细胞壁降解酶变体制造技术

本发明专利技术公开了具有β－螺旋结构的细胞壁降解酶的变体，该变体在如下方式确定的位置中具有至少一个替代，所述方式是：鉴定可能属于堆积的所有残基；将该堆积表征为内部的或外部的；基于亲代或野生型酶堆积残基的主要特征和／或其相对于β－螺旋的取向（内部的或外部的），将该堆积表征为极性的、疏水性的或芳香族／杂芳香族的；将堆积中的所有堆积位置优化为疏水性脂肪族氨基酸、疏水性芳香族氨基酸或极性氨基酸，实施方式是将一个或所有位置突变为属于以上其中一组的氨基酸；通过ＤＳＣ或应用相关试验如浸轧汽蒸染色应用试验，测量变体的热稳定性；然后选择稳定化的变体。优选当与包含ＳＥＱＩＤＮＯ：２氨基酸序列的果胶酸裂解酶比对时具有保守氨基酸残基Ｄ１１１、Ｄ１４１或Ｅ１４１、Ｄ１４５、Ｋ１６５、Ｒ１９４和Ｒ１９９的野生型亲代果胶酸裂解酶（ＥＣ４．２．２．２）的变体。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
当与包含ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２氨基酸序列的果胶酸裂解酶比对时具有保守氨基酸残基Ｄ１１１、Ｄ１４１或Ｅ１４１、Ｄ１４５、Ｋ１６５、Ｒ１９４和Ｒ１９９的野生型亲代果胶酸裂解酶（ＥＣ ４．２．２．２）的变体，其中该变体在至少一个选自下组位置的位置上发生替代：５、８、９、１０、１９、３８、３９、４０、４１、５５、５６、５９、６１、６４、７１、７２、８２、８３、９０、１００、１０２、１０９、１１２、１１４、１１７、１２９、１３３、１３６、１３７、１３９、１４２、１４４、１６０、１６３、１６４、６６、１６７、１６８、１６９、１７１、１７３、１７９、１８９、１９２、１９７、１９８、２００、２０３、２０...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M许莱因，SOS格拉德，C安德森，TP弗兰德森，
申请(专利权)人：诺和酶股份有限公司，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]