西红柿染色体图及拷贝脱氧核糖核酸库制造技术

本发明专利技术提供了一种用大量ｃ＿ＤＮＡ克隆和同功酶标记物的位置标识的蕃茄（西红柿）染色体图。ｃ＿ＤＮＡ克隆存放在ＩｎＶｉｔｒｏＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，通过找出蕃茄植物所需育种特性之间的连锁，可将所说ｃ＿ＤＮＡ克隆连同图一起使用。建立这种连锁后，即可用来快速确定蕃茄（西红柿）植株中有无这种所需的特性，并将所需的特性用基因渗入法渗入到其他蕃茄品种中。（*该技术在2007年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及使用重组DNA克隆的遗传工程及植株的培育。人们已经发展了多种生物体的基因连锁图，它们把特定的染色体或染色体片段渗入到种种遗传背景中时具有不可估量的价值(参见Rick，C.M.及Khush，G.S(1969)“西红柿基因组中细胞基因组的探索”45～68页，发表在“遗传学讲座”(Genetic Lectures Bogart编)，俄勒岗州立大学出版社，Corvalis;以及C.Rhyne(1960)”由于二倍体种基因转移而产生的异源四倍体G.hirsutum L.连锁群中Gossypium Ⅱ重组值改变的连锁研究”。遗传学45673～683页。有关基因的定位也可以用做过图谱的标记物通过连锁分析来实现，如Patterson，E.B(1982)“用染色体畸变及多标记物品系作基因图谱”85～88页(发表在“生物研究用玉米”，W.F.Sheridan编，North Dakota大学，大学出版社出版)一文所述。这里加以引用作为参考。在高等植物中，西红柿(Lycopersicon esculentum)是具有最详尽的连锁图的一个。在西红柿中曾使用标记物位点来组成染色体替代体系(Rick，C.M.(1969)“Solanum Pennellii染色体基因有控制地有渗入Lycopersicon esculentum分离及重组”，遗传学62753～768页;以及Rick，C.M.(1971)“二倍体植株种基因组的某些细胞基因特征”，Stadler Symposia卷1/2153～174页，以及在自不亲和性中作为基因鉴别的一种辅助方法(Tanksley，S.D及Loaiza-Figueroa，F.(1985)“遗传自不亲和性被Lyco-per-sicon Peruvianum中染色体1上的一个单一的主位点所控制”，Proc.Nat′l.Acad.Sci.825093～5096页)具有经济价值的特定基因渗入诸如雄不育性(Tanksley，S.D.，Rick，C.M及Vallejos，C.E(1964)，“西红柿中核的雄不育位点及一个酶标记物之间的紧密连锁”Theor.Appl.Genet.68109～113页)及nematode抗性(Medina-Filho，H.P(1980)，“染色体6上的APS-1，mi及其他标记物的连锁”，Rep.Tomato Genet.Coop.3026～28页)也由于使用比较容易选择的连锁标记物位点而比较方便。虽然西红柿的遗传图上有着良好分布的标记物，但是，它和大多数植株种一样，是由基本上是形态突变位点所组成。一般说来，这些形态标记物在植株培育的选择方案中是没有什么用处的，因为它们通常是隐性的，并且它们具有不希望有的表(现)型。电泳以及酶专门染色剂的发展扩大了西红柿基因图并且提供了许多新的标记物，它们的变异体往往对于显性(型)没有显著的影响。这些同功酶标记物虽然非常有用，但为数极少而且只能用于西红柿基因组的一小部分(Tanksley，S.D.及Rick，C.M.(1980)，“西红柿的同功酶基因连锁图在遗传学及育种中的应用”，Theor.Appl.Genet.57161～170页;Tanksley，S.D.(1985)，“西红柿中的酶编码基因(Lycopersicon esculentum)，Isozyme Bulletin1843～45页)。由于这些原因，人们希望发展一种基于从信使核糖核酸RNA(cDNA)中衍生的单拷贝DNA序列的更为详尽的连锁图。近年来，相应于特定染色体位点的单拷贝DNA序列曾在人身上用作遗传标记物(Botstein，D.White，R.L.，Skolnick，M.及Davis，R.(1980)，“用限制片段长度多形质组成人的遗传连锁图”，Am.J.Hum.Genet.32314～331页;Jeffreys，A.J.，Wilson，V.及Thein，S.L.(1985)，“人类DNA中的超可变‘小型卫星’区域”，Nature 31467～73页;及White，R.，Leppert，M.，Bishop，D.T.，Barker，D.