一种高免疫活性花生肽的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高免疫活性花生肽的制备方法，包括下述步骤：(1)以冷榨花生粕和热榨花生粕为原料，并对原料进行预处理；(2)将预处理后的原料进行半干法一次酶解，得到酶解液1；(3)将酶解液1进行微生物一次发酵；(4)将一次发酵后的原料平均分成三份，分别加入无花果蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行同步二次酶解，得到酶解液2；(5)向酶解液2中加入复合蛋白酶，进行三次酶解，酶解后灭酶，得到酶解液3；(6)将酶解液3进行微生物二次发酵；发酵液经超滤分离、脱色、浓缩与干燥，即得到高免疫活性花生肽。本发明专利技术能有效提高产品的免疫活性，有效去除黄曲霉毒素，具有较高的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种高免疫活性花生肽的制备方法
本专利技术涉及花生深加工
，具体涉及一种高免疫活性花生肽的制备方法。
技术介绍
花生是中国重要的油料作物之一，产量居世界首位，年产量约1700万吨。在我国，有少量花生被直接食用，或被制作成花生酱、炒制花生果等花生休闲食品，有大约50％-60％的花生被采用冷榨或热榨等方式制取花生油，制油后产生大量的副产物花生粕。由于冷榨方式制取的花生油油香不足，且油提取率低，因此我国的花生粕多以热榨花生粕为主，而热榨工艺使得花生蛋白热变性严重，其营养价值与功能特性均受到不同程度的影响，目前热榨花生粕大都作为动物饲料处理，产品附加值低，资源浪费严重。花生粕内富含蛋白质，含量约40-50％。花生蛋白中富含人体必须氨基酸，具有极高的营养价值。然而，花生蛋白的溶解性、起泡性、可吸收性较差，又具有一定的致敏性，很大程度限制了其在食品工业中的应用。将花生蛋白改性形成的小分子肽，具有良好的溶解性、起泡性、可吸收性，而且致敏性低，比蛋白质和氨基酸更易消化吸收，能增强肌肉和体能，能促进肌细胞复原，能帮助机体消除疲劳，快速恢复体力，可作为优质蛋白质原料，应用于食品、保健品及特殊医疗配方食品中，因此，研发具有高生理活性的花生肽意义重大。制备花生肽的方法主要有三类：一是通过化学试剂改性花生蛋白制备；二是通过酶法水解花生蛋白制备；三是通过微生物发酵花生蛋白制备。由于通过化学试剂改性技术制备，环境污染严重，现已很少采用。微生物发酵及酶法水解花生蛋白制备花生肽，因其技术简单、安全、高效，目前被广泛采用。在微生物发酵及酶法水解工艺中，发酵菌种的选择、发酵条件的确定及酶种类、酶解条件的确定至关重要，这些将直接影响花生肽产品的氨基酸组成、风味及生物活性。已公开专利及文献中均采用单因素及正交实验、响应面分析法等确定酶解花生蛋白最佳酶种类及酶解条件，工作量大，重复实验多，程序复杂。发酵方法普遍采用固态发酵或液态发酵对花生粕进行发酵。另外，已公开专利及文献中制备花生肽采用的花生粕原料大都为冷榨花生粕，热榨花生粕利用较少，同步以冷榨、热榨花生粕为原料制备高免疫活性花生肽未见报道。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种高免疫活性花生肽的制备方法。本专利技术所提供的高免疫活性花生肽的制备方法，包括下述步骤：(1)以冷榨花生粕和热榨花生粕为原料，并对原料进行预处理；(2)将预处理后的原料进行半干法一次酶解，得到酶解液1；(3)将酶解液1进行微生物一次发酵，发酵温度为30-50℃，发酵时间为1-9天；(4)将一次发酵后的原料平均分成三份，分别加入无花果蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行同步二次酶解，酶解时间为3-6h；同步二次酶解结束后离心，收集上清液，将三份酶解液的上清液混合，40-60℃继续酶解1-9h，酶解结束后灭酶，得到酶解液2；(5)向酶解液2中加入复合蛋白酶，进行三次酶解，酶解后灭酶，得到酶解液3；(6)将酶解液3进行微生物二次发酵，发酵温度为30-50℃，发酵时间为3-6天；发酵液经超滤分离、脱色、浓缩与干燥，即得到高免疫活性花生肽。优选的，步骤(1)中，原料预处理的方法为：将冷榨花生粕和热榨花生粕晾晒、烘干后以等质量比混合，粉碎，过30-70目筛，然后以10-30cm厚度铺开，依次紫外辐照10-60min，脉冲强光辐照10-60s。花生产后贮存、原料处理、精深加工等过程中，均可能被霉菌污染导致黄曲霉毒素超标。如果以被黄曲霉毒素污染的花生仁榨油，15-20％的黄曲霉毒素会留在油中，80-85％的黄曲霉毒素则留在了花生粕中。因此，以花生粕为原料制备花生肽时需要对原料进行预处理，以降解原料中的黄曲霉毒素。紫外线辐照可以满足灭菌消毒的要求，但辐照时间过长会造成原料产生腐败气味；微波辐照和高剂量的射线辐照会对原料的蛋白成分造成损失；因此采用单一的方法均难以达到毒素的脱除要求。本专利技术在原料的预处理过程中，为去除原料中可能存在的黄曲霉毒素，本专利技术采用阳光下晾晒、烘干、紫外-脉冲强光辐照相结合的方法，为避免对原料的品质产生影响，本专利技术还对紫外辐照和脉冲强光辐照的时间进行了优选，结果发现，紫外辐照10-60min，脉冲强光辐照10-60s能够有效的降解原料中的黄曲霉毒素，同时不会对原料的品质产生影响。低于这一辐照时间，则黄曲霉毒素的降解效果不理想；高于这一辐照时间，则原料会出现腐败气味，原料中的蛋白成分也会变性或失活。优选的，步骤(2)中，半干法一次酶解的方法为：将预处理后的原料隔水蒸煮30-60min，降温至40-70℃后向原料中加入纤维素酶和高温淀粉酶，搅拌均匀，恒温3-12h后再次隔水蒸煮60-180min，冷却至35-50℃。