热稳定性疫苗组合物及其制备方法技术

本公开提供涉及热稳定性疫苗的组合物和其制备方法。具体而言，本公开提供制备热稳定性疫苗的方法，其基于重组蓖麻蛋白神经毒素蛋白质并且使用辅佐剂开发能够在对象中诱发免疫应答的组合物。

Thermostability vaccine composition and preparation method

The present disclosure provides a composition and a preparation method of a thermostability vaccine. Specifically, the disclosure provides a method for preparing a thermostable vaccine, which is based on recombinant ricin neurotoxin protein and uses adjuvants to develop a composition that can induce immune response in objects.

【技术实现步骤摘要】
热稳定性疫苗组合物及其制备方法本申请是专利技术名称为“热稳定性疫苗组合物及其制备方法”、申请号为“201280035108.3(PCT/US2012/038457)”、申请日为2012年5月17日的申请的分案申请。政府支持声明本专利技术在国立健康研究所UO1-A1-08-2210授权下由政府支持作出。政府具有本专利技术的某些权利。
本专利技术一般涉及干燥疫苗组合物的领域。更具体而言，涉及生产结合至佐剂并且包含免疫刺激分子的干燥疫苗组合物的方法。
技术介绍
包含重组蛋白的疫苗受益于或绝对需要佐剂，以诱发免疫应答。(Callahan等,1991,Theimportanceofsurfacechargeintheoptimizationofantigen-adjuvantinteractions,Pharm.Res.8(7):851-858；Singh和O'Hagan1999,Advancesinvaccineadjuvants,NatBiotechnol17(11):1075-81；以及O'Hagan等,2001,Recentdevelopmentsinadjuvantsforvaccinesagainstinfectiousdiseases,BiomolEng18(3):69-85)。铝盐佐剂是目前最广泛使用的一般用于人的佐剂，这是因为在施用至儿童和成人的疫苗中安全使用的长久历史。FDA批准的疫苗中目前出现的唯一佐剂是铝盐佐剂、氢氧化铝和磷酸铝。铝盐佐剂提高疫苗的免疫原性并且通过减少疫苗中蛋白质剂量水平引起接种结果的显著提高，提高了保护性抗体的滴度，并且减少了在已经完成主要系列接种之后的每年接种需要。但是，在基于重组蛋白、肽和化学合成疫苗的许多亚单位疫苗中铝盐佐剂的使用存在明显的限制。这些限制包括疫苗存储和稳定性的一般方面，因为包含铝佐剂的疫苗仅仅在窄温度范围内可存储，并且不能冷冻。进一步限制包括普遍接受的观点：铝佐剂相对弱，不促进细胞免疫的发展，并且在中和抗体需要用于阻断病毒感染或阻止生物毒素活性的情况下可利于开发非中和的抗体。在铝佐剂的情况下，已经建议，为了提供足够的免疫原性，抗原必须被吸附在佐剂的表面上。(Gupta等,1995,AdjuvantPropertiesofAluminumandCalciumCompounds.PharmaceuticalBiotechnology.6:229-248；以及White和Hem,2000,Characterizationofaluminium-containingadjuvants,DevBiol(Basel)103:217-28)。通常通过抗原和佐剂之间的静电相互作用促进该吸附，并且通常选择配制pH以使抗原和佐剂带相反的电荷(Callahan等1991)。