一种新的免疫测定方法技术

一种免疫测定方法，通过特异性结合定性或定量测定样品中被测物。样品与可移动的固相载体相接触。如磁性粒子（６２０），在其上面固定第一结合试剂，同时带有一标记试剂，在被测物存在情况下它能参与“夹心”或与第一试剂进行竞争性反应。经过孵育期足以允许发生反应。载体在试验介质中（６１８）移动至讯号敏感元件附近（６０２）。标记物持续地在试验介质中产生一种讯号，和在光敏元件附近产生的讯号大小作为结合反应发生程度的测定。最好在试验介质中掺入一种屏蔽或猝灭剂。（*该技术在2007年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是涉及利用特异性结合，如免疫测定的一种检查方法。固相，如利用粒子的免疫测定系统已为大家所知。这包括应用免疫原(被测物)和一种或几种特异性结合物之间的免疫结合反应，在一试验样本中定性和/或定量测定其中某免疫原种类，而这些结合物中至少有一种是联结到一种不溶性载体上，并与组成试验样品的液体介质接触。产生联结到载体物质上的免疫复合物这一现象对以后测定结合反应的程度有其优点。这种测定常通过应用标记特异性结合物获得，结合反应可以是“竞争性”反应或“夹心”反应，这两种反应目前已广泛应用于此领域内。在典型的竞争反应中，试验介质一般是水溶液，它与固体载体接触，在载体上结合一特异结合物(如单克隆抗体)，它对被测定物具有特异性，试验介质中含有已知量被标记的待测物(或某种类似物，它具有相同的决定簇)和一已知量疑含有待测物的样品。如样品中不含有被测物，则标记的待测物或类似物与固定在固相载体上的特异性结合试剂结合，这种结合程度可从标准实验中获得。如果样品中含有被测物，它与标记的待测物或类似物特异性竞争结合剂，使特异性结合剂和标记成份间的结合减少。以此与标准条件下，进行比较(即在没有待测物情况下取得的结果)，可推算出样品中待测物的浓度。在典型的“夹心”反应中，第一种结合剂，对待测物具有特异性，被固定在固相载体上，试验介质一般也是液体，同样含有第二种结合试剂，对被测物有特异性，也被标记。在没有被测物情况下，不存在被固定的试剂和被标记试剂间的结合。当存在被测物情况下，它作为固定的试剂和标记的特异性结合试剂间的桥梁，导致标记试剂和固相间的间接结合。根据结合程度可测定样品中被测物的浓度。与被测物反应的固定和标记试剂特异性可以不同，但是，如果被测物分子具有一个以上相同的决定簇，则固定和游离标记形式的结合试剂有可能应用相同特异性。已有若干类型的基于粒子的免疫测定方法。这些方法中某些涉及对特异性结合反应中产生的复合物的复杂测定方法和/或从试验介质中分离出载有复合物的颗粒状载体的一套物理方法，包括测定被检样品前，除去未结合的物质。在某实施方案中，本专利技术企图提供一个不需分离的颗粒的免疫测定方法。在此方法中，试验中的样品测定可以迅速、简单进行，特别是免疫测定只需一个步骤。试验介质中固相载体颗粒需要固定的免疫测定法见于多种资料。EP0169434中介绍一个荧光的免疫测定方法。它将一抗原附着到磁性粒子上，在测量时，这些粒子被一磁场吸到测量管的壁上。为获得测量结果，则需要在测量管外利用一能量如紫外线以激发荧光发生。EP0149565介绍的免疫测定法是利用一标记试剂和另一个结合到可为磁性吸附粒子上的试剂，此粒子不溶于液态试验介质中，而是悬浮其中。标记试剂处于液相和粒子之间(两者的比例取决于样品中被测物的浓度)后除去液相，将粒子重悬于另一液体介质中，再测量标记物的浓度。此方法适用于荧光和化学发光标记方法。同时很方便地在微量滴定板中应用，板中各孔可用光学方法逐个测定。观察结果可以在孔上或孔底进行。EP0149565明确说明很难有效测得来自沉淀的任何光讯号，此种沉淀是悬液中沉下的颗粒性试剂。在EP0149565中介绍的专利技术原理，完全不同于本专利技术的基本原理。因为我们已发现上述观察不仅是可能的，而且确实很适合从定位的固相中而不是从分散的固相中进行有关观察。本专利技术提供一个基于载体测定方法，它利用一个标记的特异结合物，它在试验介质中不断产生一种讯号。同时，在此方法中，结合反应发生后，载体物移至试验介质中某一部位，从此处可以测得任何增强了的局部讯号量。更为特异性的是本专利技术利用特异性结合反应，提供对样品定性和/或定量测定被测物的方法。