治疗和诊断分枝杆菌感染的化合物和方法技术

含可溶性牝牛分枝杆菌抗原的致免疫部分之多肽，或其变体，其中所述抗原诱导先前接触过分枝杆菌的患者的免疫反应。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般涉及传染病的检测，治疗和预防。特别是，本专利技术涉及治疗包括结核分枝杆菌和鸟分枝杆菌在内的分枝杆菌感染的化合物和方法。本专利技术进一步涉及起非特异性免疫反应放大剂(amplifier)作用的化合物，和在接种疫苗或抗传染病免疫治疗中，以及在对免疫失调症和癌症的某些治疗中使用这类非特异性免疫反应放大剂作为佐剂。
技术介绍
结核是一种慢性，传染性疾病，它由结核分枝杆菌(M.tubuculosis)感染而引起。它是发展中国家中的主要疾病，并伴随每年新增约8百万病历和3百万死亡人数愈加成为世界发达地区中的难题。尽管这种感染在较长期间内可能是无症状的，这种疾病最常见表现为肺部的慢性炎症，导致发烧和呼吸道症状。如果延误治疗，可产生高发病率和死亡率。虽然用持久的抗菌素治疗一般能控制结核病，但是这类治疗对预防该疾病的蔓延是不够的。被感染的病人可能是无症状的，但在某段时间内可有传染性。此外，虽然遵循治疗方案是关键的，但病人的行为难于监控。有些病人并未完成疗程，这可导致治疗无效并产生出抗药的分枝杆菌。控制结核病蔓延需要有效的疫苗接种和该病的准确、早期诊断。目前，活菌疫苗接种是诱导保护性免疫力的最有效方法。为此目的所使用的最普通的分枝杆菌是Bacillus Calmette-Guerin(BCG)，即牛分枝杆菌的一种无毒株。然而，BCG的安全性和功效是引起争论的一个根源，并且有些国家，如美国，不实施普及大众的接种。一般使用皮试进行分枝杆菌感染的诊断，它包括皮内接触结核菌素PPD(纯化的蛋白质衍生物)。注射后48-72小时，抗原特异性T细胞反应导致在该注射部位产生可测量的硬结，由此表明接触了分枝杆菌抗原。然而，这种皮试一直有敏感性和特异性的问题，并且被BCG接种的个体无法与受感染的个体区分开。已被用于结核病(还有麻风)免疫治疗的一种并非众所周知的分枝杆菌是牝牛分枝杆菌(Mycobacterium vaccae)，它对人类是非病原性的。然而很少有关于牝牛分枝杆菌与BCG比较的功效方面的资料，并且它还没有被广泛应用于普及大众的疫苗接种。牛分枝杆菌BCG和牝牛分枝杆菌被认为含有可被接触过结核杆菌感染的个体免疫系统识别的抗原化合物。因此，在本领域仍存在一种对预防，治疗和检测结核病有效的化合物和方法的需要。专利技术概述简言之，本专利技术提供预防，，以及用于传染病与癌症的疫苗或免疫治疗的佐剂。首先，提供源于牝牛分枝杆菌的多肽，其包含一种抗原的致免疫部分，或此类抗原的变体。在一个实施方案中，所述抗原包含的氨基酸序列选自(a)序列鉴定号1-4,9-16,18-21,23,25,26,28,29,44,45,47,52-55,63,64,70,75,89,94,98,100-105,109,110,112,114,117,118,121,124,125,134,135,140和141中描述的序列；和(b)与如通过计算机算法PLASTP所测试的，序列鉴定号为1-4,9-16,18-21,23,25,26,28,29,44,45,47,52-55,63,64,70,75,89,94,98,100-105,109,110,112,114,117,118,121,124,125,134,135,140和141中描述的序列至少有约99％的概率是相同的序列。其次，本专利技术提供含牝牛分枝杆菌抗原的致免疫部分的多肽，其中所述抗原包括由一种DNA分子编码的氨基酸序列，所述DNA分子选自(a)序列鉴定号40-42,46,48-51,74,88,93,97,99,106-108,111,113,115,116,120,122,123,132,133和136-138中描述的序列；(b)序列鉴定号40-42,46,48-51,74,88,93,97,99,106-108,111,113,115,116,120,122,123,132,133和136-138中描述的序列的互补体；以及(c)与如计算机算法FASTA测试的(a)或(b)序列有至少约99％的概率是相同的序列。