用于治疗过敏反应的合成肽免疫原制造技术

本发明专利技术涉及经过使用以放射状分枝的多聚体形式（如分枝的八聚体或十六聚体肽）或线型排列的单体形式的合成肽免疫原组合物来抑制肥大细胞激活和减少过敏原诱导的ＩｇＥ产生在包括人类的健康动物中诱导抗人ＩｇＥ重链中的效应物部位，即ε－链ＣＨ↓［４］区中的一个位点的高滴度抗体之生产的方法。还涉及使用这类最佳设计的，无载体蛋白的ＩｇＥε－链相关性免疫原作为合成疫苗中的关键成分对治疗过敏反应提供免疫疗法。该肽含有免疫刺激物序列，包括以特定方向串联连接的内在辅助Ｔ细胞抗原决定基，以帮助刺激对ＩｇＥＣＨ↓［４］区的免疫反应。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
相关申请的交叉引用这是1994年3月28日提交的未决申请系列No.08/218,461的部分继续申请，No.08/218,461是1993年5月10日提交的未决申请系列No.08/060,798的继续申请，No.08/060,798是现在已放弃的1992年3月6日提交的未决申请系列No.07/847,745的部分继续申请，No.07/847,745是现在已放弃的1991年1月4日提交的申请系列No.07/637,364的部分继续申请。本专利技术的领域本专利技术涉及线型或放射型分枝多聚体形式的合成肽的组合物用作免疫原诱导在包括人类的健康哺乳动物中产生抗人IgE重链ε-链CH4区效应物部位的高滴度抗体，并涉及使用该组合物作为疫苗对治疗过敏反应提供免疫疗法。本专利技术的背景自从本世纪早期以来，已知并实践的用于防止诸如气喘和枯草热的IgE介导的过敏反应的免疫疗法都是经过去过敏作用或脱敏作用进行的，其中给病人的过敏原的量逐渐增加，以减小随后接触该过敏原的效应(1)。这种以过敏原为基础的免疫疗法的局限性包括鉴定所涉及的过敏原存在困难以及如果鉴定了过敏原，使用鉴定的过敏原时常常引起有害反应(2)。缓解过敏反应的其它疗法是使用药品阻断负责过敏反应的细胞事件级联。这些药品包括抗组胺、减充血剂、β2拮抗剂和皮质甾类。抗-组胺、减充血剂和β2拮抗剂对过敏反应级联中IgE下游事件发生作用，称它们为姑自药物，仅针对过敏症状。预防性治疗必须作用于更接近IgE介导的过敏反应起始的细胞事件。这些姑息剂提供短期和部分的缓解。而且症状的减轻常伴随着有害副作用，例如，抗-组胺可引起烦燥或瞌睡，β2拮抗剂有时与气喘病人发病率增高有关。皮质甾类是有力的免疫抑制剂且对治疗过敏反应症状具有高效力。然而，它们刺激有害的激素活性并可能引起不良的广泛免疫抑制。为了避免已知治疗药品的缺点，更期望经针对IgE的选择性抑制来预防过敏反应。这可经过抑制IgE合成来实现，例如经过不方便的脱敏方法来实现，或经过阻断IgE-过敏原复合物刺激肥大细胞和嗜碱细胞伴随释放过敏性化学介质的去颗粒作用过程来实现。在更基础的水平上，Stanworth等(3-7)和其他人(8-13)使用合成IgEε链肽和相应的抗体研究了嗜细胞肽在细胞信号作用过程中的作用，试图解释肥大细胞和嗜碱细胞免疫学触发的分子基础。在过去二十年研究的许多IgE肽(表1)中，人ε链FcCH4区内的潜在效应物部位(Iys497一Phe506，在表2中以下面划双线表示)是十肽。已将它人工合成并用于结构/活性研究(3)。发现这种来自IgECH4区的十肽能够以类似于IgE介导的肥大细胞触发过程的非溶胞方式从分离的大鼠腹膜肥大细胞中激活剂量依赖性组胺释放(4)。通过使用ε-链十肽的多个合成类似物进行的结构-活性研究推断该肽效应物部位需要精确的结构(3，4，5)。用ε链有关的“肽-载体蛋白质连接物”免疫产生的抗-IgECH4肽抗体也用于经观察抑制活性对IgE致敏的细胞之去颗粒作用进行结构作用研究(5，11，12)。Stanworth等(14，15)建议了使用以肽为基础的疫苗对具有IgE介导的敏感性病人提供免疫疗法的可能性。他使用以前鉴定的具有序列Lys-Thr-Iys-Gly-Ser-Gly-Phe-Phe-Va1-Phe-NH2(3)(SEQ ID No1)的ε-链十肽与诸如锁眼帽贝血蓝蛋白(KLH)或结核菌素纯化蛋白衍生物(PPD)的“载体蛋白”连接，并发现“肽-载体蛋白”连接物诱导十肽特异性抗体。例如，根据其高于平均抗肽滴度选择的兔抗肽血清以滴度依赖性方式减少从大鼠腹膜肥大细胞中释放十肽诱导的组胺。