橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2及应用。该2个蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示。本发明专利技术还公开了一种编码上述蛋白的基因，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4所示。本发明专利技术还公开了一种上述基因在提高橡胶树胶乳产量中的应用。本发明专利技术采用割胶、乙烯利和茉莉酸刺激可显著提高HbACBP1和HbACBP2在橡胶树胶乳中的表达水平，并与胶乳产量呈显著正相关，在橡胶树品种改良和基因工程领域具有较大的经济价值和应用前景。

【技术实现步骤摘要】
橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2及应用
本专利技术属于基因工程领域，具体地说，涉及一种橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2及应用。
技术介绍
脂类物质在植物体生长发育和适应外界环境中发挥重要作用，其代谢过程需要酰基载体蛋白的参与，其中一类酰基载体蛋白是酰基辅酶A(CoA)结合蛋白(Acyl-CoA-BindingProtein，简称ACBP)。ACBP家族蛋白普遍存在于原核和真核生物细胞中，其共同特征是含有1个高度保守的酰基CoA结合结构域(Acyl-CoA-bindingdomain，简称ACBD)，部分成员除含有ACBD外还具有介导蛋白质互作的ankyrinrepeats和kelchmotif等重复序列。根据这些结构特点，可将ACBP家族蛋白分为四大类，它们具有不同的结构域组成、亚细胞定位及生物学功能等。植物ACBP蛋白主要通过调节脂肪酸、酰基CoA库、脂肪酸β氧化和囊泡运输等细胞内多种复杂的代谢活动，参与植物生长发育、胁迫响应和膜修复等生理过程。目前，已从木薯、蓖麻、油菜、水稻、拟南芥、杨树和苹果等植物中分离鉴定了ACBP，而世界上最重要的产胶植物巴西橡胶树(Heveabrasiliensis)中的ACBP基因迄今为止还没有得到鉴定和研究。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2及应用。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2，其氨基酸序列分别如SEQIDNO.3和SEQIDNO.6所示。本专利技术还公开了一种编码上述的橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白基因HbACBP1和HbACBP2。进一步地，其核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示。本专利技术还公开了一种含有上述的基因的重组表达载体。本专利技术还公开了一种含有上述的基因的转基因重组菌。本专利技术还公开了一种编码橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白基因HbACBP1和HbACBP2的克隆方法，所述HbACBP1基因采用的引物如下：HbACBP1正向引物：TTCTCGACCAACTTCTAAGT，其核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；反向引物：GTTTTATTTCAATAAATAATTGACTAGG，其核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；所述HbACBP2基因采用的引物如下：HbACBP2正向引物：CCCCCGAGGCGCAAATCAATC，其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；反向引物：GGGAACTTCGGCCTCAATTCG，其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示。本专利技术还公开了一种上述基因在提高橡胶树胶乳产量中的应用。与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：1)本专利技术首次在橡胶树产胶细胞中发现了HbACBP1和HbACBP1基因。HbACBP1基因的cDNA全长为707bp，CDS序列279bp，编码92个氨基酸的蛋白。HbACBP2基因的cDNA全长为1215bp，CDS序列855bp，编码285个氨基酸的蛋白。2)本专利技术用CDD、PFAM、SMART和Interproscan软件分析预测，HbACBP1和HbACBP2均有ACBD保守结构域，但它们具有不同的亚细胞定位方式，HbACBP1为可溶性蛋白，定位于细胞液中，而HbACBP2具有跨膜结构域，是一个膜结合蛋白。3)本专利技术采用割胶、乙烯利和茉莉酸刺激可显著提高HbACBP1和HbACBP2在橡胶树胶乳中的表达水平，并与胶乳产量呈显著正相关，在橡胶树品种改良和基因工程领域具有较大的经济价值和应用前景。当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是本专利技术橡胶树胶乳表达HbACBP1和HbACBP2的蛋白质结构域示意图；图2是本专利技术橡胶树HbACBP基因的组织特异性表达模式；图3是本专利技术割胶对橡胶树胶乳HbACBP1和HbACBP2基因表达的促进作用；图4是本专利技术乙烯利(ET)和茉莉酸(JA)对橡胶树胶乳HbACBP1和HbACBP2基因表达的促进作用；图5是本专利技术橡胶树胶乳表达HbACBP1和HbACBP2的亚细胞定位分析；其中，A-D,HbACBP1-GFPfusionprotein；E-I,co-transfectionofHbACBP2-GFPfusionproteinandERmarker；J-M,GFPcontrol.A,F,J,transientexpressionofGFP；B,G,K,chloroplastautofluerescence；C,H,L,visiblelight；D,I,M,mergedimages；E,ERmarker.Scalebar＝10μm。具体实施方式以下将配合实施例来详细说明本专利技术的实施方式，藉此对本专利技术如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。实施例1橡胶树乳管细胞表达HbACBP1和HbACBP2基因的克隆首先，利用拟南芥ACBP蛋白的保守ACB序列为探针搜索橡胶树基因组数据库，共得到6个含ACB结构域的橡胶树ACBP基因，其中包括HbACBP1和HbACBP2。然后，根据HbACBP1和HbACBP2的cDNA序列设计引物，从橡胶树的胶乳中分别克隆HbACBP1和HbACBP2的全长cDNA序列，并进行克隆重测序验证，最后获得橡胶树胶乳表达的HbACBP1和HbACBP2的全长cDNA序列。HbACBP1和HbACBP2克隆引物和RT-PCR扩增过程简单如下：(1)克隆引物序列HbACBP1正向引物：TTCTCGACCAACTTCTAAGT，其核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；反向引物：GTTTTATTTCAATAAATAATTGACTAGG，其核苷酸序列如SEQIDNO.8所示；HbACBP2正向引物：CCCCCGAGGCGCAAATCAATC，其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；反向引物：GGGAACTTCGGCCTCAATTCG，其核苷酸序列如SEQIDNO.10所示。(2)HbACBP1和HbACBP2基因克隆及序列分析提取橡胶树胶乳总RNA，用试剂盒PrimerScriptRT将胶乳总RNA反转录成cDNA作模板，分别用上述HbACBP1和HbACBP2克隆引物进行RT-PCR扩增，并将扩增产物亚克隆至测序载体中，筛选阳性克隆进行测序，最终获得HbACBP1和HbACBP2的全长cDNA序列，分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示；HbACBP1和HbACBP2的CDS序列分别如SEQIDNO.2和SEQIDNO.5所示。生物信息分析表明，HbACBP1和HbACBP2均有1个ACB保守结构域，此外，HbACBP2还含有1个Ankyrin重复序列，它们的蛋白质结构域如图1所示，HbACBP1和HbACBP2蛋白的氨基酸序列分别如SEQIDNO.3和SEQIDNO.6所示。实施例2橡胶树乳管细胞表达HbACB本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2，其特征在于，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6所示。

【技术特征摘要】
1.一种橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2，其特征在于，其氨基酸序列分别如SEQIDNO.3和SEQIDNO.6所示。2.编码权利要求1所述的橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白HbACBP1和HbACBP2的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.4所示。4.含有权利要求2或3所述的基因的重组表达载体。5.含有权利要求2或3所述的基因的转基因重组菌。6.一种编码橡胶树胶乳表达酰基辅酶A结合蛋白基因HbACBP1和HbACBP2的克隆方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾日中，聂智毅，王艺航，黎瑜，康桂娟，覃怀德，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院橡胶研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46