抗体介导的切昆贡亚热病毒的中和制造技术

本发明专利技术涉及结合并中和切昆贡亚热病毒(Chikungunya virus)(CHIKV)的抗体及其使用方法。

Neutralizing antibody mediated chikungunya virus

The present invention relates to bind to and neutralize chikungunya virus (Chikungunya virus) (CHIKV) antibodies and methods of use.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体介导的切昆贡亚热病毒的中和本申请要求于2015年4月14日提交的美国临时申请系列No.62/147,354的优先权的权益，其全部内容在此通过引用并入。背景本专利技术在国家卫生研究院授予的基金号K08AI103038，F32AI096833和U54AI057157的政府支持下完成的。专利技术背景1.
本公开一般涉及医药、传染疾病和免疫学领域。更具体地，本公开涉及中和切昆贡亚热病毒的抗体。政府对本专利技术享有特定的权益。2.
技术介绍
切昆贡亚热病毒(Chikungunyavirus，CHIKV)是披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(Alphavirus)中的包膜的正义RNA病毒，由伊蚊(Aedes)蚊子传播。成熟的CHIKV病毒体含有两种糖蛋白，E1和E2，它们是由前体多聚蛋白p62-E1通过蛋白水解切割产生的。E2在病毒附着中起作用，而E1介导膜融合以允许病毒进入(Kielian等,2010)。在人类中，CHIKV感染引起发热和关节疼痛，这可能是严重的并且在某些情况下持续多年(Schilte等,2013；Sissoko等,2009；Staples等,2009)。CHIKV在撒哈拉以南非洲大部分地区以及亚洲、欧洲、印度洋和太平洋的部分地区引起爆发。2013年12月，在西半球发生了CHIKV的第一次传播，在圣马丁(CDC2013)鉴定了本地病例(autochthonouscase)。该病毒迅速蔓延到加勒比地区的所有岛屿以及中美洲、南美洲和北美洲。在不到一年的时间里，西半球就有超过一百万的CHIKV疑似病例被报道，包括美国在内的40多个国家的流行传播被记录在案(CDC，2014)。目前，没有获得许可的疫苗或抗病毒治疗来预防或治疗CHIKV感染。尽管对人类CHIKV感染的保护性免疫机制尚未完全了解，但体液应答控制感染并限制组织损伤(Chu等,2013；Hallengard等,2014；Hawman等,2013；Kam等,2012b；Lum等,2013；Pal等,2013)。免疫人γ-球蛋白中和培养细胞中的感染性，并当在病毒接种后24小时内施用时预防小鼠发病(Couderc等,2009)。已经描述了几种中和CHIKV感染的鼠单克隆抗体(mAb)(Brehin等,2008；Goh等,2013；Masrinoul等,2014；Pal等,2013；Pal等,2014)，包括一些当联合使用以治疗CHIKV攻击后的小鼠或非人灵长类动物时具有功效的(Pal等,2013；Pal等,2014)。相比之下，已经报道了有限数量的人CHIKVmAb，其中绝大多数显示出适度的中和活性(Fong等,2014；Fric等,2013；Lee等,2011；Selvarajah等,2013；Warter等,2011)。
技术实现思路
因此，根据本公开，提供了一种检测受试者中的切昆贡亚热病毒感染的方法，其包括(a)使来自所述受试者的样品与具有分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段接触；和(b)通过所述抗体或抗体片段与所述样品中的E2的结合检测所述样品中的切昆贡亚热病毒糖蛋白E2。所述样品可以是体液，如血液、痰液、眼泪、唾液、粘液或血清、尿液或粪便。检测可包括ELISA、RIA或蛋白质印迹。所述方法可进一步包括第二次进行步骤(a)和(b)，和确定与第一次测定相比E2水平的变化。所述抗体可以通过如表1所示的克隆配对可变序列编码，或通过与如表1所示的克隆配对可变序列具有70％、80％、90％或95％同一性的轻链和重链可变序列编码，或具有由如表2所示的克隆配对序列表征的轻链和重链可变序列，或与来自表2的克隆配对序列具有70％、80％、90％或95％同一性。所述抗体片段可以是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。所述抗体可以是IgG和/或嵌合抗体。在另一个实施方式中，提供了一种治疗感染有切昆贡亚热病毒的受试者，或降低处于感染(contracting)切昆贡亚热病毒风险的受试者的感染可能性的方法，其包括向所述受试者递送抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段具有分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列。所述抗体可以通过如表1所示的克隆配对可变序列编码，或通过与如表1所示的克隆配对可变序列具有70％、80％、90％或95％同一性的轻链和重链可变序列编码，或具有由如表2所示的克隆配对序列表征的轻链和重链可变序列，或与来自表2的克隆配对序列具有70％、80％、90％或95％同一性。所述抗体片段可以是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。所述抗体可以是IgG和/或嵌合抗体。所述抗体和抗体片段可以在感染前或感染后施用。递送可包括抗体或抗体片段施用，或使用编码所述抗体或抗体片段的RNA或DNA序列或者载体进行遗传递送。在又一个实施方式中，提供了一种单克隆抗体，其中，所述抗体或抗体片段的特征在于分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列。所述抗体可以通过如表1所示的克隆配对可变序列编码，或通过与如表1所示的克隆配对可变序列具有70％、80％、90％或95％同一性的轻链和重链可变序列编码，或具有由如表2所示的克隆配对序列表征的轻链和重链可变序列，或与来自表2的克隆配对序列具有70％、80％、90％或95％同一性。