，Berkowiz，J.，Brown，C.，Callahan，P.，Holm，T.，Jerominski，L.(1985)，“用DNA标记物组成人类染色体连锁图”，Nature 313101～105页;有人提出此法可用于植物(Helentjaris，T.G.，PCT应用，发表于1984年12月6日，“植物遗传图谱(遗传基因作图)及杂交育种”方法)。使用这种方法时，先用一种限制性核酸内切酶消化从被分析的个体中取得的DNA来检测出等位基因变异，然后用电泳将所得片断分离并转移到膜上。然后，用放射性同位素标记的、克隆及同种序列探查过滤器而鉴别等位基因片段。用这种方法探查得的遗传变异常常被称作限制片段长度多形质(RFLP)。RFLP的数目实际上是无限制的。它们对显性型没有任何影响。它们是等显性并且是以孟德尔方式遗传的(Bostein等，1980，Supra)。用RFLP检测的位点图谱工作(作图工作)在人体上进展得很快，所得到的信息已开始在若干遗传疾病的产前脱光期的诊断方面得到应用(Murray，J.M.，Davis，K.E.，Harper，P.s.，Meredith，L.，Muller，C.R.，Williamson，R.(1982)，“X染色体短臂上克隆DNA序列与Duchenne遗传性肌肉萎缩症之间的关系”，Nature 30069～70页)。虽然人类(方面的)遗传学家采用RFLP迅速地发展基因图分析(Solomon，F.及Goodfellow，P.(1983)，“人类基因图不断向前展开”，Nature 306223～224页)，但是，到目前为止，在高等植物的基因图分析方面，进展很少(Polans，N.O.，Weeden，N.F.及Thompson，W.F.(1985)，“豌豆中rbcs及cab多基因家系的遗传、机体组成及基因图分析”，Proc.Nat′l.Acad.Sci.325083～5087页)。特别要提一提的是，对西红柿植株的作过基因图分析的克隆DNA序列(顺序)前此没有有过任何报道。西红柿中的DNA标记物将为许多单纯遗传特征的早期筛选以及深入了解复杂特性的遗传机体形成提供一个基础。这样的筛选过程可以用于将人们所需要的特征用基因渗入法渗入到西红柿的种种品种中去。基于DNA序列的、良好的分布的连锁图可以提供有关植株基因组的演化。杂交到各探查物上的植株DNA片断可以被认为是真正同源的，这样，复制物及多基因系成员的基因组的分布就可以在不同种类或种属之间进行比较。本专利技术提供标记有大量cDNA克隆和同功酶标记物位点的西红柿染色体的基因图。cDNA克隆存放在In Vitro International并且可以通过找出西红柿植株及所需或可观察的培育特性之间的连锁而与图共同使用。这些连锁是通过本
内都熟悉的方法来建立的，即将所需特性的百分重组和cDNA标记物克隆进行比较，并且把具有所需特性的，百分重组值最低的，最好低于30本文档来自技高网...

【技术保护点】
一对应于西红柿（蕃茄）ＤＮＡ的ｃＤＮＡ库，包括至少两个选自一个组群的克隆，该组群由下列组成：ＣＤ１５；ＣＤ２４；ＣＤ４７；ＣＤ１２；ＣＤ９；ＣＤ５２；ＣＤ１６；ＣＤ２０；ＣＤ４４；ＣＤ２８；ＣＤ４９；ＣＤ３７；ＣＤ１；ＣＤ３３；ＣＤ ３０；ＣＤ１１；ＣＤ４３；ＣＤ３５；ＣＤ５０；ＣＤ１３；ＣＤ３１；ＣＤ６；ＣＤ２９；ＣＤ５１；ＣＤ５９；ＣＤ５５；ＣＤ４１；ＣＤ６４；ＣＤ３８；ＣＤ１４；ＣＤ６１；ＣＤ５８；ＣＤ６５；ＣＤ４８；ＣＤ５４；ＣＤ５７；ＣＤ６２；ＣＤ４６ ；ＣＤ６０；ＣＤ７；ＣＤ４０；ＣＤ２１；ＣＤ５６；ＣＤ４５；ＣＤ３４；ＣＤ２７；ＣＤ４；ＣＤ３；ＣＤ８；ＣＤ２５；ＣＤ４２；ＣＤ５；ＣＤ３２；３－９１；３－１６７；３－１８５；３－４８；３－１３１。

【技术特征摘要】
US 1986-3-20 841,5941.一对应于西红柿(蕃茄)DNA的cDNA库，包括至少两个选自一个组群的克隆，该组群由下列组成CD15；CD24；CD47；CD12；CD9；CD52；CD16；CD20；CD44；CD28；CD49；CD37；CD1；CD33；CD30；CD11；CD43；CD35；CD50；CD13；CD31；CD6；CD29；CD51；CD59；CD55；CD41；CD64；CD38；CD14；CD61；CD58；CD65；CD48；CD54；CD57；CD62；CD46；CD60；CD7；CD40；CD21；CD56；CD45；CD34；CD27；CD4；CD3；CD8；CD25；CD42；CD5；CD32；3-91；3-167；3-185；3-48；3-131。2.权利要求1的cDNA库，其中所述的两个克隆选自同一染色体。3.权利要求1的cDNA库，该库包括所有权利要求1的克隆。4.