其中样品和可移动的固相载体结合，在载体上包被有对被测物具有特异性的第一结合试剂，样品同时也与标记的特异性结鲜约两哟ィ死嗍约敛斡搿凹行摹被蛟诒徊馕锎嬖谇榭鱿掠氲诙约敛熬赫狈从ΑＴ诖朔椒ㄖ校跤欢ㄊ奔渥阋允狗从Ψ⑸螅梢贫墓滔嘣靥逦镏试谑匝榻橹手幸浦烈桓鲅逗糯凶爸酶浇昙俏镌谑匝榻橹手胁欢喜持盅逗牛源衅髦醒逗糯笮∽魑饬拷岷戏从Φ拇笮　 此专利技术将在原则上详细介绍基于粒子免疫测定的内容。但是从下面介绍明显证明在不超出本专利技术主要精神的条件下，其他的实际申请也是有效的。作为一个实施案，本专利技术提供一个基于粒子的免疫测定方法，它利用一种标记的特异性结合试剂，在试验介质中持续产生一个讯号。当标记的结合试剂在试验介质中均匀分布时，此种讯号被抑制。此方法中，在结合反应发生后，粒子载体物被定位在某环境中，此处不具备讯号抑制能力以抑制局部产生的讯号。因此，能产生可测的讯号，其性质和/或大小取决于被测物和被携带于粒子上的特异性结合试剂之间的结合程度。在较好的实施案中，本专利技术提供一个基于粒子的免疫测定方法。它利用一标记的特异性结合物，在试验介质中能连续产生讯号，当标记结合物在试验介质中均匀分布时，产生的讯号被屏蔽、猝灭或抑制。在此方法中，结合反应发生后，在试验介质中粒子载体物的局部浓度的建立，使被粒子携带的复杂的标记结合物的局部浓度产生局部讯号流，它足以克服试验介质局部讯号抑制能力。因此，它提供了一可测讯号，其性质和/或大小取决于试验条件下免疫原和粒子携带的特异性结合物间的结合程度。在本专利技术的内容中，各词“讯号”是说明一种现象，包括在质和量方面能看到或测得。而名词“可测讯号”是被用于能看到或测得讯号的明显改变。例如，讯号可以是某化学物质的浓度，而可测讯号则可能是相对于某相对均匀的本底讯号(可能是零)其浓度的增加或减少。另一个可测讯号的例子是某种化学物质积累率的改变。另一可测讯号的例子可能是电磁辐射强度的改变，例如可见光，它由某种化学物质，如化学发光剂放出。本专利技术的免疫测定方法具有下列特点①标记物在试验介质中不断产生一个讯号。②当标记物分散在试验介质中时，不管它是游离或结合进连结到载体上的复合物中，讯号被屏蔽、猝灭或抑制。③标记结合物与其他结合物的复合，其本身不能明显地改变由标记物产生的讯号;和④一个可测讯号的产生，只有当与复合标记物连结的载体在试验介质中定位于一相对小的区域内才有可能。固相，例如颗粒载体，开始进入大量试验介质后，处于试验介质具有的讯号抑制活性的影响下。接着，此固相处于某种情况下，相对摆脱介质的影响，也就少受讯号抑制的影响。固相的这种运动是唯一需要完成的一种活性，目的是产生一个可读的结果。由标记物产生的持续讯号本身能避免进一步加入试剂的要求或粒子定位后提供进一步刺激，和在最低复杂性或最少操作步骤情况下提供最大的测定敏感性。物理学上定位载体粒子的简单作用完全是为了产生可测的讯号。当标记结合物在试验介质中被分散使其产生的讯号被抑制，这是本专利技术最重要的特点。其机制决定于讯号产生系统本身的性质。下述机制，只是举例说明存在着的种种可能性。大量样品中的讯号抑制作用必须被抵销，这样才能使结合物的局部浓度产生一可测的讯号。在任何系统中抑制水平可通过实验和经验测得。这是不困难的。载体物、结合的讯号产生物和游离的讯号产生物的分散混合物，代表在非定位样品中期望的浓度，此浓度是用适当的讯号抑制方法(为某种消耗剂)“滴定”的，使其讯号抑制水平足以保证在结合讯号产生物没有定位情况下没有多余的讯号产生。标记物可能是一化学试剂，它本文档来自技高网...

【技术保护点】
通过特异性结合定性和／或定量测定样品被测物的一个测定方法。样品与可移动固相载体物接触，例如颗粒载体。在载体上固定第一结合试剂，它对被测物具有特异性。同时也带有标记的特异性结合试剂，它能参与“夹心”或“竞争”反应。这是在有被测物存在情况下与第一试剂竞争。其特点是，足以使反应发生在孵育期后。可移动的固相载体在试验介质中移至光敏元件附近，在此处，标记物在试验介质中不断产生一讯号，其大小作为测量结合反应发生的程度。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：保罗詹姆斯戴维斯，罗斯玛丽安露西德雷克，威廉爱德华霍恩比，
申请(专利权)人：尤尼利弗公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]