含有热稳定防冻蛋白的冷冻食品制造技术

用于从天然来源中回收ＡＦＰ的方法，所述方法包括以下步骤：ａ）将含有ＡＦＰ的汁液从天然来源中分离出来；ｂ）在温度至少为６０℃下将天然来源或含有ＡＦＰ的汁液热处理；ｃ）将不溶部分除去。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于分离防冻蛋白(AFP)的方法和涉及含有AFP的冷冻食品。本专利技术背景长期以来人们建议采用各种防冻蛋白(AFP)来改进食品对冷冻的忍受能力。出于本专利技术的原因，术语“AFP”具有本领域所熟知的含义，即那些表现出抑制冰晶体生长的活性的蛋白质。参见美国专利第5,118,792号。WO90/13571公开了通过化学或重组DNA技术制得的防冻肽。这些AFP可适用于食物中。其实施例3B显示，如果将水-冰混合物与0.01％(重量)的AFP一起冷冻进薄膜(film)中便改变了冰晶体的形状。WO92/22581公开了来自植物的、可用来控制冰淇淋中冰晶体形状的AFP。该文献也描述了一种用于通过将植物叶子渗入萃取介质中而无须使植物破碎从植物的细胞外空隙中萃取多肽组分的方法。WO94/03617公开了从酵母中制备AFP及其在冰淇淋中的应用。WO96/11586描述了通过微生物制备鱼的AFP。有一些文献段落也提及用于低温保护的植物蛋白的分离和/或用途。低温保护蛋白在保护植物膜不受冻坏方面起了一定作用。然而这些蛋白没有抑制再结晶的性能，因此不包括在术语AFP的范围内。Hincha在Journal of Plant Physiology(1992年，140,236-240)中描述了从甘蓝中分离出低温保护蛋白。Volger在《Biochimica et Biiophysica Acta》(412,1975年，335-349)中描述了从菠菜中分离出低温保护叶蛋白。Boothe在《PlantPhysiol》((1995年)，108:759-803)中描述了从蔓青中分离出蛋白。同样，人们相信这些蛋白是低温保护蛋白而不是AFP。Neven在《Plant Molecular Biology》(21:291-305,1993)中描述了菠菜低温保护蛋白的DNA特征。Salzman在《Am.J.Enol.Vitic.》(第44卷，第4期，1993年)的“第18届ASEV年会/东部的概括和回顾”中描述了在葡萄属的芽中存在蒸煮稳定的多肽。虽然该蛋白类同于鱼的防冻肽，但它们是低温保护蛋白而不是AFP。Lin在《Biochemical and Biophysical Research Communication》，第183卷，第3期，1992年，第1103-1108页)中以及Lin在《PlantPhysiology》((1992年)，99:519-525)中描述了来自Arabidopsis Hakaira的15kDa低温保护多肽。Houde在《The Plant Journal》((1995年)，8(4)，第583-593页中)提及来自小麦的低温保护蛋白。此外-如实施例Ⅷ所示-加热后甘蓝、菠菜、蔓青和拟南芥属的浸出液没有再结晶抑制蛋白。然而迄今AFP还未应用于市售食品中。其一个原因是获得AFP的成本高及过程复杂。另一个原因是直到现在才有人建议将其用于冷冻食品中的AFP不能结合进标准配方混合物中，因在处理过程中、尤其是在巴氏灭菌步骤过程中它们容易失稳。这种失稳相信是由于AFP的变性所引起，这是一个通常可从肽和蛋白中观察得到的众所周知的结果。本专利技术的目的在于提供这些问题的解决方法。我们惊奇地发现，通过一种新的较为简单的方法可将AFP从天然来源如冷冻驯化的植物中分离出来。该方法第一次使得可以鉴别在进行巴氏灭菌之前可方便结合进制备冷冻食品的混合物中的AFP。因此，在第一方面本专利技术涉及从天然来源中回收AFP的方法，所述方法包括以下步骤a)将含有AFP的汁液从天然来源中分离出来；b)将天然来源或含有AFP的汁液在至少为60℃的温度下进行热处理；c)除去不溶的部分。上述方法的步骤c通常在步骤a和b之后进行。