微泡在医学疾病和病况的诊断、预后以及治疗中的用途制造技术

本发明专利技术提供了微泡在医学疾病和病况的诊断、预后以及治疗中的用途。本发明专利技术公开的主题涉及通过检测分离自受试者生物样本的微泡中的生物标志物来辅助诊断、预后、监测和评价该受试者的疾病或其他医学病况的方法。此外，所公开的主题涉及通过确定生物样本内的微泡浓度来诊断、监测疾病的方法；涉及通过给予包含核酸或蛋白质的微泡而将所述核酸或蛋白质都递送到靶标的方法；涉及通过将不含微泡或富含微泡的流体部分引入患者而实施体液输注的方法。

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2009年02月02日，申请号为200980111107.0，专利技术名称为“微泡在医学疾病和病况的诊断、预后以及治疗中的用途”的专利技术专利申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求于2008年2月1日提交的美国临时申请61/025,536和于2008年9月26日提交的美国临时申请61/100,293的优先权，其中每篇专利申请以其整体通过引用并入本文。政府支持本专利技术是在由国家癌症研究所(NationalCancerInstitute)颁发的资助金NCICA86355和NCICA69246的政府支持下形成的。政府对本专利技术具有某些权利。
本专利技术涉及医学诊断、患者监控、治疗效力评价、核酸和蛋白质递送以及输血等领域。
技术介绍
成胶质细胞瘤是高度恶性的脑肿瘤，尽管进行了大量的研究和临床工作，但是该肿瘤的预后较差(Louisetal.，2007)。这种肿瘤的侵入本性使得不可能完全手术切除，并且平均存活时间仅为约15个月(Stuppetal.，2005)。成胶质细胞瘤细胞以及许多其他肿瘤细胞具有使间质环境转变为对其自身有利的显著能力。肿瘤细胞直接改变周围的正常细胞以有利于肿瘤细胞的生长、侵入、化学抗性、免疫逃避和转移(Mazzoccaetal.，2005；Muerkosteretal.，2004；Singeretal.，2007)。肿瘤细胞还抢夺正常脉管系统并刺激迅速形成新的血管从而向肿瘤提供营养(CarmelietandJain，2000)。尽管免疫系统初始可以抑制肿瘤生长，但是经常通过免疫抑制途径的肿瘤激活而逐步钝化(Gabrilovich，2007)。细胞脱落的小微泡称为外来体(Theryetal.，2002)。外来体据报道为具有约30-100nm的直径并且在正常和病理学状况下从许多不同细胞类型上脱落(Theryetal.，2002)。这些微泡最开始被描述为从成熟网织红细胞的细胞表面上弃去转铁蛋白-受体的机制(PanandJohnstone，1983)。通过(胞)内体膜向内出芽而形成外来体，从而产生了随后与质膜融合的胞内多泡体(MVB)，并向外部释放外来体(Theryetal.，2002)。然而，现在有证据表明外来体更直接的释放。据称，某些细胞如JurkatT细胞直接通过质膜向外出芽而脱落外来体(Boothetal.，2006)。由细胞脱落的所有膜囊在本文中统称为微泡。据称，果蝇(Drosophilamelanogaster)中的微泡(所谓的阿尔戈体(argosome))含有诸如无翅蛋白的形态发生素并且通过发育中的果蝇胚胎中的成虫盘上皮在较长的距离上移动(Grecoetal.，2001)。据称，在精液中发现的微泡(称作前列腺小体)具有广泛的功能，包括促进精子运动、稳定顶体(acrosome)反应、辅助免疫抑制和抑制血管生成(Delvesetal.，2007)。另一方面，据称由恶性前列腺细胞释放的前列腺小体促进血管生成。据称，微泡转移蛋白质(Macketal.，2000)并且近期研究表明从不同细胞系分离的微泡也可以含有信使RNA(mRNA)和微小RNA(miRNA)，并且可以将mRNA转移到其他细胞类型(Baj-Krzyworzekaetal.，2006；Valadietal.，2007)。据称来源于B细胞和树突细胞的微泡具有有效的体内免疫-刺激和抗肿瘤作用并且已经用作抗肿瘤疫苗(Chaputetal.，2005)。据称树突细胞来源的微泡含有对于T细胞活化所必需的共刺激蛋白，而大多数肿瘤细胞来源的微泡不含有该蛋白(WieckowskiandWhiteside，2006)。从肿瘤细胞分离的微泡可以起到抑制免疫反应和加速肿瘤生长的作用(Claytonetal.，2007；Liuetal.，2006a)。乳腺癌微泡可以刺激血管生成，而血小板来源的微泡可以促进肿瘤发展和肺癌细胞转移(Janowska-Wieczoreketal.，2005；Millimaggietal.，2007)。通过积累促进无限制细胞生长的遗传改变而引发癌。已表明每个肿瘤平均具有约50-80个在非肿瘤细胞中不存在的突变(Jonesetal.，2008；Parsonsetal.，2008；Woodetal.，2007)。目前检测这些突变谱(曲线，profile)的技术包括活检样本分析和对在体液(如血液)中循环的突变肿瘤DNA片段的非侵入式分析(Diehletal.，2008)。前一种方法是侵入性的、复杂的并且可能对受试者造成伤害。而后一种方法由于体液中突变癌DNA拷贝数极低，因而天生缺乏敏感性(Gormallyetal.，2007)。因此，癌诊断所面临的一个挑战是开发可以通过非侵入性方式检测不同阶段肿瘤细胞的诊断方法，并且该方法具有高灵敏度和特异性。还已表明基因表达谱(编码mRNA或微小RNA)可以区别癌性和非癌性组织(Jonesetal.，2008；Parsonsetal.，2008；Schetteretal.，2008)。然而，目前检测基因表达谱的诊断技术需要组织的侵入性活检。一些活检程序导致高风险并且可能是有害的。此外，在活检程序中，从有限区域获取组织样本并且该组织样品可能产生假阳性或假阴性，特别是在异质肿瘤和/或分散在正常组织内的肿瘤中。因此，高度需要用于检测生物标志物的非侵入性并且灵敏的诊断方法。
技术实现思路
一般地，本专利技术是一种用于检测受试者中是否存在包含在微泡中的各种各样的生物标志物的新型方法，借此辅助诊断、监测和评价与微泡生物标志物有关的疾病、其他医学病况(病症，condition)和治疗效力。本专利技术的一个方面是用于辅助诊断或监测受试者的疾病或其他医学病况的方法，其包括以下步骤：a)从来自受试者的生物样本中分离微泡部分；和b)检测该微泡部分内是否存在生物标志物，其中生物标志物与疾病或其他医学病况有关。这些方法可以进一步包括将检测步骤的结果与对照进行比较的步骤或多个步骤(例如，将样本中检测的一个或多个生物标志物的量与一个或多个对照水平进行比较)，其中如果检测步骤的结果与对照相比具有可测量的差异，则将该受试者诊断为患有所述疾病或其他医学病况(例如，癌)。本专利技术的另一个方面是一种辅助评价在受试者中的治疗效力的方法，其包括以下步骤：a)从受试者的生物样本中分离微泡部分(组分，fraction)；和b)检测该微泡部分内是否存在生物标志物，其中所述生物标志物与疾病或其他医学病况的治疗效力有关。该方法可以进一步包括在一段时间内提供一系列来自受试者的生物样本的步骤。另外本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断方法，其中，所述方法辅助检测受试者的疾病或其他医学病况，所述方法包括以下步骤：(a)从来自所述受试者的生物样本中分离微泡部分；(b)检测在所述微泡部分内是否存在生物标志物，其中所述生物标志物与所述疾病或其他医学病况有关。

