白色蛹虫草菌及生产工艺制造技术

本发明专利技术涉及一种新的微生物白色蛹虫草。将该菌株扩繁培养后，采用注射法、自然感染法、喷洒法等多种方法接种蚕蛹，蚕幼虫及各种米饭培养基，经２０－２５℃条件下培养可获得了白色蛹虫草子实体。该菌株具有能产生孢子粉，生活力、寄生力强，适应性广，产量高，品质好，易于大量培养等优点。本发明专利技术为利用蛹虫草菌的遗传多样性、选育出高产优质的虫草新品种开辟了新的途径。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种新的微生物，具体地说是一种白色蛹虫草菌及其生产工艺。虫草真菌属于囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属。该属真菌现世界报道已有380余种，国内发现近65种。我国药用虫草历史悠久，特别是冬虫夏草为我国传统的名药材，具有多种医疗和滋补性作用，享誉海内外。此外，有药用价值，民间已习用的种尚有甘肃虫草、大蝉虫草、小蝉虫草、蛹虫草、巴西虫草等。我国不但虫草资源种类丰富，对药用和食用的历史也属世界之最。但是，目前所用的虫草种类几乎全部采自野生，除少数种人工培育至无性阶段外，人工大量培育成完全型(子实体)的种类极少。由于人类的活动，虫草生活的生态环境遭受了严重的破坏，加之人类的连年采挖，野生虫草资源日愈贫乏，许多物种面临灭绝危险，因此，合理利用虫草资源，加快人工培育研究，对于保护及合理开发利用虫草十分重要。目前，国内外有多家在从事虫草菌的人工培育研究工作，并有多项技术申请了专利，综合这些技术不难看出他们的研究大多仅能将虫草菌培养至菌丝体阶段，能够培育成的子实体品种类很少，很难达到商品化大量培育虫草有性阶段--虫草子实体。培养易于在虫体上和培养基上长出子实体的高产、优质并能达到商品化生产子实体的虫草菌是目前虫草人工培养中急需解决的一大难题。本专利技术目的在于提供一种产生虫草孢子粉丰富，生活力、寄生性强，适应性广，产量高，品质好，培养周期短，易于商品化生产虫草子实体的蛹虫草菌种。本专利技术的另一目的在于提供虫草菌的生产工艺，解决目前虫草子实体不能商品化大量培养的问题。以下叙述本专利技术的主要内容一种白色蛹虫草菌株，该菌株已于2000年9月12日保藏在中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.0487。本专利技术所述的菌株是在培养蛹虫草子实体中发现的与蛹虫草子实体不同的白色子实体中获得的，将该白色子实体采用“孢子分离法”获取了该菌株，将该菌株扩繁培养后采用注射法，自然感染法等多种方法接种于蚕蛹体蚕幼虫及各种固体培养基上，经20～25℃条件下培养20-35天，均获得了白色蛹虫草子实体。本专利技术所述的菌株与原蛹虫草菌株主要区别如下区别一，原蛹虫草因菌种在黑暗条件下培养，菌丝体白色，但将其移入室内自然光下或40瓦灯下，12小时后菌丝变成桔黄色。本专利技术所述的菌株在黑暗条件下培养菌丝白色，在光照条件下培养菌丝仍然是黄白色。区别二，蛹虫草子实体橙黄色，圆柱形或扁圆柱形，头部与柄部颜色一致，头部无孢子附着；本专利技术所述的菌株的子实体细条形，子实体白色或柄部颜色淡黄色，头部颜色白色，附有孢子粉。区别三，原蛹虫草子实体上收集不到肉眼可见的孢子粉；本专利技术所述的菌株的子实体上可收集到黄白色粉状孢子粉；本专利技术所述的菌株与原踊虫草菌株的相同点相同点一，该菌株的分生孢子为圆形，无色，透明与原蛹虫草菌的分生孢子大小基本一致；相同点二，该菌株在固体培养上和在蚕蛹体上培育出来的菌丝体和子实体的气味与原蛹虫草菌丝体和子实体气味一致，都有蘑菇鲜香气味；相同点三，该菌株采用蛹虫草生产鉴别方法进行鉴别，均取得了一致的鉴别结果，即溶液颜色由黄色经红色、紫色、兰色变至黑绿色。证明它含有与蛹虫草一致的麦角甾醇及β谷甾醇等甾体化合物。附图说明图1为本专利技术的生产工艺流程图。以下结合附图详细叙述本专利技术的生产工艺流程(1)培养瓶的洗涤消毒将培养瓶在盛有洗涤液水溶液内浸泡20-30分钟，刷洗至洁净透明，再用自来水冲洗干净，然后将培养瓶放入鼓风干燥箱或高压灭菌器内消毒。