蛋白质制剂的稳定化制造技术

通过添加高度纯化的重组人血清白蛋白来稳定一种含非白蛋白蛋白质的组合物。非白蛋白蛋白质可以是因子Ⅷ。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及含蛋白质组合物的稳定化，特别是使用高度纯化的重组人血清白蛋白(rHA)来稳定含蛋白质-特别是重组方法获得的蛋白质-的组合物。在特定实施方案中，本专利技术涉及使用高度纯化的rHA来稳定含重组因子VIII(rF-VIII)的组合物。
技术介绍
因子VIII(F-VIII)是一种血浆蛋白质，参与血液凝固过程并且是该过程中必不可少的成分。F-VIII缺乏导致先天性出血病-A型血友病。F-VIII严重缺乏(例如约为正常水平的1-2％)的患者会遭受自发性出血和严重的创伤后出血。在这些患者中，这种躯体封闭区域内的出血是发病的主要原因。含F-VIII组合物用以国际单位(IU)表达的F-VIII“活性”来表征。如世界卫生组织关于人凝血因子F-VIII的标准所定义，一个IU约等于1ml新鲜混合的人血浆中F-VIII的活性水平。临床医生将给患者处方施用一定数量的IU，因此当然希望组合物指示的F-VIII活性是实际F-VIII活性的可信赖指标。即，希望F-VIII活性是恒定的，从组合物生产到给患者使用的时间中没有变化。A型血友病的有效治疗包括针，针对出血或按规律的预防性给药方案，通过输注补偿缺失的凝血因子VIII。替代性因子VIII最初是通过从人血浆中分离获得的。但近期已尝试制备rF-VIII。重组来源的因子VIII的优点在于其避免了血液制品中的潜在污染物，不存在从捐献血液中所分离材料相关的潜在供应限制。无疑，由于rF-VIII的主要优点是没有从血液分离材料中可能存在的潜在污染物，因此希望含rF-VIII制剂的任何组合物也都不含血液来源的材料。但是，实践中发现rF-VIII有些不稳定，保存期有限。在克服这个问题的尝试中，血清来源的白蛋白被加入rF-VIII组合物中作为稳定剂，但这重新引入了污染的风险。也有人提出不含白蛋白的制剂，含有额外材料例如各种离子盐、糖和氨基酸作为稳定剂。但是，为了获得令人满意的制剂稳定化，这些额外赋形剂需要以相当高的浓度存在，这样就会引起其它缺点例如不适于冷冻干燥和溶液重建。相似的情况不仅出现在rF-VIII制剂的稳定化中，也见于一般重组蛋白质制剂。也有人提出rHA作为蛋白质组合物的稳定剂，但目前为止没有开发出足以商业应用并含有rHA作为稳定剂的rF-VIII制剂。专利技术简述现发现高度纯化的rHA能够有效地稳定蛋白质、尤其是重组蛋白质、特别是rF-VIII的制剂，并且克服或者实质上减少了现有技术中上述某些或所有缺点或不足或其它缺点或不足。本专利技术的第一方面提供了含非白蛋白蛋白质的组合物，该组合物进一步含有足以稳定该蛋白质的量的高度纯化rHA。将高度纯化的rHA加入含非白蛋白蛋白质组合物中可以稳定该组合物。特别是，高度纯化的rHA可以抑制或防止非白蛋白蛋白质随时间而变化或降解(许多这种蛋白质易分解，当长时间储藏时变得不稳定)。即使rHA的浓度相对低，含有高度纯化的rHA可以使组合物获得满意的稳定性。还发现使用高度纯化的rHA可以保持非白蛋白蛋白质例如F-VIII的活性。本专利技术对含重组方法制备的非白蛋白蛋白质组合物的稳定化特别有用。rHA也可以被加入含有其它已知对重组蛋白质具有稳定效果之材料的制剂中。在这种情况下，rHA的存在可以使得为获得满意稳定性所要求的这些其它材料的浓度降低，有时是相当程度的降低。因此，本专利技术的第二方面提供了含非白蛋白蛋白质的组合物，该组合物进一步含有高度纯化的rHA和一种或多种额外的稳定剂。这些额外的稳定剂可以选自离子盐，尤其是氯化物，例如氯化钾、氯化钠和氯化钙；氨基酸，例如组氨酸、赖氨酸、甘氨酸、精氨酸等；糖，例如甘露醇、蔗糖、果糖、乳糖和麦芽糖；去垢剂，尤其是非离子型去垢剂，特别是聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯(例如聚山梨醇酯polysorbates)；聚合物，尤其是合成的聚合物，特别是亲水的合成聚合物，例如聚乙二醇。