一种具有ACE抑制功能和DPP‑IV抑制功能的蛹虫草蛋白肽制造技术

本发明专利技术提供了一种具有ACE抑制功能和DPP‑IV抑制功能的蛹虫草蛋白肽，其制备方法包括：(1)蛹虫草打成粉加水，在高温下处理、得到蛹虫草液；(2)超声处理蛹虫草液；(3)加入复合蛋白酶酶解，同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。本发明专利技术方法操作简单，酶用量少，制备过程无需添加酸或碱调节pH值，且不添加任何添加剂，较好地保持产品的功能特性，得率高，风味好，所得的蛹虫草蛋白肽具有优异的ACE抑制和DPP‑IV抑制功能，广泛应用于特需食品和营养食品的制造。

【技术实现步骤摘要】
一种具有ACE抑制功能和DPP-IV抑制功能的蛹虫草蛋白肽
本专利技术涉及食品加工
，具体地涉及一种具有ACE抑制和DPP-IV抑制功能的蛹虫草蛋白肽及其制备方法。
技术介绍
血管紧张素转化酶(AngiotensinIconvertingenzyme，ACE)为肾素-血管紧张素系统的关键酶。血管紧张素原在肾素的作用下转化为血管紧张素I，血管紧张素I在ACE的作用下转化为血管紧张素II，刺激血管收缩，造成血压上升。抑制ACE的活性对降低血压有着积极的作用，因而开发有效的ACE抑制剂引起人们的极大关注。虽然来源于食物的ACE抑制肽比人工合成的ACE抑制剂作用弱，但是它有其独特的优点，不会产生降压过度的问题，安全性高，无副作用，除降压功能外，往往同时具有免疫促进、易消化吸收等功能。由于药物疗法存在副作用，天然食物中的降血压功能因子的开发利用将成为今后高血压非药物治疗的重要部分。现有技术中关于ACE抑制肽开发的报道，主要是通过酶解的方法从水产动物体或牛乳乳清蛋白源获得ACE抑制肽，酶解过程通常都需要通过添加酸或碱来调节体系的pH值，这无疑影响了获得的ACE抑制肽产品的功能特性，且增加了操作的繁琐程度，这些方法均不同程度地增加了操作步骤和生产成本，制约了产业化规模化ACE抑制肽的生产及蛋白肽的得率。目前国内外专利中未见利用蛹虫草为原料制备同时具有DPP-IV抑制功能和ACE抑制功能的蛹虫草蛋白肽的报道。降血糖功能因子是指能降低糖尿病患者血糖浓度以及改善其症状的生物活性成分。目前研究较多的天然产物类降糖因子、矿物质类降糖因子、维生素类降糖因子，其作用机理各不相同。天然产物类降糖因子按化学结构可分为黄酮类、活性多糖类、生物碱类、皂甙类、萜类、多肽类等。自人工合成胰岛素以来，磺脲类药物、双胍类、胰岛素增敏剂、糖抑制剂等各种口服或注射的药物相继问世，然而化学药物常产生一定的毒副作用，天然降血糖成分具有作用温和而持久，性质稳定，几乎无毒性反应，还可多种降糖成分并存，综合起作用等优点，备受患者以及和医学界的青睐，也成为了降血糖功能因子的主要研究方向。DPPIV二肽基肽酶(一种负责降解GLP1的酶)：其作用是使GLP-1分裂，降解，DPPIV是一种能使促胰岛素激素GLP-1迅速失活的酶。抑制DPP-IV能提高GLP-1及其他生物活性肽的激素活性，从而刺激胰岛素的释放，减少胰高血糖素的分泌，有利于2型糖尿病患者血糖高水平的调节。本专利技术针对目前蛹虫草蛋白产品开发的现状，利用蛹虫草粉为原料，在不添加任何酸和碱条件下，利用多种蛋白酶复合酶解，通过膜分离和凝胶分离技术，开发了同时具有特定降血压和降血糖功能的蛹虫草蛋白肽，建立简单高效的多功能的蛹虫草蛋白肽的制备方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是在于提供一种具有ACE抑制和DPP-IV抑制功能的蛹虫草蛋白肽。本专利技术的另一目的在于提供上述蛹虫草蛋白肽的制备方法。本专利技术的再一个目的在于提供上述蛹虫草蛋白肽的应用。为了实现上述技术目的，本专利技术提供了一种具有ACE抑制和DPP-IV抑制功能的蛹虫草蛋白肽，包括以下步骤:(1)清洁的蛹虫草打成粉加水，在高温下处理、得到蛹虫草液；(2)超声处理蛹虫草液；(3)加入复合蛋白酶酶解，酶解过程同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。步骤(1)水与蛹虫草粉的质量比为15-20:1，所述高温下处理为100-121℃搅拌1-4小时。步骤(2)超声处理方法为将步骤(1)得到的蛹虫草液调至65-75℃，80-100kH的超声频率处理15-25min。本专利技术通过大量实验发现，蛹虫草液温度调至65-75℃进行80-100kH超声处理，效果最好，能够较好地改变蛹虫草蛋白的组织结构，使下面酶解步骤缩短酶解时间和使用较少的酶量，就能够获得优质的蛋白肽。步骤(3)按照蛹虫草液总重量的0.2-0.8％的重量百分比加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶组成，三者质量比为1：(1-2):1。步骤(3)的酶解条件为50-65℃酶解1.5-3.5小时；步骤(3)所述超声处理是25-40kH处理；步骤(3)酶解之后于90-95℃下保温10-20min，冷却至65-75℃，过滤分离，收集分离液。