人胚肾293细胞亚克隆细胞株制造技术

一种用于生产重组腺病毒制品的人胚肾２９３细胞亚克隆细胞株，该细胞株是由ＡＴＣＣ　　２９３细胞经亚克隆方法制得，它含有人三磷酸甘油醛脱氢（ｈｕｍａｎ　ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅｓ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＧＡＰＤ），该细胞株由下列方法培养制得：ａ、将ＡＴＣＣ　　２９３细胞（Ｐ３２）复苏后进行细胞扩增传代至第３３代次（Ｐ３３），然后将Ｐ３３细胞悬液用ＦＡＣＳ流式细胞仪进行亚克隆；ｂ、用２个９６孔板，每孔中０．２ｍｌ培养基中放置一个细胞，在３６～３８℃、３～６％ＣＯ↓［２］条件下培养６～１０天；ｃ、挑选出细胞形态均一、生长良好的、已达到不低于６０％铺满生长的克隆；ｄ、重复上述步骤四次，最后挑选出１个亚克隆的细胞柱（Ｐ３７），继续培养扩增并制成原代细胞库（Ｐ３８），置于－８０℃冻存；ｅ、以原代细胞库（Ｐ３８）为基础制备主代细胞库及工作细胞库。本发明专利技术应用基因工程技术和分子克隆技术，使其具有明显增强细胞的贴壁生长的功能和细胞生长倍增时间短的优点。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子和细胞生物学，细胞克隆和基因工程技术，更具体地说是涉及一种由来源于经5型腺病毒(Ad5)DNA转染的人胚肾293细胞亚克隆细胞株。
技术介绍
原代人胚胎肾上皮(The primary human embryonic kidney，HEK)293细胞系，是一种经5型腺病毒(Ad5)DNA片段转染，含有Ad55’端的11％的基因组包括E1a的原代人胚胎肾细胞，该细胞特别对人腺病毒敏感，并对腺病毒DNA是高度许可的，其含有和表达Ad5的转染基因(transforminggenes)。目前，美国细胞培养库(American Type Culture Collection，ATCC)已将该细胞系开发成商业化，并广泛用于体外(in vitro)检测和生产重组蛋白质和病毒。然而，ATCC 293细胞在细胞生长周期和细胞贴壁生长方面存在周期长，贴壁不牢固，易脱落被冲洗掉的弱点，并直接影响该细胞广泛应用，尤其是大规模生产重组病毒体和蛋白质。应用基因工程技术和分子克隆技术，改进293细胞系的培养方法，特别是建立一种新型的、适合于规模化生产用的人胚胎肾293细胞已变得愈来愈必要和可行本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于生产重组腺病毒制品的人胚肾２９３细胞亚克隆细胞株，其特征在于，该细胞株是由ＡＴＣＣ２９３细胞经亚克隆方法制得，它含有下列序列的人三磷酸甘油醛脱氢酶（ｈｕｍａｎ　ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅｓ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｄｅｈｙｄｒ ｏｇｅｎａｓｅ，ＧＡＰＤ）：１　ｃｔｃｔｃｔｇｃｔｃ　ｃｔｃｃｔｇｔｔｃｇ　ａｃａｇｔｃａｇｃｃ　ｇｃａｔｃｔｔｃｔｔ　ｔｔｇｃｇｔｃｇｃｃ　ａｇｃｃｇａｇｃｃａ６１　ｃａｔｃｇｃｔｃａｇ　ａｃａｃｃａｔｇｇｇ　ｇａａｇｇｔｇａ ａｇ　ｇｔｃｇｇａｇｔｃａ　ａｃｇｇａｔｔｔｇｇ　ｔｃｇｔａｔｔｇｇｇ１２１　ｃｇｃｃｔｇｇｔｃａ　ｃｃ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓志，彭朝晖，
申请(专利权)人：张晓志，彭朝晖，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]