一种小桐子组培苗原生质体的制备及基因瞬时表达的方法技术

本发明专利技术属于分子生物学及基因工程技术领域，公开了一种小桐子组培苗原生质体的制备及基因瞬时表达的方法。其包括以下操作步骤：将小桐子组培苗叶片切成0.5～1mm宽的叶条，置于酶解液中避光、22～25℃静置酶解6～7h，过滤洗涤原生质体，加入一定的质粒DNA、原生质体和PEG4000/Ca2+溶液处理后，培养18～40h后在激光扫描共聚焦显微镜下观察。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学及基因工程
，特别涉及。
技术介绍
小桐子(Jatropha carcas L.)，又名麻疯树，为大戟科麻风树属落叶灌木或小乔木。小桐子种子含油率高，经过加工可制成生物柴油，有着较强的市场开发潜力和应用前景。瞬时表达技术是在相对短的时间内将目标基因转入靶细胞内，获得该基因短暂的高水平表达的技术，是一种快速、方便的研究基因-蛋白质的方法。目前，关于获得小桐子原生质体的技术信息十分匮乏。因此，我们通过已有的拟南芥原生质体制备的方法，调整改进后可以获得小桐子高活性的原生质体，可以用于瞬时表达分析研究。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供。本专利技术的目的通过下述技术方案实现:，包括以下操作步骤:(I)称取1.82g甘露醇溶于20ml双蒸水中，配制甘露醇溶液装在灭菌小烧杯里；(2)在超净台上取小桐子组培苗叶片，用刀片切成0.5?Imm宽的叶条，将切好叶条放入甘露醇溶液中；(3)将叶条捞出放入预先配好的装有15ml酶解液的50ml锥形瓶中，避光，22?25°C静置酶解6?7h ;当酶解液变绿时摇晃锥形瓶，促使原生质体释放本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小桐子组培苗原生质体的制备及基因瞬时表达的方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)称取1.82g甘露醇溶于20ml双蒸水中，配制甘露醇溶液装在灭菌小烧杯里；(2)在超净台上取小桐子组培苗叶片，用刀片切成0.5～1mm宽的叶条，将切好叶条放入甘露醇溶液中；(3)将叶条捞出放入预先配好的装有15ml酶解液的50ml锥形瓶中，避光，22～25℃静置酶解6～7h；当酶解液变绿时摇晃锥形瓶，促使原生质体释放出来；(4)加入15ml等体积预冷的W5溶液，用100目的滤网进行过滤，滤液于50ml圆底离心管中置于冰上；(5)用离心力80g离心2min，去除上清，沿管壁加入5ml预冷的W5溶液，冰上放置30...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭昌操，杨紫薇，刘思雯，韩鸿均，刘应波，任陈希，白雪，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44