【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，特别涉及一种橡胶树蛋白受体激酶hbbak1及其应用。
技术介绍
1、巴西橡胶树(hevea brasiliensis muell.arg.)属于热带乔木，原产于南美亚马逊森林，是天然橡胶的唯一商业来源，在世界经济发展中占据重要地位。天然橡胶的高弹性、可塑性、绝缘性、气密性和耐磨性，使其作为重要战略物资，广泛用于国防、交通、医疗等方面。然而近些年来我国植胶区的广西、海南、云南以及广东多次出现旱情，对橡胶树的生长和生产带来了严重的影响和损失。因此深入开展橡胶树抗旱性研究，找出与橡胶树抗旱性有关基因，对合理配置我国植胶区品系，以及对水资源利用和改善生态环境有着重要的意义。
2、bak1是目前研究较为深入的一种受体激酶，胞外域负责感知信号，跨膜与传递胞外信号至胞内，胞内激酶域将信号传递至下游。bak1主要通过与不同受体激酶结合形成共受体参与多条信号通路赖调节植物生长发育和非生物胁迫反应。bak1参与免疫应答，可以与受体激酶fls2结合，进而磷酸化胞质受体激酶bik1，调节鞭毛蛋白flg22介导的先天性免疫应答，敲除bak1基因后降低了植物对flg22的结合能力，导致flg22的出发反应出现异常，表示bak1在相应病原体分子模式早期信号转导过程中起到正向调控功能，对细胞死亡起到负调控作用，过表达的谷子类受体蛋白激酶基因bak1可以显著抑制转基因拟南芥的细胞死亡，同时bak1对依赖r蛋白的刺激免疫反应具有重要作用。类受体蛋白rlp30以及类受体激酶sobir1与bak1共同参与由四体营养性真菌介导的免疫反
技术实现思路
1、针对现有技术的上述缺陷，本专利技术提出一种橡胶树蛋白受体激酶hbbak1及其应用，以解决上述
技术介绍
提出的问题。
2、为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案:
3、以橡胶树品种‘热研73397’全基因组cdna为模板克隆橡胶树蛋白受体激酶hbbak1基因。
4、一种橡胶树蛋白受体激酶hbbak1，所述hbbak1基因的长度为1845bp，cdna序列如seq id no：1所示。
5、优选地，所述hbbak1基因通过采用seq id no：3和seq id no：4所示的引物对扩增而得。
6、优选地，引物seq id no：3和seq id no：4的序列如下：
7、hbbak1-f：5′-atggagcgaaagatgtgg-3′
8、hbbak1-r：5′-tcatctaggaccagacaac-3′
9、优选地，所述hbbak1基因编码的氨基酸残基有614aa，具体氨基酸序列如seq idno：2所示。
10、优选地，橡胶树蛋白受体激酶hbbak1在制备抗旱转基因植物中的应用。
11、优选地，所述植物包括橡胶、拟南芥。
12、优选地，一种抗旱转基因植株的构建方法，包括以下步骤：
13、(1)提取橡胶树叶片中的总rna，反转录得到cdna第一链；
14、(2)以cdna第一链为模板，seq id no：3和seq id no：4为引物，通过pcr扩增反应获得蛋白受体激酶hbbak1基因的cdna序列，扩增完成的产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳检测目的条带，在紫外灯下切下目的条带后进行纯化回收，连接peasy-blunt zero载体并转化dh5α大肠杆菌感受态，进行菌落pcr检测，送基睿生物科技公司进行测序验证。结果表明hbbak1蛋白受体激酶属于植物受体激酶serk家族成员；
15、(3)以hbbak1基因的cdna序列为模板，hbbak1-hindiii-f：actatagggaatattaagcttatggagcgaaagatgtgggc和hbbak1-xhoi-r:cctctagatgcatgctcgagtctaggaccagacaactcatctgg为引物，扩增产物经hindiii和xhoi双酶切后连接至经相同酶切后的表达载体，利用电击法将带有hbbak1基因的cdna序列的质粒转化为农杆菌gv3101菌株；
16、(4)利用转基因技术将带有转化质粒的农杆菌转化目标植物，获得转基因稳定遗传植株。
17、优选地，携带有所述的目的基因的表达载体可通过使用ti质粒、植物病毒载体、直接dna转化、微注射、电穿孔等常规生物技术方法导入植物细胞中。
18、优选地，peasy-blunt zero载体购自北京全式金生物科技有限公司；dh5α大肠杆菌感受态细胞购自北京博迈德基因技术有限公司。
19、分别对橡胶树(hbbak1)与拟南芥(atbak1)、榴莲(dzbak1)、木薯(mebak1)、柑橘(csbak1)、胡杨(pebak1)、蓖麻(rcbak1)、麻风树(jcbak1)、甜樱桃(pabak1)、葡萄(vrbak1)以及水稻(osbak1)氨基酸序列进行比对，结果表明，平均同源性高达72.63％。
20、分别检测hbbak1在组织中的表达量和在不同种质中的表达量，表达量结果表明：叶片>花>根>茎>胶乳>枝，pr107>热研73397>湛试327-13。
21、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是:
22、对橡胶树蛋白受体激酶基因hbbak1进行相关功能研究，不仅用酵母验证了hbbak1基因的抗逆性，得到hbbak1在聚乙二醇-6000(peg-6000)介导的干旱环境中具有抗干旱的功能，而且对hbbak1基因转化拟南芥进行该基因功能的研究，验证了转基因拟南芥对干旱胁迫的耐受能力得到提高。该基因可用于橡胶树的抗旱转基因研究中，该蛋白受体激酶基因hbbak1来自于橡胶树，对环境影响较小，为提高橡胶树抗旱性提供新的基因资源。
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1.一种橡胶树蛋白受体激酶HbBAK1，其特征在于，所述HbBAK1基因cDNA序列如SEQ IDNO：1所示。
2.根据权利要求1所述的橡胶树蛋白受体激酶HbBAK1，其特征在于，所述HbBAK1基因通过采用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物对扩增而得。
3.根据权利要求1所述的橡胶树蛋白受体激酶HbBAK1，其特征在于，所述HbBAK1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
4.如权利要求1所述的橡胶树蛋白受体激酶HbBAK1在制备抗旱转基因植物中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述植物包括橡胶、拟南芥。
6.一种抗旱转基因植株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种橡胶树蛋白受体激酶hbbak1，其特征在于，所述hbbak1基因cdna序列如seq idno：1所示。
2.根据权利要求1所述的橡胶树蛋白受体激酶hbbak1，其特征在于，所述hbbak1基因通过采用seq id no：3和seq id no：4所示的引物对扩增而得。
3.根据权利要求1所述的橡胶树蛋白受体激...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭冰冰，王真辉，杨洪，刘明洋，代龙军，王立丰，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院橡胶研究所，
类型：发明
国别省市：
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