来自端粒酶的抗原性肽制造技术

本发明专利技术涉及引发介导免疫的Ｔ细胞的蛋白质或肽，还涉及癌症疫苗和用于抗癌治疗的组合物，所述组合物包含这类蛋白质或肽片段。本发明专利技术还涉及包含蛋白质或肽的药物组合物，以及产生能够在哺乳动物中识别并破坏肿瘤细胞的Ｔ淋巴细胞的方法。更具体地，提供了一种用于癌症的治疗或预防的方法中的端粒酶蛋白质或肽。在一个优选实施方案中，该方法包括产生针对端粒酶的Ｔ细胞反应。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及引发T细胞介导的免疫之蛋白质类或肽类，以及癌症疫苗和包含这样的蛋白质或肽片段之用于抗癌治疗的组合物。本专利技术还涉及含有蛋白质或肽的药用组合物，以及用于在哺乳动物中产生能识别并破坏肿瘤细胞的T淋巴细胞的方法。癌症的形成经历了包括数种突变性事件的多步过程。这些突变导致属于癌基因和肿瘤抑制基因这两类基因的表达/功能改变。癌基因天然地通过点突变或易位从原癌基因产生，由此导致一种带有突变的细胞之转化态。所有的癌基因编码一种蛋白质并通过它行使功能。原癌基因是细胞的正常基因，其具有成为癌基因的可能。在大多数情况下，已证实原癌基因为信号转导途径中的成分。癌基因以显性方式起作用。另一方面，肿瘤抑制基因以隐性方式，即通过功能的丧失起作用，当两个编码功能蛋白质的等位基因均被改变以产生非功能性基因产物时，促成肿瘤发生。改变的癌基因及肿瘤抑制基因的组合之协同作用导致细胞转化及恶性表型的形成。然而，这类细胞易于老化且具有有限的寿命。在多数癌症中，肿瘤细胞的永生化需要一种称为端粒酶的酶复合体的启动。在体细胞中，该酶的催化亚基通常不表达。其它事件，如由肿瘤病毒编码的蛋白质的作用或沉默启动子位点的去甲基化可导致在肿瘤细胞中有功能的端粒酶复合体的表达。在人类癌症免疫学领域，过去二十年中已有大量工作去表征真正的癌症特异性抗原。尤其是，致力于分析人类肿瘤抗原的抗体。现有技术提示，这类抗体可用于诊断及治疗目的，例如在抗肿瘤药剂的方面。但是，抗体仅仅能与暴露在肿瘤细胞表面的肿瘤抗原结合。因此，基于机体免疫系统的癌症治疗方面的努力始终未能如预期的那样成功。免疫系统的基本特征是其可区分自我和非我，正常情况下不会对抗自身分子。已证实从其它个体移植的组织或器官排斥是一种针对移植的细胞表面异源抗原的免疫反应。免疫反应一般由抗体介导的体液(humeral)反应和细胞反应构成。抗体由B淋巴细胞产生并分泌，一般识别呈天然构象的游离抗原。由此，它们可能识别几乎任何暴露在抗原表面的位点。与抗体相反，介导免疫反应中细胞性反应的T细胞仅识别MHC类分子中的抗原，且仅在适当的抗原加工后。该抗原加工一般由蛋白质的蛋白质裂解片段化组成，其得到与MHC分子沟槽相适合的肽类。由此使T细胞也识别来自胞内抗原的肽类。T细胞可识别肿瘤细胞表面MHC分子中来自肿瘤细胞中任何位置的异常肽类。T细胞随即可被活化以消除带有异常肽的肿瘤细胞。在带有鼠肿瘤的实验性模型中已显示，胞内“自身”蛋白质中的点突变可引发肿瘤排斥抗原，所述抗原由与正常肽相差单一氨基酸的肽类组成。识别肿瘤细胞表面的主要组织相容性(MHC)分子中的这些肽类的T细胞能够杀死肿瘤细胞，由此从宿主中排除肿瘤(Boon等人，1989，细胞(Cell)58,293-303)。人类中MHC分子一般被称为HLA(人白细胞相关抗原)分子。HLA分子有两种主要类型Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型HLA分子由HLAA、B和C亚基因座(subloci)编码，主要活化CD8+细胞毒性T细胞。另一方面，Ⅱ型HLA分子主要活化CD4+T细胞，由DR、DP和DQ亚基因座编码。每一个体正常时具有6种不同的Ⅰ型HLA分子，通常为来自A、B和C三个亚组中各一个的两个等位基因，尽管有时由于相同HLA等位基因出现两次减少了不同Ⅰ型HLA分子的数目。HLA基因产物为高度多形性的。不同个体表达与见于其他个体中的那些相异的独特HLA分子。由此解释了在移植中寻找HLA匹配的器官供体十分困难。免疫生物学中HLA分子的遗传多样性的显著程度由其作为免疫应答基因的作用可见一斑。