β-淀粉样前体蛋白和泛素-B的移码突变体和它们的用途制造技术

用于治疗和／或预防早老性痴呆和／或唐氏综合症的组合物中的、引发Ｔ细胞免疫性的、与早老性痴呆和唐氏综合症相关的移码突变体β－淀粉样前体肽和突变体泛素－Ｂ。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及治疗和/或预防早老性痴呆和唐氏综合症的肽。早老性痴呆和唐氏综合症的治疗都与β淀粉样前体蛋白(βAPP)和泛素-B(Ubi-B)的编码过程中转录水平上或RNA的转录后编辑中发生的移码突变相关。这样的移码突变产生了特征为在羧基末端处的异常蛋白质序列的突变βAPP和Ubi-B蛋白质产物。包含突变βAPP或Ubi-B蛋白质产物的异常部分的全部或部分的肽引发了T细胞免疫性，所以可以用于治疗早老性痴呆和唐氏综合症的组合物中。另外，本专利技术的肽可以用作预防性的抗早老性痴呆疫苗。本专利技术还涉及编码对应于早老性痴呆和唐氏综合症患者中发现的异常βAPP和Ubi-B蛋白质序列的肽的DNA序列，并涉及含有至少一个插入位点的载体，所述插入位点含有编码至少一个这样的肽的DNA序列。另外，本专利技术涉及治疗和/或预防早老性痴呆的方法，该方法是通过施用至少一个突变βAPP和/或Ubi-B肽或者含有至少一个插入位点的重组病毒载体，所述插入位点含有编码至少一个突变βAPP和/或一个突变Ubi-B肽的DNA序列。本专利技术体现了治疗和/或预防早老性痴呆的方法的发展，它基于利用肽来激活身体自己的免疫系统的T细胞臂(T cellular arm)抵抗产生与早老性痴呆相关的突变βAPP和Ubi-B蛋白产物的细胞。早老性痴呆的治疗方法的开发和应用也可以直接用于患有唐氏综合症的患者的治疗。
技术介绍
对应于从癌细胞的基因中的移码突变产生的异常蛋白质序列的肽引发了特异性T细胞免疫性，并且可以用作抗癌疫苗(参见NorskHydro ASA在与本专利技术相同的日期递交的挪威专利申请)。以同样的方式，可以将对应于从与其它疾病相关的移码突变产生的异常蛋白质序列的肽用于基于产生特定性T细胞免疫性而开发这些疾病的治疗方法。移码突变在蛋白质的C末端部分产生了全新的氨基酸序列，在成熟之前终止在新的终止密码子出现的地方。这产生了两个重要的后果1)从移码产生的截短的蛋白质通常是没有功能的，在大多数情况下，导致重要的细胞功能的“剔除”。异常的蛋白质也可以获得新的功能如聚集和形成斑块的能力。在这两种情况中，移码导致了疾病。2)对于身体而言，从移码产生的异常的新的C末端氨基酸序列是外来的。它在突变之前是不存在的，它只存在于具有突变的细胞中。因为蛋白质的突变部分完全是新的，所以对载体的免疫系统是外来的，它们可以被载体的所有组成成分中的T细胞识别。迄今，还没有人着重研究移码突变的这一方面，并且还没有报道把蛋白质的编码区产生的移码肽鉴定为抗原。所以，这一构思是新的，并且形成了开发基于这些序列的疫苗的基础。由此可见，这些疫苗也可以在遗传了缺陷性基因，或以其它方式倾向于移码突变的人中预防性地使用。所以，这样的疫苗将填充抵抗遗传形式的疾病的治疗装备中的空缺。已经显示，在细胞内的“自身”蛋白质中的单个氨基酸的取代可以产生肿瘤排斥抗原，其中包括与正常肽在氨基酸序列上有区别的肽。识别在肿瘤细胞表面上的主要组织相容性(MHC)分子中的这些肽的T细胞能够杀死肿瘤细胞，所以从宿主排斥肿瘤。与B细胞产生的抗体相反，T细胞只有抗原被结合并且由MHC分子呈递时才识别抗原，而B细胞通常识别呈天然构象的游离抗原并且进一步可能识别抗原表面上暴露的差不多所有位点。通常这一结合只发生在适当的抗原加工后，该过程包括蛋白质的蛋白酶裂解，所以产生的肽片段与MHC分子的沟相适合。因此，T细胞还能够识别起源于细胞内的蛋白质的肽。所以，T细胞能识别细胞表面的MHC分子中起源于细胞任何地方的异常肽，并且随后能够被激活而消除含有异常蛋白质的细胞。M.Barinaga，科学(Science),257,880-881,1992提供了一篇MHC如何结合肽的短综述。在D.Male等人1987年的《高等免疫学》(Advanced Immunology)J.B.lippincott Company,Philadelaphia中可以发现对这一专利技术的技术背景的更综合性的解释。