所述抗体片段可以是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。所述抗体可以是嵌合抗体，或靶向除糖蛋白之外的切昆贡亚热病毒抗原的双特异性抗体。所述抗体可以是IgG。所述抗体或抗体片段进一步包含细胞穿透肽和/或是内抗体。还提供的是编码抗体或抗体片段的杂交瘤或工程细胞，其中所述抗体或抗体片段的特征在于分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列。所述抗体可以通过如表1所示的克隆配对可变序列编码，或通过与如表1所示的克隆配对可变序列具有70％、80％、90％或95％同一性的轻链和重链可变序列编码，或具有由如表2所示的克隆配对序列表征的轻链和重链可变序列，或与来自表2的克隆配对序列具有70％、80％、90％或95％同一性。所述抗体片段可以是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。所述抗体可以是嵌合抗体和/或IgG。所述抗体或抗体片段可进一步包含细胞穿透肽和/或是内抗体。在一个实施方式中，分离的特异性结合切昆贡亚热病毒糖蛋白E2的单克隆抗体或其抗原结合片段包含选自下组的重链和轻链可变序列对：SEQIDNOs:53/54、55/56、57/58、59/60、61/62、63/64、65/66、67/68、70/71、72/73、74/75、76/77、81/82、83/84、85/86、87/88、89/90、91/92、93/94、95/96和97/98。在一个实施方式中，分离的特异性结合切昆贡亚热病毒糖蛋白E2的单克隆抗体或其抗原结合片段包含分别为SEQIDNOs:103、104和105的CDRH1、CDRH2和CDRH3氨基酸序列，以及分别为SEQIDNOs:187、188和189的CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列。在一个实施方式中，分离的特异性结合切昆贡亚热病毒糖蛋白E2的单克本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测受试者中的切昆贡亚热病毒的方法，其包括：(a)使来自所述受试者的样品与具有分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段接触；和(b)通过所述抗体或抗体片段与所述样品中的E2的结合检测所述样品中的切昆贡亚热病毒糖蛋白E2。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.14 US 62/147,3541.检测受试者中的切昆贡亚热病毒的方法，其包括：(a)使来自所述受试者的样品与具有分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列的抗体或抗体片段接触；和(b)通过所述抗体或抗体片段与所述样品中的E2的结合检测所述样品中的切昆贡亚热病毒糖蛋白E2。2.权利要求1的方法，其中，所述样品是体液。3.权利要求1-2的方法，其中，所述样品是血液、痰液、眼泪、唾液、粘液或血清、尿液或粪便。4.权利要求1-3的方法，其中，检测包括ELISA、RIA或蛋白质印迹。5.权利要求1-4的方法，其进一步包括第二次进行步骤(a)和(b)，和确定与第一次检测相比E2水平的变化。6.权利要求1-5的方法，其中，所述抗体或抗体片段通过如表1所示的克隆配对可变序列编码。7.权利要求1-5的方法，其中，所述抗体或抗体片段通过与如表1所示的克隆配对可变序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变序列编码。8.权利要求1-5的方法，其中，所述抗体或抗体片段通过与如表1所示的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变序列编码。9.权利要求1-5的方法，其中，所述抗体或抗体片段包含根据来自表2的克隆配对序列的轻链和重链可变序列。10.权利要求1-5的方法，其中，所述抗体或抗体片段包含与来自表2的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变序列。11.权利要求1-5的方法，其中，所述抗体或抗体片段包含与来自表2的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变序列。12.权利要求1-11的方法，其中，所述抗体片段是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。13.一种治疗感染有切昆贡亚热病毒的受试者，或降低处于感染切昆贡亚热病毒风险的受试者的感染可能性的方法，其包括向所述受试者递送抗体或抗体片段，所述抗体或抗体片段具有分别来自表3和4的克隆配对重链和轻链CDR序列。14.权利要求13的方法，所述抗体或抗体片段通过如表1所示的克隆配对轻链和重链可变序列编码。15.权利要求13-14的方法，所述抗体或抗体片段通过与如表1所述的具有95％同一性的克隆配对轻链和重链可变序列编码。16.权利要求13-14的方法，其中，所述抗体或抗体片段通过与来自表1的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变序列编码。17.权利要求13的方法，其中，所述抗体或抗体片段包含根据来自表2的克隆配对序列的轻链和重链可变序列。18.权利要求13的方法，其中，所述抗体或抗体片段包含与来自表2的克隆配对序列具有70％、80％或90％同一性的轻链和重链可变序列。19.权利要求13的方法，通过与来自表2的克隆配对序列具有95％同一性的轻链和重链可变序列编码。20.权利要求13-19的方法，其中，所述抗体片段是重组ScFv(单链片段可变)抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或Fv片段。21.权利要求13-20的方法，其中，所述抗体是IgG。22.权利要求13-19的方法，其中，所述抗体是嵌合抗体。23.权利要求13-22的方法，其中，所述抗体或抗体片...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·E·克罗，S·A·史密斯，T·德莫迪，L·席尔瓦，
申请(专利权)人：范德比尔特大学，
类型：发明
国别省市：美国,US