还提供编码本专利技术多肽的DNA序列，含这些DNA序列的表达载体，以及用这类表达载体转化或转染的宿主细胞。另外，本专利技术提供含第一和第二专利技术多肽的融合蛋白或(另外的选择)一种专利技术多肽与一种已知结核分枝杆菌抗原的融合蛋白。在其他方面，本专利技术提供药用组合物，其包含至少一种本专利技术多肽，或一种编码此多肽的DNA分子，以及一种生理上可接受的载体。本专利技术还提供含至少一种上述多肽的疫苗和非特异性免疫反应放大剂，以及含至少一个编码此类多肽和非特异性免疫反应放大剂的DNA序列。还有一方面，为诱导病人的保护性免疫力而提供的方法包括给患者施用有效量的一种或多种上述多肽和免疫反应放大剂。在本专利技术的进一步内容中，为检测患者的结核病提供方法和诊断试剂盒。在第一个实施方案中，所述方法包括用一种或多种上述多肽接触患者皮肤细胞并检测病人皮肤的免疫反应。在第二个实施方案中，所述方法包括用至少一种上述多肽接触生物学样品；并检测所述样品中与所述多肽结合之抗体或多肽的存在，由此检测所述生物学样品中的结核杆菌感染。适当的生物学样品包括全血，痰，血清，血浆，唾液，脑脊液和尿。提供的诊断试剂盒包括与足以使所述多肽与病人皮肤细胞接触的装置结合的一种或多种上述多肽。本专利技术还提供含与检测试剂结合的一种或多种本专利技术多肽之诊断试剂盒。还有一方面，本专利技术提供与上述多肽结合的抗体(多克隆和单克隆抗体)，并提供在检测结核杆菌感染中使用它们的方法。本专利技术还提供促进对抗原的非特异性免疫反应的方法。在一个实施方案中，此类方法包括施用一种含选自如下的一种成分的组合物(a)去脂牝牛分枝杆菌细胞，(b)去糖基化牝牛分枝杆菌细胞；(c)去脂和去糖基化牝牛分枝杆菌细胞和(d)牝牛分枝杆菌培养滤出物。在第二个实施方案中，此类方法包括施用一种多肽，所述多肽包含一种抗原的致免疫部分，其中所述抗原包含的序列选自(a)序列鉴定号为114,117和118中描述的序列；(b)与序列鉴定号114,117和118中描述的序列至少有约97％一致性的序列。还有另一方面，提供包括成分选自去脂牝牛分枝杆菌细胞，去糖基化牝牛分枝杆菌细胞，和去脂并去糖基化的牝牛分枝杆菌细胞的组合物，和提供包括此类成分的疫苗以及使用此类组合物和疫苗以诱导患者保护性免疫力的方法。这些方面以及本专利技术的其他方面将在参考下面详细描述和附图时变得显而易见。本文公开的全部参考文献特此引用以其全体作为参考，与分别引用各参考文献一样。附图简述附图说明图1A和1B说明在用活结核分枝杆菌H37Rv感染前用高压消毒过的牝牛分枝杆菌或未分级分离的牝牛分枝杆菌培养滤出物分别免疫小鼠的保护性作用。图2A和2B分别显示按2维聚丙烯酰胺凝胶电泳分析的牝牛分枝杆菌和结核分枝杆菌培养滤出物的成份。图3是从牝牛分枝杆菌获得的抗原85A蛋白质序列与从牛分枝杆菌，结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌获得的相应蛋白质序列的比较。图4A(ⅰ)-(ⅳ)分别说明10微克，100微克和1毫克高压消毒的牝牛分枝杆菌的非特异性免疫放大作用和75微克牝牛分枝杆菌未分级分离培养滤出物的非特异性免疫放大作用。图4B(ⅰ)和(ⅱ)分别说明高压消毒的牝牛分枝杆菌和去脂牝牛分枝杆菌的非特异性免疫放大作用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：P·谭，J·海叶马，E·S·维斯埃尔，M·A·斯金纳，L·M·斯科特，R·L·普雷斯蒂德格，
申请(专利权)人：吉尼西斯研究及发展有限公司，
类型：发明
国别省市：