干热消毒温度为160-180℃，时间为50-70分钟；蒸气消毒压力为1.3-1.4kg/平方厘米，时间为25-35分钟。消毒后放入无菌室内备用。(2)寄主蚕蛹、蚕茧的储存和消毒处理本专利技术所述的蚕蛹为柞蚕蛹、桑蚕蛹、蓖麻蚕蛹及本领域人员公知的其他蚕蛹。选择上述健壮无病、薄皮的优质蚕茧，将其放置在茧床，茧筐等盛茧容器内，放入储茧室储存，储茧室温度为2℃±2℃，室内要求干燥通气，储存时，筐或茧床不能积压，以免压坏蚕蛹。削茧选蛹接种前1-2天将蚕茧从库内取出，用削茧器削破茧壳，将蚕蛹从壳内取出，弃去蚕脱，病蛹，坏蛹，选择健壮蚕蛹放入容器内，移入消毒室消毒处理。洗蛹消毒首先用自来水将蛹体表面冲洗干净，然后将蚕蛹放入盛有消毒液的容器内对蚕蛹进行表面消毒处理。消毒液为70％酒精溶液或1/4的新洁尔灭溶液或其它无毒的能进行表面消毒的常用消毒药品。消毒时间3-5分钟；消毒后用无菌水冲洗干净，放入无菌容器内，移入无菌室储放备用，存放时间不能超过2小时。(3)制备白色蛹虫草菌种A，分离纯化菌种分离白色蛹虫菌所用的培养基配方为蛋白胨10g，蚕蛹粉10g，奶粉10g，葡萄糖10g，琼脂20g，磷酸二氢钾1.5g，磷酸氢二钠1.0g，硫酸镁0.5g，生物素0.1mg，水1000ml，pH5.8。分离方法本专利技术采用组织分离法即将白色蛹虫草子实体取下，用自来水冲洗干净，在无菌条件下，将子实体切成约0.1-0.2cm小块，放入1/4升汞溶液内消毒3-5分钟取出，用无菌水冲洗数次，接入培养基中，25℃条件下黑暗培养。待菌丝萌发，在无菌条件下挑取无杂菌的菌落，移至新的培养基上，继续培养。用同样方法反复挑取，直至纯化至无杂菌感染为止，再将菌株保藏在4℃冰箱中备用。B，菌种的培养母菌种的制备母菌种培养基配方蛋白胨10g，蚕蛹粉10g，奶粉10g，蔗糖10g，磷酸二氢钾1.5g，磷酸氢二钠1.0g，琼脂25g，水1000ml，pH5.8。按配方精确称取上述物质，首先将25g琼脂放入1000ml烧杯中，加入600ml热水浸泡10分钟，然后加热至琼脂完全溶化，另取500ml烧杯，将10g蚕蛹粉放入杯内加热开水200ml，浸泡30分钟，4层纱布过滤，弃去蛹渣，在蛹粉水内加入蛋白胨、奶粉、蔗糖，使之溶解。再另取一支50ml烧杯，将磷酸二氢钾，磷酸氢二钠放入杯中，加入200ml水，充分溶解后，一并倒入1000盛有琼脂液的烧杯中，定容1000ml，充分搅拌均匀后，将培养基分装在100ml三角瓶中，每瓶40毫升，瓶口用棉塞，牛皮纸线绳扎好放入高压灭菌锅内灭菌，压力为1.2kg/平方厘米，时间为25分钟，取出移入洁净工作台中，冷却后，接入白色蛹虫菌种。液体菌种的制备液体菌种的配方为蛋白胨5g，蚕蛹粉5g，奶粉5g，葡萄糖5g，磷酸二氢钾1.5g，磷酸氢二钠1.0g，硫酸镁0.5g，生物素0.1mg，水1000ml，pH5.8。按配方精确称取上述物质，充分搅拌后分装在500ml三角瓶内，每瓶250ml，瓶口用棉塞或塑料膜封扎好，置高压灭菌锅内灭菌，压力1.2kg/平方厘米，时间30分钟，取出，置洁净工作台内，冷却后接入白色蛹虫草菌种。在25℃振荡培养72小时。固体菌种的制备固体菌种培养基配方为每500毫升菌种瓶内加入大米或小米或本领域内人员公知的其他物质60g，水60ml，瓶口用聚丙膜封口，线绳扎好后，置高压灭菌锅内灭菌。压力为1.2kg/平方厘米，时间为40分钟。取出冷却后，在无菌条件下接入白色蛹虫草菌种，移入培养室内培养架上黑暗培养，培养温度为25℃±2℃。(4)接种蚕蛹及培育白色蛹虫草及子实体。A，接种蚕蛹注射接种法在无菌条件下用医用注射器吸取菌液，注入蚕蛹体内，接种量柞蚕蛹0.5-1.0ml/蛹；蓖麻，桑蚕蛹0.1-0.2ml/蛹本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白色蛹虫草菌株，其特征在于保藏号为ＣＧＭＣＣ ＮＯ．０４８７。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：苑桂华，徐哲，徐道田，张亚彬，
申请(专利权)人：吉林东北虎药业股份有限公司，徐哲，苑桂华，
类型：发明
国别省市：22[中国|吉林]