通过其肽结合能力，特定HLA分子的存在或不存在决定了一个个体应答特定肽表位的能力。因此，HLA分子决定了对疾病的抗性或易感性。T细胞可通过多种机制抑制癌症的发生和生长。Ⅰ型HLA限制性CD8+及Ⅱ型HLA限制性CD4+这两类细胞毒性T细胞均可直接杀死呈现适当肿瘤抗原的肿瘤细胞。通常，细胞毒性CD8+T细胞反应需要CD4+辅助T细胞，但是如果肽抗原被适当APC呈递，细胞毒性CD8+T细胞可被直接活化，导致更迅速、强烈和更为有效的反应。虽然Ⅱ型HLA分子呈递的肽类的长度各种各样(12-25个氨基酸)，由Ⅰ型HLA分子呈递的肽类正常情况下必须为恰好9个氨基酸残基，以符合Ⅰ型HLA结合沟槽。如果较长的肽不能被APC或靶细胞(如癌细胞)在呈递至Ⅰ型HLA沟槽之前内部加工，则不结合。仅报道了有限数量的与这种9氨基酸要求的背离情形，在这些例子中呈递的肽之长度为8或10个氨基酸残基。关于MHC如何结合肽的综述见于Hans-Georg Rammensee,Thomas Friede和Stefan Stevanovic,(1995，免疫发生(Immunogenetics),41,178-228)以及Barinaga(1992，科学(Science)257,880-881)。Male等(1987，高等免疫学(AdvancedImmunology),J.B.Lippincott Company,Philadelphia)提供了对本专利技术技术背景的更为全面的解释。在我们的国际申请PCT/NO92/00032(公开为WO92/14756)中，我们描述了合成肽及癌基因蛋白质产物的片段，与其原癌基因或肿瘤抑制基因蛋白质相比，它们具有点突变或易位。这些肽相应于被癌症细胞或其他抗原呈递细胞呈递的经加工的癌基因蛋白质片段或肿瘤抑制基因片段，或者完全涵盖这样的片段，或者正是这样的片段，且在每一个体中被至少一种等位基因呈递为一种HLA-肽复合体。这些肽还显示出可诱导特定T细胞应答由细胞产生的实际的癌基因蛋白质片段，产生是通过加工并呈递于HLA分子中。特别是，我们描述的肽来源于p21-ras蛋白质，其在特定氨基酸位置即位置12、13和61具有点突变。已证实这些肽在体外有效调节癌症细胞的生长。此外，通过在免疫接种或癌症治疗方案中施用这样的肽，证实这些肽引发针对带有突变的p21-ras癌基因蛋白质的癌症细胞的CD4+T细胞免疫。后来，通过如上所述的施用，我们也证实这些肽也能引发针对带有突变的p21-ras癌基因蛋白质的癌症细胞的CD8+T细胞免疫(见M.K.Gjertsen等，国际癌症杂志(Int.J cancer),1997,72卷，784页)。然而，上述这些肽仅在某些种类的癌症中有用，即那些涉及在原癌基因或肿瘤抑制基因中带有点突变或易位的癌基因的癌症。因此，强烈需要针对更广泛的癌症的有效的抗癌治疗或疫苗。通常，就见于肿瘤细胞的遗传改变而言肿瘤是非常异源的。这暗示癌症疫苗的潜在的治疗作用和预防强度均可随着疫苗所能够引发T细胞免疫针对的靶标的增加而增加。多重靶疫苗也会降低由于治疗从原发肿瘤逃脱的变体形成新肿瘤的风险。近来端粒酶因其在防止细胞衰老中的可能作用成为关注的焦点。端粒酶是一种RNA依赖性DNA聚合酶，其利用呈端粒酶全酶的一个亚基的一种RNA模板合成端粒DNA重复片段。由酶合成的DNA重复被掺入端粒，端粒是见于构成每个染色体的线性DNA分子末端的特殊的DNA-蛋白质结构。在四膜虫属(Tetrahymena)的纤毛虫中首次鉴定了端粒酶(Greider和Blackburn,1985，细胞，43,405-413)。最近由Meyerson等(1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗或预防癌症的方法中的端粒酶蛋白质或肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：G高德奈克，JA艾里克森，M莫勒，MK戈捷尔特森，I赛特代尔，S塞博拉尔森，
申请(专利权)人：格姆瓦克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：NO[挪威]