本发明专利技术属于基因工程技术领域，公开了乙酰辅酶A增强模块在增强7-脱氢胆甾醇在微生物中合成的应用。本发明专利技术提供的应用中所用的乙酰辅酶A增强模块包括表达乙醇脱氢酶的基因、表达乙醛脱氢酶的基因、表达乙酰辅酶A合酶的基因和表达ATP-柠檬酸裂解酶的基因。在微生物中导入了乙酰辅酶A增强模块之后，显著提高了其中7-脱氢胆甾醇的合成量，为7-脱氢胆甾醇的合成提供了新的方法，更有利于7-脱氢胆甾醇的大量生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程
，特别设及己酷辅酶A增强模块在增强7-脱氨胆酱 醇在微生物中合成的应用。
技术介绍
维生素D是一种脂溶性维生素，也被看作是一种作用于巧、磯代谢的激素前体，是 人体必需的维生素之一。据报道，目前已知的维生素D至少有十种，但最重要的是维生素化 和维生素〇3。其中，维生素是维生素D中生物代谢率最高的一种活性形式。维生素D3主 要是由人体自身合成的；人体皮肤中的7-脱氨胆酱醇吸收太阳光中的UVB可W转化为前维 生素进而通过分子内重排生成热力学更稳定的结构一一维生素〇3。所W，7-脱氨胆酱 醇是合成维生素D3的重要前体，合成7-脱氨胆酱醇是生产维生素的关键步骤。[000引 目前，7-脱氨胆酱醇可W通过化学方法或生物转化的方法合成。但是，化学合成方 法步骤较多、污染严重、副产物所占比例大；生物转化则多通过动物组织催化底物，所得产 物与转化体系难于分离，该些都成为了限制工业化生产的关键因素。合成生物学是生产大 规模且性能稳定的天然化合物的新学科，该种方式主要是通过基因工程手段将天然化合物 合成途径相关酶基因导入到酵母、大肠杆菌或者植物等一些常用的模式底盘细胞中，在底 盘细胞中重新构建可W生产天然化合物的途径，进而表达天然化合物。现已有利用酿酒酵 母该一生产平台从廉价的碳源出发合成7-脱氨胆酱醇的报道。 通过采用合成生物学技术，荷兰的化hmannHans-Peter等人通过过表达截断的 HMG1基因、敲除ERG5和ERG6基因、引入脊椎动物来源的固醇C-24还原酶基因，实现了在酵 母中生产7-脱氨胆酱醇。德国的化ristineLang等人在敲除ERG5和ERG6基因的酿酒酵 母菌株中过表达ERG1基因、ERG11基因、tHMGR基因和A-24还原酶值24R)基因，构建了一 株生产7-脱氨胆酱醇的酵母菌株。但是，现有的重组酿酒酵母菌株7-脱氨胆酱醇的产量 较低，还需要继续研发。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的专利技术目的在于提供一种己酷辅酶A增强模块在增强7-脱氨胆 酱醇在微生物中合成的应用。本专利技术发现当在酵母菌中导入己酷辅酶A增强模块之后，次 级代谢产物7-脱氨胆酱醇的产量得到显著提高，说明在微生物中导入己酷辅酶A增强模块 能够增强7-脱氨胆酱醇在微生物中的合成量，更有利于7-脱氨胆酱醇的大量生产。 为了实现本专利技术的专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案： 本专利技术提供了一种己酷辅酶A增强模块在增强7-脱氨胆酱醇在微生物中合成的 应用； 其中，己酷辅酶A增强模块包括表达己醇脱氨酶的基因、表达己醒脱氨酶的基因、 表达己酷辅酶A合酶的基因和表达ATP-巧樣酸裂解酶的基因。 在本专利技术中，表达己醇脱氨酶的基因是指该基因的表达产物具有己醇脱氨酶的活 性，能够催化己醇转化为己醒。 在本专利技术中，表达己醒脱氨酶的基因是指该基因的表达产物具有己醒脱氨酶的活 性，能够催化己醒转化为己酸。 在本专利技术中，表达己酷辅酶A合酶的基因是指该基因的表达产物具有己酷辅酶A 合酶的活性，能够己酸转化为己酷辅酶A。 在本专利技术中，表达ATP-巧樣酸裂解酶的基因是指该基因的表达产物具有ATP-巧 樣酸裂解酶的活性，能够巧樣酸分解为己酷辅酶A。 在本专利技术的一些实施例中，本专利技术提供的应用中所用的表达己酷辅酶A合酶的基 因具有如I、II或III所示的核巧酸序列；I具有如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列；II具有如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列30%同源性的序列；III具有如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列经缺失、取代或添加一个或多个核巧酸 获得的核巧酸序列。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的应用中所用的表达ATP-巧樣酸裂 解酶的基因具有如（I)、（II)或（III)所示的核巧酸序列：[001引 （I)具有如SEQIDNO:2所示的核巧酸序列； (II)具有如SEQIDNO: 2所示的核巧酸序列30%同源性的序列； (III)具有如SEQIDNO:2所示的核巧酸序列经缺失、取代或添加一个或多个核巧 酸获得的核巧酸序列。