在本专利技术的实施例中，是通过硅藻土进行过滤分离，然后收集分离液。本领域技术人员可以采用任何具有等同效果的分离方式进行过滤分离。步骤(4)的两步超滤法为先用孔径为5000D的膜超滤，再用孔径为2000D的膜超滤，得到分子量小于2000D的蛋白肽。具体地，是利用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于5000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为2000道尔顿的膜将分子量小于1500道尔顿的蛋白肽分离出来。步骤(5)滤液过柱分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰，浓缩、冷冻干燥得到蛹虫草蛋白肽。具体地，取分子量为小于2000的蛋白肽液，再经过SephadexG-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到蛹虫草蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第9-10分钟洗脱出来的肽液；将步骤(5)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到蛹虫草蛋白肽粉。通过LC-MS/MS对蛹虫草蛋白肽的主要成分进行测定，其氨基酸序列为NVEIDPE(天冬酰胺-缬氨酸-谷氨酸-异亮氨酸-天冬氨酸-脯氨酸-谷氨酸)、SIIAEVK(丝氨酸-异亮氨酸-异亮氨酸-丙氨酸-谷氨酸-缬氨酸-赖氨酸)、RDLTDY(精氨酸-天冬氨酸-亮氨酸-苏氨酸-天冬氨酸-酪氨酸)的肽的含量为85～95％，其中NVEIDPE(20-27％)、SIIAEVK(35-45％)、RDLTDY(22-29％)。所述％均为质量百分比。上述制备方法制备得到的蛹虫草蛋白肽属于本专利技术的保护范围。本专利技术通过实验发现，本专利技术上述方法制备得到的蛹虫草蛋白肽具有优异的DPP-IV抑制和ACE抑制功能。进而，本专利技术提供了该蛹虫草蛋白肽在制备降血压或降血糖药物中的应用。含有本专利技术方法制得的蛹虫草蛋白肽的食品、保健品或药物也属于本专利技术的保护范围。本专利技术发现氨基酸序列如SEQIDNO.1-3所示的肽均具有ACE抑制功能和DPP-IV抑制功能。进一步地，本专利技术提供了氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示的肽在制备食品、保健品或药物中的应用。本专利技术的优点在于：(1)本专利技术提出蛹虫草蛋白肽制备全过程同步利用不同频率的超声波处理，制备方法简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。(2)开发的蛹虫草蛋白肽具有很好的DPP-Ⅳ抑制和ACE抑制功能，制得的蛹虫草蛋白肽DPP-IV抑制活性(IC50值)低于190μg/mL,ACE抑制活性(IC50值)低于305μg/mL，开发的蛹虫草SIIAEVK肽DPP-IV抑制活性(IC50值)为98μg/mL，NVEIDPE肽ACE抑制活性(IC50值)为208μg/mL。(3)本专利技术利用特定频率超声波技术处本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有ACE抑制和DPP‑IV抑制功能的蛹虫草蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)清洁的蛹虫草打成粉加水，在高温下处理、得到蛹虫草液；(2)超声处理蛹虫草液；(3)加入复合蛋白酶酶解，酶解过程同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。

【技术特征摘要】
1.一种具有ACE抑制和DPP-IV抑制功能的蛹虫草蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)清洁的蛹虫草打成粉加水，在高温下处理、得到蛹虫草液；(2)超声处理蛹虫草液；(3)加入复合蛋白酶酶解，酶解过程同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)水与蛹虫草粉的质量比为15-20:1，所述高温下处理为100-121℃搅拌1-4小时。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)超声处理方法为将步骤(1)得到的蛹虫草液调至65-75℃，80-100kH的超声频率处理15-25min。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)按照蛹虫草液总重量的0.2-0.8％的重量百分比加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张恒，罗永康，刘怀高，
申请(专利权)人：安徽国肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34