这两篇文献都全文在此并入本文。人的MHC分子通常被称为HLA(人白细胞抗原)分子。它们是由人6号染色体上的HLA区编码的。根据编码它们的染色体的区和与它们相互作用从而最初地激活的T细胞亚群，HLA分子表现为两个不同的类别。Ⅰ类分子是由HLA A,B和C亚基因座(subloci)编码的，它们最初激活CD8+细胞毒性T细胞。HLAⅡ类分子是由DR,DP和DQ亚基因座编码的，最初激活CD4+T细胞，既有辅助细胞又有细胞毒性细胞。通常，每个个体具有6个HLAⅠ类分子，通常两个来自A,B和C三个组的各组。相应地，所有个体也选择自己的HLAⅡ类分子，同样其中两个来自DP,DQ和DR三个组的各组。组A,B,C和DP,DQ和DR的每一个再分为几个亚组。在一些情况下，由于两个HLA亚组的交叠，不同的HLAⅠ类或Ⅱ类分子的数目减少了。所有的基因产物是高度多态性的。所以，不同的个体表达区别于其它个体的不同HLA分子。这是寻找移植时HLA匹配器官供体中的困难的根源。HLA分子作为免疫应答基因的作用反映了它们的遗传变异在免疫生物学中的意义。通过它们的肽结合能力，某些HLA分子的有无控制了个体应答肽表位的能力。结果，HLA分子决定了对疾病的抗性或敏感性。T细胞可以通过各种机制控制产生异常蛋白质的细胞的发育和生长。细胞毒性T细胞，既有限制在HLAⅠ类的CD8+又有限制在HLAⅡ类的CD4+，可以直接杀死携带适当抗原的细胞。CD4+辅助T细胞是细胞毒性CD8+T细胞应答以及抗体应答，和诱导巨噬细胞和LAK细胞杀伤所需要的。HLAⅠ类和Ⅱ类结合两者都需要肽必须含有通常在不同的HLA组和亚组中不同的结合基序。结合基序的特征在于，需要某些类型的氨基酸，例如在肽的确定位置携带大的和疏水性或带正电的侧基从而获得与HLA结合沟的口袋的严格配合的那些氨基酸。这以及在结合沟中的肽长度限制在8-10个氨基酸的结果是，结合一个类型的HLAⅠ类分子的肽同样结合另一类型是不太可能的。所以，例如，HLA-A1和HLA-A2亚组(二者都属于Ⅰ类)的肽结合基序与HLA-Al和HLA-B1分子的基序同样不同是非常可能的。因为同样的原因，完全相同的氨基酸序列定位于不同的Ⅱ类分子的结合沟中是不可能的。在HLAⅡ类分子的情况中，肽的结合序列可能更长，并且已经发现它们通常含有10到16个氨基酸，其中在一个或两个末端的一些氨基酸不是HLA沟的结合基序的一部分。但是，可能发生几个HLAⅠ类和Ⅱ类分子的不同肽结合基序的交叠。据说在至少两个不同的HLA分子的结合序列中存在交叠的肽含有“嵌套的T细胞表位”。在“嵌套表位肽”中含有的各种表位可以通过抗原呈递细胞对肽的加工而形成，然后被呈递给结合到不同HLA分子上的T细胞。在人的HLA分子的个别种类使含有嵌套表位的肽比只能够结合一个类型的HLA分子的肽更加可用作通用的疫苗。只有在患者中至少一个类型的HLAⅠ类和/或Ⅱ类分子可以结合全长的或被患者自身的抗原呈递细胞加工和修整后的疫苗肽时，才能获得个体的有效接种。肽作为大多数群体的通用疫苗的效用随着它以其全长或在被抗原呈递细胞加工后可以结合的不同的HLA分子的数目而增强。为了将起源于细胞中的突变事件产生的异常蛋白质的肽用作产生CD4+和/或CD8+T细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肽，其特征在于，它：ａ）至少长为８个氨基酸，并且是从与早老性痴呆和／或唐氏综合症相关的移码突变产生的突变βＡＰＰ和／或Ｕｂｉ－Ｂ蛋白质的片段；和ｂ）含有突变βＡＰＰ和／或Ｕｂｉ－Ｂ蛋白质的突变部分的至少一个氨基酸；和ｃ）含有 对应于在突变序列的氨基末端前面的蛋白质序列的正常部分的羧基末端的０－１０个氨基酸并且可以进一步延伸到如相关移码突变产生的新的终止密码子所确定的蛋白质的突变部分的羧基末端；和ｄ）以它的全长或在被抗原呈递细胞加工后，诱导Ｔ细胞应答。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：G高德纳克，JA艾里克森，M莫勒，
申请(专利权)人：格姆瓦克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：NO[挪威]