一种多环芳烃厌氧降解酶蛋白的提取与纯化方法技术

本发明专利技术属于生物工程技术与难降解有机污染物生物处理技术领域的一种多环芳烃厌氧降 解酶蛋白的提取与纯化方法。将多环芳烃厌氧降解菌配制成菌悬液后进行厌氧扩增培养，然 后超声波破碎分离出菌体和上清液。向分离出的菌体中加入去离子水后进行超声波破碎，分 离出菌体和上清液，重复2次。合并3次所收集的上清液，得到多环芳烃厌氧降解酶蛋白粗 提液。在厌氧箱中向酶蛋白粗提液中加入碾细的(NH4)2SO4固体至45％～85％饱和度，密封后 振荡1～2h，然后离心分离出沉淀。将沉淀溶于少量缓冲液并装入透析袋中透析24h。将透析 后的样品离心得到上清液。将上清液上到阴离子交换柱上过滤，采用内含0.0～0.30mol/L线 形洗脱梯度氯化钠的缓冲液洗脱结合的酶蛋白，收集280nm处吸光度大于0.01的洗脱液。测 定酶蛋白的活性，选择活性部分备用。本发明专利技术具有工艺简单、操作简便、对设备要求低、成 本低、得率高等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程技术与难降解有机污染物生物处理
，具体涉及一种多环芳 烃厌氧降解酶蛋白的提取与纯化方法。
技术介绍
多环芳烃是一类典型的持久性有机污染物，具有致癌、致畸、致突变作用，对生态环境 安全和人类健康造成极大威胁。近年来环境中多环芳烃污染有不断加重的趋势，因而多环芳 烃污染的控制与修复技术已成为国内外学者研究的重要内容。目前对环境中多环芳烃的治理 技术主要有物理法、化学法和生物法。物理处理技术主要存在处理费用高与去除不彻底的缺 点。在化学法中国内外有学者利用有机溶剂(如乙醇、正己垸、二氯甲垸、三氯甲垸、丙酮) 及表面活性剂等洗脱环境中的多环芳径，但会存在二次污染等问题。生物法具有操作简单、 运行费用低、无二次污染等优点，但在实际应用过程中，修复周期较长。从降解微生物细胞 中提取酶来强化降解已成为去除多环芳烃成的一种重要方法。但是，由于对多环芳烃厌氧降 解微生物缺乏深入的研究，目前尚未见到有关多环芳烃厌氧降解酶蛋白提取与纯化的研究报 道。因此，迫切需要提供一种简便高效的多环芳烃厌氧降解酶蛋白的提取与纯化方法，为大 量制备多环芳烃厌氧降解酶蛋白提供新的途径，从而广本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多环芳烃厌氧降解酶蛋白的提取与纯化方法，其特征在于，该方法的具体步骤如下：　①将４℃冰箱中保存的多环芳烃厌氧降解菌配制成浓度为１×１０↑［８］个／ｍｌ的菌悬液，向已加入１９８ｍｌ诱导培养基、２．０ｍｌ微量金属液和０．２ｍｌ维生素ｃ 溶液的厌氧瓶内接种２ｍｌ菌悬液，为去除培养基中的氧，诱导培养基、微量金属液和维生素溶液在加入之前用高纯氮气曝气３．５ｈ。然后用氟化橡胶塞密封瓶口，并用螺旋瓶盖拧紧。将厌氧瓶在培养温度为２５～３０℃、转速为１００ｒ／ｍｉｎ的振荡器中培养２５ｄ后即可得到扩增培养后的多环芳烃厌氧降解菌混合液。　②将步骤①中的多环芳烃厌氧降解菌混合液进行超声波破碎１５ｍｉｎ。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：豆俊峰，丁爱中，
申请(专利权)人：北京师范大学，
类型：发明
国别省市：11