本发明专利技术涉及偶联物，所述偶联物含有具有氨基酸序列GITELKKL的至少10个氨基酸残基的肽，当所述肽施用于具有抗破伤风类毒素的抗体的受试者时，所述肽用于诱导有效的体液和细胞免疫应答。在一种实施方式中，本发明专利技术涉及预防性的或治疗性的疫苗，在另一种实施方式中，本发明专利技术涉及癌症或传染性疾病的治疗或预防。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及疫苗领域，例如抗癌症或传染性疾病的疫苗。特别是，本专利技术提供一种含有衍生于破伤风毒素的肽的免疫原，当施用于具有抗破伤风毒素的抗体的受试者时，该免疫原用于诱导有效的体液和细胞免疫应答。
技术介绍
几乎所有的新疫苗都没有所需要的那样有效，特别是当感染已经自行建立时。最好的疫苗是以经验观察为基础的。这些例如被杀死或减弱的微生物。一般的说，这种疫苗含有用于诱导有效的和保护性的免疫应答所需的所有成分。然而，这些疫苗通常界定不明确。此外，它们含有许多未知的成分，作用机制通常在很大程度上不为人所知，它们不能可繁殖的被制备并且因此不能符合现代药剂的标准。应用它们仅由于目前无法获得更好的。因为不能接受利用来自于天然的材料(即癌细胞)，在利用疫苗抵抗癌症时情况甚至变得更 复杂。为了使疫苗引起保护性的抗微生物病原体的免疫应答，例如树突状细胞和巨噬细胞的抗原提呈细胞(APC)需要摄取足够有效的疫苗。APC必须将抗原内化并将它们转运至特定区域的引流淋巴结，在这里它们分别在MHC I类分子和MHC II类分子上加工和提呈抗原肽用于活化CD8+T细胞和0)4+T细胞(Zinkernagel等(1999) Immunol Rev156:199-209;Banchereau 和 Steinman(1998)Nature 392:245-252)。然而，由于APC摄取不足，几种疫苗有有限的免疫原性，即使它们由在人中为抗原的蛋白质所组成。摄取不足可能是因为溶液中的许多免疫蛋白以及微粒子疫苗缺少能够被APC识别用于进行内化和加工的标记，因此这种疫苗的摄取仅由随机的内噬作用介导进入APC，从而使得疫苗的有效性降低(Abdel-Motal 等(2009) Vaccine 27:3072-3082)。当施用作为具有与其相应的IgG抗体的免疫复合物的疫苗时，诸如破伤风毒素的微生物疫苗的免疫原性显示被促进(Raveth和Clynes (1998) AnnuRev Immunol16:421-432;Schuurhuis 等(2002)J Immunol 168:2240-2246;Gosselin 等(1992)JImmunol 149:3477-3481)。然而，不利的是，这种免疫复合物必须由具有Fe结构域的抗体形成，该Fe结构域能有效的结合到APC上的Fe-伽马受体，然而许多单克隆抗体的Fe结构域与APC上的Fe-伽马受体的相互作用薄弱。另外一个不利的是在这个复合物中免疫显性肽表位可能是被掩盖的，因而导致了弱的免疫原性。WO 2008/118487论述了另外一种增强疫苗免疫原性的方案，其中，公开了一种载有a -gal表位(Gal a l-3Gal β 1_4 (3) GlcNAc-R)的流感病毒，导致了增强的病毒颗粒子对APC的靶向定位以及升高的对流感的体液和细胞免疫应答。然而，与合成常规的肽相比，合成a -gal表位更加困难，其结果是更加昂贵。Volk 等(1984，Infect. Immun. 45:604-609)公开了含有毒素重链 N-末端部分的破伤风毒素片段及其抗体，该毒素重链N-末端部分含有序列GITELKKL，该序列如在SEQ IDNO 3所示的覆盖该毒素重链第383至第390位残基。Raju等(1996, J. Autoimmun. 9:79_88)公开了每个长度为20个残基的重叠合成肽，用于确定人类⑶4+T细胞的表位组成成分。其中一个覆盖破伤风毒素重链的第371-390位的残基，完整的含有序列GITELKKL的肽被所述细胞识别。