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的应用中所用到的表达己酷辅酶A合 酶的基因具有如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列，标记为acs。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的应用中所用到的表达ATP-巧樣酸 裂解酶的基因具有如SEQIDN0:2所示的核巧酸序列，标记为acl。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的应用中所用的表达己醇脱氨酶的基 因具有如SEQIDN0:3所示的核巧酸序列，标记为a化2。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的应用中所用的表达己醒脱氨酶的基 因具有如SEQIDN0:4所示的核巧酸序列，标记为aide。本专利技术还提供了一种己酷辅酶A增强模块，其包括表达己醇脱氨酶的基因、表达 己醒脱氨酶的基因、表达己酷辅酶A合酶的基因和表达ATP-巧樣酸裂解酶的基因； 其中，表达己酷辅酶A合酶的基因具有如I、II或III所示的核巧酸序列：I具有如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列；[002引II具有如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列30%同源性的序列；III具有如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列经缺失、取代或添加一个或多个核巧酸 获得的核巧酸序列； 表达ATP-巧樣酸裂解酶的基因具有如（I)、（II)或QII)所示的核巧酸序列： (I)具有如SEQIDNO:2所示的核巧酸序列；[003引（II)具有如SEQIDNO: 2所示的核巧酸序列30%同源性的序列；[003引（III)具有如SEQIDNO:2所示的核巧酸序列经缺失、取代或添加一个或多个核巧 酸获得的核巧酸序列。 在本专利技术的一些实施例中，本专利技术提供的己酷辅酶A增强模块中的表达己酷辅酶 A合酶的基因具有如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列，标记为acs。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的己酷辅酶A增强模块中的表达 ATP-巧樣酸裂解酶的基因具有如SEQIDN0:2所示的核巧酸序列，标记为acl。 在本专利技术的一些实施例中，本专利技术提供的己酷辅酶A增强模块中的表达己醇脱氨 酶的基因具有如SEQIDN0:3所示的核巧酸序列，标记为a化2。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的己酷辅酶A增强模块中的表达己醒 脱氨酶的基因具有如SEQIDN0:4所示的核巧酸序列，标记为aide。[003引在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的己酷辅酶A增强模块中表达己醇脱 氨酶的基因、表达己醒脱氨酶的基因、表达己酷辅酶A合酶的基因和表达ATP-巧樣酸裂解 酶的基因中至少一个W基因表达盒的形式存在于该己酷辅酶A增强模块中。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的己酷辅酶A增强模块中表达己醇脱 氨酶的基因W基因表达盒的形式存在于该己酷辅酶A增强模块，该表达己醇脱氨酶的基因 表达盒包括启动子、表达己醇脱氨酶的基因和终止子。在本专利技术的另外一些实施例中，表达 己醇脱氨酶的基因表达盒中的启动子为PGI1。在本专利技术的另外一些实施例中，表达己醇脱 氨酶的基因表达盒中的终止子为GPM1。 在本专利技术的另外一些实施例中，本专利技术提供的己酷辅酶A增强模块中表达己醒脱 氨酶的基因W基因表达盒的形式存在于该己酷辅酶A增强模块，该表达己醒脱本文档来自技高网...
【技术保护点】
乙酰辅酶A增强模块在增强7‑脱氢胆甾醇在微生物中合成的应用；其中，所述乙酰辅酶A增强模块包括表达乙醇脱氢酶的基因、表达乙醛脱氢酶的基因、表达乙酰辅酶A合酶的基因和表达ATP‑柠檬酸裂解酶的基因。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：肖文海，苏皖，王颖，周晓，刘夺，元英进，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。