也可通过与缓冲盐如磷酸盐、琥珀酸盐和柠檬酸盐的表面交换反应，改变佐剂上的表面电荷(Hem和White,1984,Characterizationofaluminumhydroxideforuseasanadjuvantinparenteralvaccines.JParenterSciTechnol,38(1):p.2-10；Chang等,1997,Roleoftheelectrostaticattractiveforceintheadsorptionofproteinsbyaluminumhydroxideadjuvant.PDAJPharmSciTechnol,51(1):p.25-9；以及Rinella等,1996,Treatmentofaluminiumhydroxideadjuvanttooptimizetheadsorptionofbasicproteins.Vaccine,14(4):p.298-300)。对铝盐佐剂的作用机制了解不多，但是可能是由于数个不同的机制。(Lindblad2004."Aluminiumcompoundsforuseinvaccines"Immunol.Cell.Biol.82(5):497-505；Gupta和Siber,1995,AdjuvantsforHumanVaccines--CurrentStatus,ProblemsandFuture-Prospects.Vaccine13(14):1263-1276；Gupta和Rost,2000,AluminumCompoundsasVaccineAdjuvants,InO'HaganD,editorVaccineAdjuvants:PreparationMethodsandResearchProtocols,ed.,Totowa,N.J.:HumanaPressInc.p65-89；Cox和Coulter,1997,Adjuvants--aclassificationandreviewoftheirmodesofaction,Vaccine15(3):248-256)。通常提出的机制是佐剂用作在注入部位的储库，其中抗原在施用后缓慢释放。(Cox和Coulter，1997)。另一提出的机制是佐剂帮助递送抗原至抗原呈递细胞(Lindblad2004)。进一步提出的机制是佐剂用作免疫刺激剂并且诱发Th2细胞因子(Grun和Maurer1989,DifferentThelpercellsubsetselicitedinmiceutilizingtwodifferentadjuvantvehicles:theroleofendogenousinterleukin1inproliferativeresponses.CellImmunol121(1):134-145)。仍另一提出的机制是佐剂使得佐剂表面上的蛋白质抗原不稳定，造成它们更容易遭受蛋白水解降解(Jones等,2005,Effectsofadsorptiontoaluminumsaltadjuvantsonthestructureandstabilityofmodelproteinantigens.JBiolChem280(14):13406-13414；以及That等,2004."Antigenstabilitycontrolsantigenpresentation"J.Biol.Chem.279(48):50257-50266)。尽管未充分理解作用机制，但可能表面积、表面电荷和佐剂的形态是决定对吸附在这些佐剂上的抗原免疫应答的重要因素(Hem和White1984)。通常的理论是疫苗佐剂的颗粒大小越小，疫苗制剂免疫原性越大，尤其当颗粒大小是大约1微米时——最适于摄取专职抗原呈递细胞的尺寸(Maa等,2003.Stabilizationofalum-adjuvantedvaccinedrypowderformulations:mechanismandapplication.JPharmSci92(2):319-332,Diminsky等,1999.Physical,chemicalandimmunologicalstabilityofCHO-derivedhepatitisBsurfaceantigen(HBsAg)particles.Vaccine18(1-2)本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备结合免疫学活性佐剂的干燥疫苗组合物的方法，所述方法包括：(a)提供至少一种铝盐佐剂、包含至少一种挥发性盐的至少一种缓冲系统、至少一种玻璃形成剂和至少一种抗原；(b)将(a)组合在一起，形成液体疫苗制剂；(c)冷冻(b)中的所述液体疫苗制剂，形成冷冻的疫苗制剂；和(d)冻干(c)中所述冷冻的疫苗制剂，形成干燥疫苗组合物，进一步其中所述干燥疫苗组合物能够在对象中诱发免疫应答。