步骤a和b可以以任何所需的顺序进行，如步骤a在前步骤b在后(在这种情况中将加热富含AFP的汁液)或步骤b在前步骤a在后(在这种情况中将加热天然来源)或步骤a和b同时进行。我们惊奇地发现本专利技术的分离方法具有许多优点。首先，通过使用此方法可以不必再如在根据WO92/22581的方法中所要求的那样需要避免天然来源如植物的破碎。这就马上显著增加了本方法的商业应用价值(如与WO92/22581相比)，因为不再需要用于特殊加工的高的投资费用。同时，通过使用高温似乎可以从存在于天然来源的大量肽中提取出一种新的相当活性的AFP(从天然材料中)，所述AFP包括相当活性的w.r.t.冰再结晶抑制性能的肽。第三，使用高温出乎意料之外地不会使所有的蛋白质的变性，但只是使一些蛋白质变性，而剩下的AFP温度稳定性得到增加。这就使得在组合物中可以包括需要经受较高温度，如巴氏灭菌步骤的分离出来的AFP。这是特别令人惊奇的，因为例如来自WO92/22581的AFP在加热条件下是不稳定的(参见实施例Ⅵ)。本专利技术的方法包括在步骤b中将天然来源或富含AFP的汁液加热至高于60℃的温度。优选此温度为60-110℃、最优选为80-105℃。加热步骤可在分离富含蛋白的汁液(步骤a)之后进行或在分离富含蛋白的汁液之前进行。可用任何适宜的方法来加热汁液，如常规加热或微波加热，任选添加提取介质加热、蒸汽等。如果使用提取介质，则最好其使用的体积较小以避免AFP组分发生不必要的稀释。虽然特别优选使用水，但可以使用任何适宜的提取介质。如需要，可在水用作提取介质之前将各种添加剂加入其中。然而最优选的是使用基本上不含各种添加剂的水。本专利技术方法可以应用于任何热稳定的AFP的天然来源。包括在此范围内的是植物、鱼、昆虫和微生物。天然存在的种类或通过遗传修饰获得的种类都可以使用。例如可使微生物或植物经基因修饰后表达AFP，然后根据本专利技术可将此AFP分离出来。因此可获得与直接从天然来源中获得的AFP至少80％、更优选大于95％、最优选100％同源的AFP。出于本专利技术的原因，拥有如此高同源水平的蛋白也包括在术语AFP的范围内。同时这些可以表达编码AFP的基因转化的微生物或植物也包括在本专利技术的范畴内。可使用遗传操作技术来生产述于本专利技术中的热稳定的AFP。通过用编码所需热稳定多肽的基因构成物可使合适的宿主细胞或有机体发生转化。可将编码热稳定多肽的核苷酸顺序插入到含有为转录作用和转译作用所需元件的适宜表达载体中，并且以一种在合适的条件下(如以适当的定向及正确的读框且具有合适的目标和表达序列)可将其表达出来的方式进行。构成这些表达载体所需的各种方法对于本领域技术人员是众所周知的。可以采用许多表达体系来表达热稳定多肽的编码序列。这些体系包括(但不限于此)细菌、酵母昆虫细胞体系、植物细胞培养体系和具有用合适表达载体转化的植物。采用在热稳定提取液中分离出来的多肽核酸构成物可以转变很多种植物和植物细胞体系。优选的实施方案包括(但不限于此)玉米、西红柿、烟草、胡萝卜、草莓、油菜籽和制糖甜菜。优选AFP衍生自植物(这指的是AFP直接从作为天然来源的植物中获得，或与这些AFP具有高度同源的AFP在其它有机体中经转基因得到)。可采用任何含有热稳定AFP的植物，然而优选在寒冷的条件下仍可生长(因其含有AFP)的天然存在的植物(或其基因修饰的变种)。特别优选使用冬黑麦、多年生牧草和苔草。其它适宜的植物可以是例如木质植物、冬谷类等。特别本文档来自技高网...

【技术保护点】
从天然来源中回收ＡＦＰ的方法，所述方法包括以下步骤：ａ）将含有ＡＦＰ的汁液从天然来源中分离出来；ｂ）以至少６０℃的温度将天然来源或含ＡＦＰ的汁液热处理；ｃ）除去不溶部分。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：PJ利尔福特，AJ麦克阿瑟，CM赛德博顿，P维尔丁，
申请(专利权)人：尤尼利弗公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]