优选的，步骤(3)中，微生物一次发酵所采用的发酵微生物为：面包酵母、纳豆菌和枯草芽孢杆菌以等比例混匀；发酵微生物的加入量为1-10％(质量分数)。优选的，步骤(3)中，发酵过程中每1-6h对原料搅拌一次；发酵结束后调温至100℃灭菌15-30min。优选的，步骤(4)中，无花果蛋白酶的加入量为1-5％(质量分数)，在60-70℃，pH4-8的条件下进行酶解；碱性蛋白酶的加入量为1-5％(质量分数)，在40-60℃，pH7-9的条件下进行酶解；中性蛋白酶的加入量为1-5％(质量分数)，在40-60℃，pH5-8的条件下进行酶解。优选的，步骤(5)中，所述复合蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶中的任意三种以等比例混合；所述复合蛋白酶的加入量为1-10％(质量分数)。优选的，步骤(5)中，三次酶解的pH为5-8，温度为40-60℃，酶解时间为1-9h。优选的，步骤(6)中，微生物二次发酵所采用的发酵微生物为枯草芽孢杆菌；枯草芽孢杆菌的加入量为1-10％(质量分数)。优选的，上述制备方法中，采用微量热-酶解离偶联技术确定半干法一次酶解、二次酶解和三次酶解的最佳酶种类及最适酶解条件；具体的，利用微量热技术分别测出中性蛋白酶、胰蛋白酶、无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶等在不同温度(30-100℃)，不同pH(pH5.0-pH9.7)时酶解花生蛋白的热功率—时间曲线，解析曲线，定量获得各酶解反应的米凯利斯常数和最大反应速率，根据获得参数确定酶种类及酶解条件。微量热技术可以实时获取酶促反应全过程的热量变化，准确定量确定最适酶解条件，灵敏度高，操作简单，无需多次重复。本专利技术首次将微量热技术用于确定花生蛋白最佳用酶及最适酶解条件，取得了非常好的效果。上述方法制备的高免疫活性花生肽也是本专利技术的保护范围。本专利技术制备的花生肽的分子量集中分布于1000Da以下，其中分子量小于1000Da占99.2％；短肽得率达90.12％，水解度达40.65％；并且具有高免疫活性，吞噬细胞吞噬率可达57.31％，IgG含量可达120.03mg/100ml，NK细胞活性可达26.58％。基于本专利技术制备的花生肽的高免疫活性；以及分子量小，吸收率高；不含黄曲霉毒素，安全性高的特性，本专利技术进一步提供了上述花生肽在制备增强免疫力的功能性医用食品、药品或保健品中的应用。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术以冷榨、热榨花生粕为原料制备高免疫活性花生肽，解决了热榨花生粕因花生蛋白容易发生变性，不易本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高免疫活性花生肽的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)以冷榨花生粕和热榨花生粕为原料，并对原料进行预处理；(2)将预处理后的原料进行半干法一次酶解，得到酶解液1；(3)将酶解液1进行微生物一次发酵，发酵温度为30‑50℃，发酵时间为1‑9天；(4)将一次发酵后的原料平均分成三份，分别加入无花果蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行同步二次酶解，酶解时间为3‑6h；同步二次酶解结束后离心，将三份酶解液的上清液混合，40‑60℃继续酶解1‑9h，酶解结束后灭酶，得到酶解液2；(5)向酶解液2中加入复合蛋白酶，进行三次酶解，酶解后灭酶，得到酶解液3；(6)将酶解液3进行微生物二次发酵，发酵温度为30‑50℃，发酵时间为3‑6天；发酵液经超滤分离、脱色、浓缩与干燥，即得到高免疫活性花生肽。

【技术特征摘要】
1.一种高免疫活性花生肽的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：(1)以冷榨花生粕和热榨花生粕为原料，并对原料进行预处理；(2)将预处理后的原料进行半干法一次酶解，得到酶解液1；(3)将酶解液1进行微生物一次发酵，发酵温度为30-50℃，发酵时间为1-9天；(4)将一次发酵后的原料平均分成三份，分别加入无花果蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶进行同步二次酶解，酶解时间为3-6h；同步二次酶解结束后离心，将三份酶解液的上清液混合，40-60℃继续酶解1-9h，酶解结束后灭酶，得到酶解液2；(5)向酶解液2中加入复合蛋白酶，进行三次酶解，酶解后灭酶，得到酶解液3；(6)将酶解液3进行微生物二次发酵，发酵温度为30-50℃，发酵时间为3-6天；发酵液经超滤分离、脱色、浓缩与干燥，即得到高免疫活性花生肽。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，原料预处理的方法为：将冷榨花生粕和热榨花生粕晾晒、烘干后以等质量比混合，粉碎，过30-70目筛，然后以10-30cm厚度铺开，依次紫外辐照10-60min，脉冲强光辐照10-60s。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，半干法一次酶解的方法为：将预处理后的原料隔水蒸煮30-60min，降温至40-70℃后向原料中加入纤维素酶和高温淀粉酶，搅拌...

【专利技术属性】
技术研发人员：李向阳，吴澎，代养勇，陈建省，张慧，赵路苹，丁秀臻，张小村，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37