【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物育种，特别涉及一种芦竹多倍体的诱导方法。
技术介绍
1、芦竹(arundodonax)为禾本科、芦竹属多年生植物，具发达根状茎，秆粗大直立、坚韧，具多数节，常生分枝，可用于饲料、乙醇、造纸、发电和环境修复等多种行业。现有芦竹繁殖有播种、分株、扦插等方法，一般以分株方法为主，通常是早春时沿植物四周切成有4-5个芽一丛，然后移植，这种方法繁殖速度慢、种苗易带毒，且劳动强度大、运输不便，造林成本高，难以在短时间内解决种苗供应紧缺的问题，不利于芦竹的产业化生产。
2、相对于传统的方法，利用组培技术对芦竹进行繁殖，能够短时间内获得大量整齐一致的无病毒种苗，种苗生长优势明显，是芦竹种苗产业化繁育的一种有效途径。多倍体育种是植物新品种培育的重要手段，多倍体育种起源于20世纪初，现在已广泛应用于植物新品种的培育中。多倍体由于基因组倍性的增加，往往表现出形态上的巨大性和抗性增强等特点。但是传统多倍体育种方法主要以萌动种子、愈伤组织、幼苗、幼根或茎的生长点以及球茎或球根的萌动芽等作为诱导材料，这些材料的细胞生理状态差别较大，在多倍体诱导过程中比较容易出现嵌合体，性状不稳定。
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术提出一种芦竹多倍体的诱导方法。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、一种芦竹多倍体的诱导方法，包括以下步骤：
4、s1、采集芦竹健壮的茎段，去除苞片，选择带芽茎段，洗涤消毒，得到预处理后的外植体；
5、s2、将
6、s3、将s2中的无菌芽接种在培养基b上，光照培养，得到丛生芽；
7、s4、将s3中的丛生芽仅保留分蘖组织团在液体培养基c中浸渍，得到多倍体诱导后的分蘖组织团；
8、s5、将s4中的多倍体诱导后的分蘖组织团接种在液体培养基d上培养，得到再生植株；
9、s6、将s5中的再生植株的叶片通过流式细胞仪进行倍性鉴定；
10、s7、将s6中的再生植株定植炼苗，待再生植株长至20cm以上时，取叶片再鉴定。
11、进一步的，所述步骤s1具体为：在芦竹新笋长出、底部新叶生长但顶部苞片未脱落、叶片未抽出的状态下，采集芦竹健壮的茎段，去除苞片，切成2-3cm带芽茎段，洗涤，在无菌环境中先用70％v/v乙醇溶液浸泡30-60s，无菌水冲洗1-3次，再用0.1％w/v的升汞溶液浸泡10-12min，无菌水冲洗5-7次，得到预处理后的外植体。
12、进一步的，所述步骤s2具体为：在无菌环境下，切去s1中预处理后的外植体茎段两端各2-3mm，接种在ms固体培养基上，芽点接触培养基表面，在温度24-27℃，光照时间12h/24h下培养15-30d，得到无菌芽。
13、进一步的，所述步骤s3具体为：将s2中的无菌芽切成带芽茎段，接种在培养基b上，在温度24-27℃，光照时间12h/24h条件下培养15-30d，得到丛生芽。
14、进一步的，所述步骤s4具体为：仅保留s3中丛生芽的分蘖组织团，在液体培养基c中浸渍24-72h，浸渍期间每隔1-2h摇动一次，得到多倍体诱导后的分蘖组织团。
15、进一步的，所述步骤s5具体为：将s4中多倍体诱导后的分蘖组织团接种在液体培养基d上培养20-40d，得到再生植株。
16、进一步的，步骤s7中，所述定植炼苗的时间为2-3个月。
17、进一步的，所述培养基b组成包括ms培养基、0.5-2mg/l细胞分裂素6-ba和0.3-1.3mg/l激动素kt。
18、进一步的，所述液体培养基c组成包括ms培养基、2.5-7.5mg/ml秋水仙碱和0.3-1.3mg/l激动素kt。
19、进一步的，所述液体培养基d组成包括ms培养基、0.5-2mg/l激动素naa和0.3-1.3mg/l激动素kt。
20、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
21、1、利用本专利技术的诱导方法，能够在芦竹组织培养快繁的基础上，科学配置培养基，合理调节培养条件，快速高效地获得优良性状的芦竹多倍体。
22、2、本专利技术选用特定的秋水仙素浓度范围进行诱导，显著提高芦竹多倍体诱导率，有效降低了嵌合体的发生率。
