热休克诱导外源基因高效表达的蓝藻转基因表达系统及其用于表达胸腺素α1的方法技术方案

涉及一种基因工程，构建了包含蓝藻热休克基因ｇｒｏＥＳＬ强启动区、目的基因ＵＢＴα１、ｒｂｃＳ终止区和Ｋｍ标记基因的完整的可高效表达的蓝藻基因表达系统，并运用基因整合平台系统和穿梭质粒系统进行转基因表达胸腺素α１，由于利用热休克基因ｇｒｏＥＳＬ的强启动子，易调控，经热诱导后能几十上百倍地加快转录，同时利用泛素融合技术，使目的基因Ｔα１得到高效表达，本发明专利技术工艺简单，可举一反三，具有很大的开发前景，为产业化开发转基因蓝藻开辟一条新途径。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基因工程。蓝藻(Cyanophyte)又称蓝细菌(Cyanobacterium)，是一种特殊的微生物。蓝藻的基因组简单，除了裸露的染色体DNA外不含叶绿体和线粒体DNA，便于进行基因分析。近年来，已克隆了大量蓝藻基因，建立了一些蓝藻的基因转移系统以及外源基因表达系统。蓝藻作为表达外源基因的受体菌已取得了不少研究成果。Tandeau de Marsac(Mol.Gen.Genet1987，209296～298)以pUC303为载体在单胞藻Synechococcus sp.PCC7942(简称Synechococcus7942，其余藻名依此类推)中表达了原核生物芽孢杆菌杀幼蚊毒素基因；Fukuda等(Biotech.Lett1994，161～6)在Synechococcus 7942中表达了植物的乙烯合成酶基因；Takeshima(Proc.Natl.Acad.Sci USA 1994，919685～9689)把合成的人过氧化物歧化酶基因(h-SOD)置于1，5-核酮糖二磷酸羧化酶基因(rbc)的启动子下在Synechococcus 7942中表达，产物占总蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
热休克诱导外源基因高效表达的蓝藻转基因表达系统，其特征在于根据蓝藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ． ＰＣＣ７９４２的ｇｒｏＥＳＬ操纵子中ＡＴＧ上游２４０ｂｐ片段两端的序列设计一对引物Ｐ１、Ｐ２： Ｐ１ ５′端引物：５′－ＴＣＧＣ＊＊＊ＧＡＣＡＡＣＴＧＴＣ－３′ ＳａｃⅠ Ｐ２ ３′端引物：５′－ＣＣ＊＊＊ＴＴＴＴＧＡＧＴＡＡＡＣＧＴＣＧＴＣＡＣＧＧ－３′ ＳｐｈⅠ Ｐ２的５′端设计了一个ＳｐｈⅠ酶切位点，其切点为ＧＣＡＴＧ↓Ｃ；以蓝藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．ＰＣＣ７９４２基因组ＤＮＡ为模板，以ｐ１和ｐ２引物进行特异性ＰＣＲ扩增得含ｇｒｏＥＳＬ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：章军，徐虹，秦燕，楼士林，黄澜，李根，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]