采用丙型肝炎病毒非结构蛋白进行的基因免疫制造技术

本发明专利技术公开了一种编码丙型肝炎非结构蛋白的核酸分子（包括具体公开的ＤＮＡ序列）。还公开了药物组合物，它包含编码ＮＳ３、ＮＳ４和ＮＳ５，或它们组合的核苷酸序列的丙型肝炎非结构蛋白的核酸分子，该核酸分子和人体细胞内功能性的调控元件可操作性相连。还公开了对丙型肝炎病毒易感或被感染的个体进行免疫的方法，该方法包括施用这些药物组合物。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及重组核酸分子和包含例如与基因免疫方案中抗丙型肝炎病毒的疫苗组分同样有用的药物组合物；涉及诱导抗丙型肝炎病毒感染的免疫应答的方法；并涉及治疗患有丙型肝炎感染的病人的方法。
技术介绍
丙型肝炎病毒(HCV)，由输血获得的非甲非乙型肝炎的主要病原体，在美国每年引起了大约150,000起的急性病毒性肝炎的新病例。(Choo，等，科学，1989,244,359-362.)在西方国家，有0.6％至2.0％的流行率，而在世界的一些不发达地区要高达15％。(Heintges，等，Hepathology,1997,26,521-526.)大约一半的此类感染会演变成和肝硬化以及/或肝癌相关的慢性感染。(Alter，等，科学，1992,258,135-140；和alter，等，新英格兰医学杂志，1992,327,1899-1905).此外，抗丙型肝炎病毒抗体的流行显示，丙型肝炎病毒的感染是肝细胞癌发展的一种独立的危险因素(Colombo，等，Lancet,1989,ii,1006-1008；Saito，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1990,87,6547-6549；Simonetti，等，An.Int.Med.,1992,116,97-102；和Tsukuma，等，新英格兰医学杂志，1993,328,1797-1801)。丙型肝炎病毒是一种具有衣壳的正链RNA病毒，长度大约为9,500核苷酸，最近被分类为黄病毒属的一个独立种。(Heinz,Arch.Virol.(Suppl.),1992,4,163-171.)不同的分离物显示出相当多的核酸序列多样性，导致将HCV的基因组进一步分成八个基因型。(Simmonds，等，J.Gen.Virol.,1993,74,2391-2399.)在所有的基因型中，病毒基因组都包含一个大的开放阅读框(ORF)，编码一条由3010到3033个氨基酸组成的，大约330Kd的多聚蛋白前体。(Choo，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1991,88,2451-2455；Inchauspe,等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1991,88,10292-10296；Kato，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1990,87,9524-9528；Okamoto，等，病毒遗传学杂志，1991,72,2697-704；和Takamizawa，等，J.Gen.Virol.,1991,65,1105-1113.)通过该多聚蛋白前体的蛋白水解加工产生了核心蛋白(C)，衣壳蛋白(E1,E2)和非结构(NS2-NS5)蛋白，从而产生出各种HCV多肽。(Bartenschlager，等，病毒遗传学杂志，1993,67,3835-3844；Grakoui，等，病毒遗传学杂志杂志，1993,67,2832-2843；及Selby，等，病毒遗传学杂志，1993,74,1103-1113)。这种蛋白水解是联合采用细胞蛋白酶和病毒编码的蛋白酶进行催化反应的。NS3基因编码一种丝氨酸蛋白酶，此酶能在几种功能部位切断转录后的病毒多聚蛋白前体，还可以作为蛋白解旋酶起作用。NS5区域编码此病毒的RNA依赖的RNA聚合酶。除了转录区域外，HCV基因组还包含一个5’非翻译区域(5’UTR)和一个3’非翻译区域(3’UTR)。该324至341的5’非翻译区域核酸序列代表了迄今为止报道过的所有HCV分离物中最保守的核酸序列。(Han，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1991,88,1711-1715；和Bukh，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1992,89,4942-4946)。该5’非翻译区域被假定包含了HCV RNA复制和/或翻译的重要调控元件。该5’非翻译区域还包含了数个小的开放阅读框(ORF)，但现今尚未有证据提示这些开放阅读框被真实翻译。在HCV感染期间涉及肝损伤和病毒清除的细胞免疫机制只是部分的被说明。在尝试检测慢性HCV感染病人中肝浸润淋巴细胞的潜在致病作用时，Koziel等检验了细胞毒T淋巴细胞(CTL)对这些细胞的反应，并证明HLAⅠ类限制性的CD8+细胞毒T淋巴细胞应答针对HCV多肽的结构和非结构区域。(Koziel，等，病毒学杂志1993,67,7522-7532；和Koziel，等，免疫学杂志，1992,149,3339-3344)。其他研究者也注意到在外周血单核细胞群体中存在细胞毒T淋巴细胞，它能识别慢性HCV感染时的病毒核心上的和其它病毒相关蛋白上的表位。(Kita，等，Heatol.,1993,18,1039-1044；和Cerny，等，Intl.Symp.virol Hepatitis Liver Dis.,1993,83(abstr.).)Botarelli，等，(Botarelli，等，Gastroenterol.,1993,104,580-587)和Ferrari，等，(Ferrari,Hepatol.,1994,19,286-295)发现了针对慢性HCV感染病人体内得到的HCV的不同区域的几种重组蛋白的HLAⅡ类限制性的CD4+T细胞介导的增殖反应。在有效HCV感染中，体液和细胞免疫应答已显示是多克隆、多特异性的。很可能在持续HCV感染中产生的宿主免疫应答，部分的引了肝细胞损伤。然而，这些免疫应答不足够广泛或强大，以在慢性HCV感染的病人体内促进病毒清除和保护性免疫力。(Chisari,J.Clin.Invest.,1997,99,1472-1477.)最近显示，那些从急性HCV感染中恢复的病人能产生很强的对非结构蛋白多肽CD4+T细胞增殖反应。(Missale，等，J.Clin.Invest.,1996,98,706-714；和Diepolder，等，Lancet,1995,346,1006-1007.)更重要的是，HCV特异性CTL活性的产生是和慢性肝炎个体体内病毒复制的控制相联系的。(Rehermann,等，J.Clin.Invest.,996,98,1432-1440；和Nelson，等，J.Immunol.,1997,158,1473-1481.)然而，非结构蛋白NS3,NS4和NS5是否有足够的免疫原性能够在体内产生广泛的、强有力的CTL应答尚不知道。现今还没有通用的、高效的对慢性HCV感染的治疗方法。HCV疫苗策略的开发是复杂的，不仅是由于HCV分离物的显著的异质性，还由于在一个病毒分离物中混合了异源基因组。(Martell，等，J.Virol.,1992,66,3225.)此外，病毒包含了一个高度可变的衣壳区。有效的治疗仅限于干扰素。(Carithers,et al,Hepatology,1997,26,83S-88S.)事实上，用这种制剂治疗的病人大约8-10％有反应，并有HCV从肝部的扩散。然而，近来的研究显示，和那些获得持续性HCV感染的病人比较，从急性HCV感染中恢复的病人对非结构蛋白产生了充分的CD4+T细胞增殖反应。(Missale，等，J.Clin.Invest.,1996,98,706-714；和Diepolder，等，Lancet,19本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组核酸分子，其特征在于，它包含编码丙型肝炎非结构蛋白的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：J万德斯，J恩克，
申请(专利权)人：总医院有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]