楸树内生真菌的原生质体的制备方法技术

技术编号：9986682 阅读：175 留言：0更新日期：2014-05-01 14:46

本发明专利技术提供了一种楸树内生真菌的原生质体的制备方法；所述方法包括以下步骤：步骤1，菌丝体的制备；步骤2，原生质体的制备；步骤3，原生质体纯化；步骤4，原生质体再生。本发明专利技术所述方法制备的原生质体数量较多，可达到6×107个/毫克菌丝，获得的原生质体的活力较高，再生率可达到1.2%。本发明专利技术选择培养12-24h的菌丝体，真菌处于快速生长期，生长快，细胞壁易于酶的裂解，释放出的原生质体的数量多，不易裂解，活力高。本发明专利技术选取5～30mg/ml?Glucanex复合酶作为细胞壁裂解酶液，裂解效率高，原生质体释放数量多。本发明专利技术选用KCl或NaCl作为渗透压稳定剂，保证了原生质体制备数量与原生质体的稳定。