【技术特征摘要】
2011.05.17 US 61/487,2061.制备结合免疫学活性佐剂的干燥疫苗组合物的方法，所述方法包括：(a)提供至少一种铝盐佐剂、包含至少一种挥发性盐的至少一种缓冲系统、至少一种玻璃形成剂和至少一种抗原；(b)将(a)组合在一起，形成液体疫苗制剂；(c)冷冻(b)中的所述液体疫苗制剂，形成冷冻的疫苗制剂；和(d)冻干(c)中所述冷冻的疫苗制剂，形成干燥疫苗组合物，进一步其中所述干燥疫苗组合物能够在对象中诱发免疫应答。2.权利要求1所述的方法，其中所述对象产生的所述免疫应答可以是体液免疫和/或对抗原特异的细胞介导的免疫。3.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种铝盐佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝。4.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种缓冲系统选自醋酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、谷醇溶蛋白、精氨酸、甘氨酸、组氨酸、硼酸盐、碳酸盐和磷酸盐。5.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种缓冲系统选自醋酸铵、甲酸铵、碳酸铵、碳酸氢铵、三乙基醋酸铵、三乙基甲酸铵、三乙基碳酸铵、醋酸三甲胺、甲酸三甲胺、碳酸三甲胺、醋酸吡啶和甲酸吡啶。6.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种玻璃形成剂选自海藻糖、蔗糖、菲可、葡聚糖、蔗糖、麦芽三糖、乳糖、甘露醇、羟乙基淀粉、甘氨酸、环糊精和聚维酮。7.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种玻璃形成剂是海藻糖并且在冷冻干燥之前在所述液体疫苗制剂中所述海藻糖以约5％至约15％的重量比体积浓度存在。8.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种玻璃形成剂是海藻糖并且在所述液体疫苗制剂中所述海藻糖以约8％至约20％的重量比体积浓度存在。9.权利要求1所述的方法，其中至少一种免疫学活性辅佐剂在步骤(a)中添加。10.权利要求9所述的方法，其中所述至少一种免疫学活性辅佐剂选自脂质A、脂质A衍生物、单磷酰脂A、单磷酰脂A的化学类似物、包含CpG的寡核苷酸、TLR-4激动剂、鞭毛蛋白、衍生自革兰氏阴性细菌的鞭毛蛋白、TLR-5激动剂、能够结合TLR-5受体的鞭毛蛋白的片段、皂苷、皂苷的类似物、QS-21、纯化的皂苷馏分、ISCOMS和皂苷与甾醇和脂质的组合。11.权利要求1所述的方法，其中所述冷冻步骤包括下述之一：托盘冷冻、货架冷冻、喷雾冷冻和壳体冷冻。12.权利要求1所述的方法，其中所述冷冻步骤包括使用预先冷却的托盘启动所述冷冻步骤。13.权利要求1所述的方法，其中所述抗原选自或衍生自：轮状病毒、口蹄疫病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、丙型流感病毒、H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7N7、H1N2、H9N2、H7N2、H7N3、H10N7、人II型副流感病毒、单纯疱疹病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、水痘病毒、1型猪疱疹病毒、巨细胞病毒、狂犬病病毒、炭疽芽孢杆菌、炭疽PA和衍生物、脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、温热病病毒、委内瑞拉马脑脊髓炎病毒、猫白血病病毒、呼肠孤病毒、呼吸道合胞病毒、拉沙热病毒、多瘤病毒、犬细小病毒、乳头瘤病毒、森林脑炎病毒、牛瘟病毒、人鼻病毒种、肠道病毒种、门戈病毒、副粘病毒、鸡传染性支气管炎病毒、1型人T细胞白血病-淋巴瘤病毒、1型人免疫缺陷病毒、2型人免疫缺陷病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、细小病毒B19、腺病毒、风疹病毒、黄热病病毒、登革热病毒、牛呼吸道合胞病毒、冠状病毒、百日咳博德特氏菌、支气管败血波氏杆菌、副百日咳博德特氏菌、流产布鲁氏菌病、羊种布鲁氏菌、猪布鲁氏菌、羊布鲁氏菌、布鲁氏菌种、大肠杆菌、沙门氏菌种、伤寒沙门氏菌、链球菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假单胞菌、肺结核、鸟分支杆菌、卡介菌、麻风分支杆菌、肺炎双球菌、葡萄球菌、肠杆菌种、汉氏罗卡利马氏体、溶血巴斯德氏菌、放血败血性巴斯德氏菌、沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、性病性淋巴肉芽肿、梅毒螺旋体、嗜血菌种、牛生殖道支原体、肺支原体、支原体种、伯氏疏螺旋体、嗜肺军团菌、肉毒梭菌、白喉棒状杆菌、耶尔森氏菌、立氏立克次体、斑疹伤寒立克次体、普氏立克次体、恰菲埃里希氏体、嗜吞噬细胞无形体、恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、血吸虫、锥体虫、利士曼原虫种、血丝虫、滴虫、肉孢子虫、牛肉绦虫、猪肉绦虫、利士曼原虫、弓形虫、旋毛虫、球虫、柔嫩艾美耳球虫、新型隐球菌、白色念珠菌、烟曲霉、球孢子菌、淋病奈瑟氏球菌、疟原虫环子孢子蛋白、疟疾裂殖子蛋白、锥体虫表面抗原蛋白、百日咳、α病毒、腺病毒、白喉类毒素、破伤风类毒素、脑膜炎球菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·哈西特，P·南迪，R·布雷，J·卡彭特，T·伦道夫，
申请(专利权)人：索利吉尼克斯公司，科罗拉多大学评议会公司，
类型：发明
国别省市：美国,US