【技术特征摘要】
2008.02.01 US 61/025,536;2008.09.26 US 61/100,2931.一种诊断方法，其中，所述方法辅助检测受试者的疾病或其他医学病况，所述方法包
括以下步骤：
(a)从来自所述受试者的生物样本中分离微泡部分；
(b)检测在所述微泡部分内是否存在生物标志物，其中所述生物标志物与所述疾病或
其他医学病况有关。
2.一种监测方法，其中，所述方法辅助监测受试者的疾病或其他医学病况的状态，所述
方法包括以下步骤：
(a)从来自所述受试者的生物样本中分离微泡部分；
(b)检测在所述微泡部分内是否存在生物标志物，其中所述生物标志物与所述疾病或
其他医学病况有关。
3.一种评价方法，其中，所述方法辅助评价在患有疾病或其他医学病况的受试者中的
治疗效力，所述方法包括以下步骤：
(a)从来自所述受试者的生物样本中分离微泡部分；
(b)检测在所述微泡部分内是否存在生物标志物，其中所述生物标志物与所述疾病或
其他医学病况的治疗效力有关。
4.一种诊断方法，其中，所述方...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·卡尔·奥洛夫·斯科格，克桑德拉·O·布莱克费尔德，丹尼斯·布朗，凯文·C·米兰达，雷莱塔·M·鲁索，
申请(专利权)人：总医院有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US