虽然本专利技术使用的高度纯化rHA需要存在于最终组合物中，但在形成最终组合物的加工过程中可以不需要。例如，在重组非白蛋白蛋白质的发酵和/或纯化过程中，可以使用rHA来稳定，但该rHA不一定是高度纯化的rHA。因此，本专利技术的第三方面提供了制备含非白蛋白重组蛋白质组合物的方法，该方法包括以下步骤a)使转染了编码非白蛋白重组蛋白质的细胞表达该非白蛋白重组蛋白质；和b)分离和/或纯化该非白蛋白重组蛋白质；其中，步骤a)和/或步骤b)在第一种形式rHA存在下进行，第一种形式rHA的纯度低于第二种形式rHA；c)将步骤b)中获得的分离和/或纯化的非白蛋白蛋白质与第一种形式rHA分离；和d)将分离和/或纯化的非白蛋白重组蛋白质与第二种形式rHA以及任选地与其它赋形剂组合，以形成稳定的组合物。如上所述，本专利技术的优点之一是发现在含有F-VIII的组合物中加入高度纯化的rHA可以保持F-VIII的活性。因此，本专利技术的第四方面提供一种保存或保持含F-VIII特别是rF-VIII的组合物中F-VIII活性的方法，该方法包括向组合物中加入稳定化量的高度纯化rHA。专利技术详述本专利技术组合物通常以水溶液或悬浮液的形式使用。但该组合物也可以被制成临使前的形式。该组合物可以以粉末的形式供应和储藏，例如通过冷冻干燥制备的粉末，在将组合物施用于患者前用水进行重建(reconstruction)。这种操作是本领域传统做法，为本领域技术人员所熟知。该组合物典型地以密封小瓶中的冷冻干燥(冻干)粉末的形式提供。用一定量的注射用水重建组合物，最常用为2.5、5或10ml水。当用水重建时，本专利技术第一或第二方面的组合物典型地包含从约0.1mg/ml到约20mg/ml的高度纯化rHA，更常见最高约10mg/m典型地可包含最高约7mg/ml、或最高约5mg/ml、或最高约1mg/ml的高度纯化rHA。除了非白蛋白蛋白质(例如rF-VIII)和高度纯化的rHA，组合物可以任选地包含一种或多种其它稳定剂和其它赋性剂。如上所述，其它可以被包含的稳定剂是离子盐、氨基酸、糖、去垢剂和聚合物。如果存在离子盐，这些盐特别优选地选自氯化钾、氯化钠或氯化钙。在这种情况下，在用水重建后氯离子的浓度可以在0.05到2mg/ml的范围内。如果存在氨基酸，特别优选氨基酸是组氨酸、赖氨酸、甘氨酸和精氨酸中的一种或多种。在重建的组合物中，氨基酸的总浓度可以在很大的范围内变化，例如从0.1到100mg/ml，更优选从0.1到50mg/ml，可以很低，例如浓度可以小于10mg/ml，例如在0.01到10mg/ml的范围内。如果存在去垢剂，优选非离子型去垢剂，特别是聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯(聚山梨醇酯类，polysorbates)。特别优选聚氧乙烯(20)脱水山梨糖醇单油酸酯(聚山梨醇酯80，Polysorbate 80)。在重建的组合物中，去垢剂的浓度可以非常低，例如小于1mg/ml，更优选小于0.1mg/ml，例如0.001到0.1mg/ml。合成聚合物、特别是亲水的合成聚合物也可以被加入组合物中。一类优选的合成聚合物是聚乙二醇。优选聚合物的平均分子量小于10,000道尔顿，更优选小于5,000道尔顿。如果重建的组合物中存在合成聚合物，其浓度可以从0.1到10mg/ml，或更低，例如浓度可以小于1mg/ml，例如0.01到1mg/ml。如果组合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含非白蛋白蛋白质的组合物，该组合物进一步含有足以稳定该非白蛋白蛋白质的量的高度纯化ｒＨＡ。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：沃纳默克里，
申请(专利权)人：达尔塔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]