23、3、传统上芦竹多倍体的诱导材料为胚性愈伤组织或愈伤组织，本专利技术将丛生芽的分蘖组织团作为诱导材料，利用分蘖组织进行多倍体诱导更易于获取材料，本专利技术不仅丰富了现有的芦竹多倍体诱导材料，同时因为芦竹分蘖组织中存在较高的分裂活性，相对于诱导全部丛生芽和愈伤组织来说，诱导分蘖组织团能够显著提高芦竹多倍体诱导率，降低嵌合体的发生率，节省时间和成本，为芦竹新品种选育提供了一条新途径。
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1.一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述步骤S1具体为：在芦竹新笋长出、底部新叶生长但顶部苞片未脱落、叶片未抽出的状态下，采集芦竹健壮的茎段，去除苞片，切成2-3cm带芽茎段，洗涤，在无菌环境中先用70％v/v乙醇溶液浸泡30-60s，无菌水冲洗1-3次，再用0.1％w/v的升汞溶液浸泡10-12min，无菌水冲洗5-7次，得到预处理后的外植体。
3.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述步骤S2具体为：在无菌环境下，切去S1中预处理后的外植体茎段两端各2-3mm，接种在MS固体培养基上，芽点接触培养基表面，在温度24-27℃，光照时间12h/24h下培养15-30d，得到无菌芽。
4.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述步骤S3具体为：将S2中的无菌芽切成带芽茎段，接种在培养基B上，在温度24-27℃，光照时间12h/24h条件下培养15-30d，得到丛生芽。
5.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方
6.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述步骤S5具体为：将S4中多倍体诱导后的分蘖组织团接种在液体培养基D上培养20-40d，得到再生植株。
7.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，步骤S7中，所述定植炼苗的时间为2-3个月。
8.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述培养基B组成包括MS培养基、0.5-2mg/L细胞分裂素6-BA和0.3-1.3mg/L激动素KT。
9.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述液体培养基C组成包括MS培养基、2.5-7.5mg/mL秋水仙碱和0.3-1.3mg/L激动素KT。
10.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述液体培养基D组成包括MS培养基、0.5-2mg/L激动素NAA和0.3-1.3mg/L激动素KT。
...【技术特征摘要】
1.一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述步骤s1具体为：在芦竹新笋长出、底部新叶生长但顶部苞片未脱落、叶片未抽出的状态下，采集芦竹健壮的茎段，去除苞片，切成2-3cm带芽茎段，洗涤，在无菌环境中先用70％v/v乙醇溶液浸泡30-60s，无菌水冲洗1-3次，再用0.1％w/v的升汞溶液浸泡10-12min，无菌水冲洗5-7次，得到预处理后的外植体。
3.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述步骤s2具体为：在无菌环境下，切去s1中预处理后的外植体茎段两端各2-3mm，接种在ms固体培养基上，芽点接触培养基表面，在温度24-27℃，光照时间12h/24h下培养15-30d，得到无菌芽。
4.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方法，其特征在于，所述步骤s3具体为：将s2中的无菌芽切成带芽茎段，接种在培养基b上，在温度24-27℃，光照时间12h/24h条件下培养15-30d，得到丛生芽。
5.如权利要求1所述的一种芦竹多倍体的诱导方...
【专利技术属性】
技术研发人员：张源源，王祥军，李维国，高新生，张晓飞，位明明，黄肖，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院橡胶研究所，
类型：发明
国别省市：
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