人胚肾细胞293T-C10单克隆细胞株及其制备和应用制造技术

技术编号:8297417 阅读:614 留言:0更新日期:2013-02-06 22:06
本发明专利技术涉及生物技术领域,具体为一种用于包装病毒的人胚肾细胞293T-C10单克隆细胞株及筛选方法。通过去除293T细胞支原体,在对数生长期经单克隆筛选,得到均一性的单克隆细胞,比较不同转染与出毒效率,筛选得到单克隆细胞株。这种细胞株保藏号为CCTCC?C201281,具有很高的转染效率和病毒包装的稳定性,相比较筛选前的293T细胞出毒效率上升明显,不进行超速离心即可感染绝大多数肿瘤及其他待感染的细胞,满足大部分实验需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
,具体为一种用于包装病毒的293T细胞单克隆细胞株及筛选方法,并且该细胞株具有很高的转染效率和病毒包装的稳定性。
技术介绍
293细胞是转染腺病毒ElA基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,可表达SV40大T抗原,主要用于包装病毒或瞬时转染以过量表达各种目标蛋白。慢病毒的类型有人免疫缺陷型病毒HIV、猴免疫缺陷型病毒SIV、猫免疫缺陷型病毒FIV、马传染性贫血EIA等,培养时间较长。按照传统的病毒包装方法,含有病毒颗粒的293T细胞的上清液需要经过超速离心加以浓缩(方法为超速离心后,弃上清液,将病毒溶解于很小的体积内,已获得高浓度的病毒溶液。这样在实验时,只需加入很小的体积,即可获得很高的感染效率,并且可以避免病毒溶液所产生的细胞毒性),然后用于后续的细胞功能学实验研究。由于超速离心费时费力,且成本较高,因此如果病毒粗液的滴度可以达到5xl06 lxlO7,则无需超速离心即可用于后续的细胞功能学检测。前期实验已经发现,目前使用的293T细胞出毒效率并不高,病毒粗液滴度无法达到5xl06-lxl07。因此,筛选高出毒效率的293T细胞成为我们需本文档来自技高网...

【技术保护点】
人胚肾细胞293T?C10单克隆细胞株,其特征在于,保藏号为CCTCCC201281。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:王海峰姚远颋谈竹君劳昕元
申请(专利权)人:上海黄离生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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