一选自组群的cDNA克隆，该组群包括CD15;CD24;CD47;CD12;CD9;CD52;CD16;CD20;CD44;CD28;CD49;CD37;CD1;CD33;CD30;CD11;CD43;CD35;CD50;CD13;CD31;CD6;CD29;CD51;CD59;CD55;CD41;CD64;CD38;CD14;CD61;CD58;CD65;CD48;CD54;CD57;CD46;CD60;CD7;CD40;CD21;CD56;CD45;CD34;CD27;CD4;CD3;CD8;CD25;CD42;CD5;3-91;CD32;3-167;3-185;3-48;3-131.5.一包含权项要求4的一个cDNA克隆的质粒。6.权利要求5的质粒包含pBR322或pUC8。7.一对测定西红柿染色体上的一西红柿DNA片段的原位置或位置有用的染色体图，该图包括至少一个染色体或一未定位连锁群的图示，其中的标记物按序列次序彼此相隔的距离以图单位(CM)表示如下染色体1CD15-22cM-CD24-17cM-CD47-4cM-CD12-27cM-CD9B和/或CD52A-5cM-CD9A和/或CD16B-5cM-CD16A和/或CD20-10cM-CD44-1cM-CD28;染色体2CD49B-1cM-CD37-7cM-CD1-7cM-3-91-15cM-CD33A-9cM-CD30B-14cM-3-131和/或CD11-25cM-CD43-4cM-CD35-6cM-CD9C-27cM-CD30A和/或CD33B;染色体3CD50-2cM-3-167-7cM-CD13A和/或CD31B和/或CD6B和/或CD29C和/或CD52B-17cM-CD51;染色体4CD59-5cM-CD49A-39cM-CD55;染色体5CD41-9cM-CD64-8cM-CD31A-10cM-CD38B;染色体6CD14-8cM-CD13B-18cM-CD29B;染色体7CD61-3cM-CD58和/或CD65-8cM-CD48-57cM-CD54和/或CD57;染色体8CD46-10cM-CD60-10cM-CD7-10cM-3-185-26cM-CD40-1cM-CD21A和/或CD16C;染色体10CD56-7cM-CD45-15cM-CD38A-10cM-CD34B-10cM-CD34A;染色体12CD21B-1cM-CD27-7cM-CD4B和/或CD16D-2cM-CD6A-53cM-3-48.未定位的连锁群1)CD32A-11cM-CD3-3cM-CD82)CD29D-9cM-CD25B3)CD42-8cM-CD25A4)CD5-5cM-CD32B8.权项要求7所述的图还包括如下的同功酶染色体1Idh-1-18cM-Prx-1-21cM-CD15-18cM-sdkh-1-4cM-CD24-17cM-CD47-4cM-CD12-27cM-CD9B和/或CD52A-5cM-CD9A和/或CD16B-5cM-CD16A和/或CD20和/或Act-3-10cM-CD44-1cM-CD28-18cM-Est-3;染色体2R45S和/或CD49B-1cM-CD37-7cM-CD1-7cM-Rbcs-1和/或3-91-15cM-CD33A-9cM-CD30B-14cM-Cab-1和/或3-131和/或CD11-11cM-Est-7-8cM-Prx-2-6cM-CD43-4cM-CD35-6cM-CD9C-13cM-Rbcs-3-14cM-CD30A和/或CD33B;染色体3Cab-3-12cM-Pgm-1-18cM-CD50-2cM-Rbcs-2和/或3-167-7cM-CD13A和/或CD31B和/或CD6B和/或CD29C和/或Act-4和/或CD52B-17cM-CD51;染色体46Pgdh-1-11cM-CD59-5cM-CD49A-11cM-Act-1和/或Tpi-2-15cM-Pgm-2-4cM-Adh-1-9cM-Act-10和/或CD55;染色体5CD41-9cM-CD64-8cM-CD31A-10cM-CD38B;染色体6CD14-8cM-CD13B-7cM-Aps-1-11cM-CD29B;染色体7CD61-3cM-CD58和/或CD65-8cM-CD48-16cM-Got-3-7cM-Aco-2-18cM-Got-2-7cM-Cab-4-9cM-CD54和/或CD57;染色体8CD46-10cM-CD60-10cM-CD7-10cM-Cab-2和/或3-185-12cM-Aps-2-14cM-...

【专利技术属性】
技术研发人员：史蒂芬D坦克斯列，罗勃特博纳滋基，
申请(专利权)人：卢布瑞佐遗传公司，新墨西哥州大学董事会董事，
类型：发明
国别省市：US[美国]