这种抑制活性在大鼠被动皮肤过敏性(PCA)模型系统的体内试验中被进一步证实。当在用过敏原进行过敏性攻击前将这种兔抗肽血清给予预先应用多种过敏原致敏的大鼠时经过测量变蓝面积和评价颜色深度来估测兔抗肽血清对过敏反应的效应。在相同研究中，在使用含这种“十肽蛋白质载体连接物”的免疫原的大鼠中获得的结果初步显示了它们用作疫苗治疗过敏反应的可能性。然而，这一方法遇到了相当大的困难。这种原型“十肽-蛋白质载体连接物”疫苗的主要缺陷包括不太理想的免疫刺激能力和由载体蛋白质的组份难以限定和连接反应的不均一性引起的生产困难。还发现由这类肽-蛋白质连接物产生的所得抗血清通常含有比抗目的肽更多的抗蛋白载体(例如锁眼帽贝血蓝蛋白(KLH)上抗原决定基的抗体(5)。表1用于结构-活性研究的IgE重链肽 小肽是较差的免疫原，这对本领域的技术人员是已知的。为了使小肽具有免疫原性，通常经化学连接或经基因融合将它们与大载体蛋白质连接。然而，这些方法一般在肽上产生不可预料的构象改变。而且常常误导针对有免疫优势的载体的免疫反应。因此，期待进一步设计免疫原形成有效的疫苗以提供对过敏反应的长期缓解。在表2中，将大鼠IgEε-链(16)和小鼠ε-链(17)CH2到CH4区域的氨基酸序列与人ε-链(18)(SEQ ID NoS2-4)的氨基酸序列进行了序列对比以提供以前报道的1gE相关性肽片段的指导。应注意到在人IgEε重链上靠近252位Q的L在原始IgE骨髓瘤ND序列中不存在。导入缺口(以短条表示)以扩大同源性。匹配的同源性残基位置在方框内。已研究过结构活性的ε序列上的位置(表1)在表2中下面划线。在人IgECH4区中在结构上有活性的IgE CH4十肽序列下面划双线(SEQ ID No1)。本表中使用的氨基酸代码是A，丙氨酸；R，精氨酸；N，天冬酰胺；D，天冬氨酸；C，半胱氨酸；Q，谷氨酰胺；E，谷氨酸；G，甘氨酸；H，组氨酸；I，异亮氨酸；L，亮氨酸；K，赖氨酸；M，甲硫氨酸；F，苯丙氨酸；P，脯氨酸；S，丝氨酸；T，苏氨酸；W，色氨酸；Y，酪氨酸；V，缬氨酸。表2 表2(续) 参考文献1.Noon L.″prophylactic inoculation against hay fever.”Lancet，i1572-1573(1911).2.World Health Organization and International Union ofImmunological Societies Working Group ReportCurrentstatus of allergen immunotherapy.Lancet，i259-261(1989).3.Stanworth，Kings，Roy，et al.Biochem.J.，180665-668(1979).4.Stanworth.Mol. Immunol.，211183-1190(1984).5.Stanworth，and Burt.Mol-Immunol.，231231-1235(1986).6.Burt，and Stanworth.Eur.J.Immunol.，17437-440(1987).7.Stanworth. Mol.Immunol.，251213-1215(1988).8.Hamburger. Science，189389-390(1975).9.Kenten，Helm，Ishizaka，et al.proc.Natl.Acad Sci.，USA，812955-2956(1984).1本文档来自技高网...

【技术保护点】
以通式（Ａ）ｎ－（Ｔｈ）ｍ－（Ｂ）ｏ－（ＩｇＥＣＨ４肽）ｐ表示的肽免疫原，，脂肪酸或其衍生物，或侵袭素；Ｂ是氨基酸；Ｔｈ是辅助Ｔ细胞抗原决定基，其类似物或片段；ＩｇＥ　ＣＨ４肽是ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：１或其免疫原性类似物；ｎ是从１到１０；ｍ是从１到４；ｏ是从０到１０；ｐ是从１到３。２．权利要求１的肽免疫原；其中ｐ是１。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：CY王，
申请(专利权)人：美国联合生物医学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]