【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学领域，具体涉及。
技术介绍
培养细胞的完全培养基由基础培养基(如MEM)和添加剂(如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子)组成。仅仅用基础培养基进行细胞培养时，绝大多数细胞都不会存活较长时间，为了促进它们的存活和生长，必须添加额外的因子，比如激素、转运蛋白和一些痕量元素。一般来说，都选择血清来提供这些因子。但是血清成分复杂，存在许多未知因素，有时会干扰实验结果，掩盖培养细胞潜在的生理功能。此外，生理状况下，由于 血一脑屏障的存在，神经组织并不直接暴露于血浆的大部分成分中。因此，培养液中的血清成分可能干扰神经细胞正常的功能活动。血清中还含有一定的细胞毒物质和抑制物质，对细胞有去极化作用，影响细胞的功能的正常表达。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了，解决了现有技术中血清培养方法存在干扰、影响观察的问题。本专利技术的，以胰岛素一转铁蛋白一亚硒酸钠无血清培养基进行胎鼠皮层神经元的培养，用神经元特异性烯醇化酶染色，来鉴定胎鼠皮层神经元。优选的，所述胰岛素一转铁蛋白一亚硒酸钠无血清培养基中含有O. 5g/L胰岛素、O. 5g/L转铁蛋白和O. ...
【技术保护点】
一种胎鼠皮层神经元的原代无血清培养方法，其特征在于，以胰岛素－转铁蛋白－亚硒酸钠无血清培养基进行胎鼠皮层神经元的培养，用神经元特异性烯醇化酶染色，来鉴定胎鼠皮层神经元。
【技术特征摘要】
1.一种胎鼠皮层神经元的原代无血清培养方法，其特征在于，以胰岛素一转铁蛋白一亚硒酸钠无血清培养基进行胎鼠皮层神经元的培养，用神经元特异性烯醇化酶染色，来鉴定胎鼠皮层神经元。2.根据权利要求I所述的胎鼠皮层神经元的原代无血清培养方法，其特征在于，所述胰岛素一转铁蛋白一亚硒酸钠无血清培养基中含有O. 5g/L胰岛素、O. 5g/L转铁蛋白和O. 5mg/L亚硒酸钠。3.根据权利要求I所述的胎鼠皮层神经元的原代无血清培养方法，其特征在于，具体步骤如下 步骤I)试剂的配制 基培液取 DMEM 高糖培养基 10g/L 15g/L、NaHCO3 2g/L 3g/L、HEPES 3g/L 5g/L,依次溶于三蒸水，定容至1000ml，抽滤除菌，置于一 25°C 一 15°C保存； 种植液按体积比计，DMEM高糖培养基90%，胎牛血清10% ； 饲养液按体积比计，DMEM高糖培养基99%，胰岛素一转铁蛋白一亚硒酸钠1% ； 步骤2)原代细胞的培养 培养板的处理24孔塑料培养板，每孔加入O. lmg/ml的多聚赖氨酸200μ ，静置.30分钟后除去，用灭菌三蒸水进行冲洗后吸净，于35°C 40°C下过夜烤干，备用，接种前用基培液再灌洗一遍； 然后，取E14-17d的Wistar大鼠，麻醉后于无菌条件下取出胎鼠，剥除胎膜放入装有基培液的无菌皿中，取胎鼠大脑皮层； 解剖镜下去除胎鼠大脑皮层的皮层外膜及血管组织，基培液中洗净血污，剪碎，置于体积比为O. 125%的胰蛋白酶溶液中，35°C 40°C下消化IOmin 20min，吸除消化液，用含血清的培养基终止消化，加完全培养基反复吹打制成单细胞悬...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶蓓，
申请(专利权)人：苏州卫生职业技术学院，
类型：发明
国别省市：
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