的纯化。利用本发明专利技术的方法可以快速从甘蔗胚性愈伤组织培养获得悬浮细胞系，并通过酶消解后分离纯化获得质量高、数量足、均一性好的完整原生质体，为甘蔗外源基因表达、启动子分析、基因沉默等转基因瞬时表达研究提供理想的实验材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物原生质体的分离与纯化方法，具体涉及一种，属生物

技术介绍
植物原生质体克服了细胞壁这一屏障，是植物生理学、细胞生物学、体细胞遗传学等理论研究的理想材料，而且在基因工程及作物改良新品种培育方面有着重要应用前景。近年来，随着植物分子生物学发展，原生质体作为一个单细胞系统广泛地应用在基因定位、基因表达调控、RNA沉默机理、细胞钙信号转导及其调节机制等方面的研究。甘蔗愈伤组织原生质体的研究始于上世纪70年代，原生质体分离、培养和植株再生也获得成功。但是，与模式植物烟草或拟南芥叶肉细胞原生质体研究相比，甘蔗愈伤组织·原生质体分离纯化效果不尽理想，植株再生频率很低，直至今日没有长足发展。以甘蔗愈伤组织原生质体为受体材料，开展甘蔗转基因瞬时表达未见报道。本专利技术建立高效、快速的甘蔗愈伤组织原生质体的分离和纯化方法，获得高质量、高产量的原生质体可作为外源基因表达、启动子分析、基因沉默等转基因瞬时表达研究的受体材料。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种快速、高效、简便的，克服现有甘蔗愈伤组织原生质体分离和纯化方法存在质量和数量上的不足的问题，为甘蔗外源基因表达、启本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘蔗愈伤组织原生质体的分离与纯化方法，包括甘蔗愈伤组织培养、甘蔗悬浮细胞培养、甘蔗原生质体的分离和甘蔗原生质体的纯化；其特征在于操作步骤如下：(1)？甘蔗愈伤组织培养取消毒后的甘蔗心叶组织，无菌条件下切成1？2？cm厚的薄片，在MS3固体培养基上，28？℃暗培养1？2个月，每隔2周继代1次；所述MS3固体培养基为：MS+0.5？g/L水解酪蛋白+3？mg/L？2,4？D+30？g/L蔗糖+6.0？g/L琼脂粉；MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；(2)？甘蔗悬浮细胞培养将甘蔗胚性愈伤组织捣碎后，在MS3液体培养基中，28℃暗培养2周，纱布过滤，滤液静置1...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高三基，米尔科夫艾瑞克，朴钟元，陈如凯，傅华英，付为林，林艺华，吴小斌，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：