Demotz等(1989，J. Immunol. 142:394-402)公开了结合于破伤风毒素B片段以及含有序列GITELKKL的重组片段744-1315和604-1315的单克隆抗体。Engstrom等(J. Immunoassays 16:231-245)公开了一种“妝20”,含有序列GITEL，可以被人类抗体IgG和IgA识别。WO 2004/000873公开了一种偶联物，该偶联物含有衍生自破伤风重链序列830-843的含有序列GITE的破伤风表位。 Fischer 等(1994，Mol. Immunol. 31:1141-1148)公开了来自于小鼠和兔的破伤风类毒素抗体的表位图谱，并且公开了来自于覆盖破伤风类毒素重链的350-400位残基的区域的六肽表现出与抗体高度的反应性。然而，现有技术均没有教导或表明含有来自于破伤风毒素的线性表位的肽，人群中频繁出现抵抗破伤风毒素的循环抗体。现有技术也没有教导或表明利用这些肽来偶联需要免疫应答以对其进行抵抗的抗原，以便于提高诱导期望的免疫应答的效率。因此，本
仍需要增强疫苗免疫原性的方法和手段。
技术实现思路
本专利技术的第一种实施方式涉及一种偶联物，该偶联物含有偶联于抗原、免疫原或含有抗原或免疫原的载体的肽，其中，所述肽含有(i )具有氨基酸序列GITELKKL的SEQ IDNO 3的至少10个氨基酸残基；或，(ii)与(i)中提供的氨基酸序列有至少80%序列一致性的氨基酸系列，并且其中，当将肽施用于来自至少10名已用破伤风类毒素接种的人类受试者的血清样本时，如在破伤风毒素或类毒素酶联免疫法(Tettox ELISA)中确定的，肽在至少50%的血清样本中通过来自于血清样本的抗体结合；并且其中，所述肽不是破伤风毒素β链。在第二种实施方式中，所述肽含有少于100个的氨基酸残基。第三种实施方式涉及根据第一种或第二种实施方式所述的偶联物，其中，抗原、免疫原或含有抗原或免疫原的载体偶联于所述肽的C-末端。第四种实施方式涉及根据前述实施方式所述的偶联物，其中，2至20个肽结合于抗原、免疫原或含有抗原或免疫原的载体。第五种实施方式涉及根据前述实施方式所述的偶联物，该偶联物作为药剂使用。优选地，这种偶联物在具有抗破伤风毒素或破伤风类毒素的抗体的受试者中作为药剂使用。更优选地，该药剂为预防性的或治疗性的疫苗。第六种实施方式涉及根据第一种至第四种实施方式中任意一种实施方式所述的偶联物，用于在受试者中预防或治疗癌症或传染性疾病。第七种实施方式涉及根据第一种至第四种实施方式中任意一种实施方式所述的偶联物在制造用于在受试者中预防或治疗癌症或传染性疾病的药剂中应用。优选地，所述偶联物在具有抗破伤风毒素或破伤风类毒素的抗体的受试者中作为药剂使用。在第八种实施方式中，所述偶联物在施用所述偶联物至少两周前已被施用用于产生破伤风毒素的循环抗体的疫苗的受试者中作为药剂使用。在第九种实施方式中，所述偶联物或其作为药剂的应用用于抗体介导的抗原靶向作用(antigen-targeting)ο在第十种实施方式中，所述偶联物或其作为药剂的应用用于癌症的治疗，其中，所述治疗进一步含有外科手术、化学疗法和/或放射疗法。在第十一种实施方式中，所述偶联物或其作为药剂的应用用于治疗已经用破伤风类毒素免疫的具有抗破伤风毒素或破伤风类毒素的抗体的，已经具有针对破伤风的暴露后预防和/或已经患有破伤风的受试者。在第十二种实施方式中，在本专利技术所述的偶联物中，抗原或免疫原含有T细胞表位。更优选地，抗原或免疫原含有细胞毒性T细胞和/或辅助性T细胞表位。 在第十三种实施方式中，在本专利技术所述的偶联物中，肽和抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：F·A·奥森多普，C·J·M·梅立夫，J·W·德瑞杰夫浩特，
申请(专利权)人：莱顿大学医学中心附属莱顿教学医院，德国科技术基金会，
类型：
国别省市：
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