高粱成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立的方法技术

本发明专利技术涉及一种高粱成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立的方法，步骤如下：（１）成熟胚愈伤组织诱导培养；将种子剥壳依次用７５％酒精浸泡０．５－１ｍｉｎ，５－２０％次氯酸钠消毒２０－５０ｍｉｎ、０．１％升汞消毒１０－２０ｍｉｎ，再用无菌水冲洗４－５次，晾干后接种于诱导培养基中；光照８－１２ｈ，黑暗１２－１６ｈ，温度２２－３０℃；（２）愈伤组织继代培养；光照８－１２ｈ，黑暗１２－１６ｈ，温度２２－３０℃；（３）分化培养；将经过继代培养之后得到的块状、致密的愈伤组织在分化培养基中诱导胚状体的形成和幼苗分化；每日光强３０００－４０００Ｌｘ、光照１０－１６ｈ，相对湿度为５０－７０％；（４）生根培养；将从分化培养基分化出的再生植株长到５－８ｃｍ时移入生根培养基进行生根；（５）再生植株的移栽。该方法为利用转基因技术育种奠定良好的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物技术育种的方法，特别涉及一种高粱成熟胚愈伤组 织诱导及再生体系建立的方法。
技术介绍
对高粱组织进行培养及再生，其目的在于让外植体能够高频率地诱导出 愈伤组织，建立高效的体细胞再生体系，为高粱遗传转化和细胞工程研究创 造有利条件。然而，高粱是目前公认的最难建立植物无性组织或器官再生体系和导入外源基因的作物之一。虽然高粱遗传化研究工作15年前就开始，但 与其他具有重要经济价值的禾谷类作物如水稻、小麦、玉米等相比，由于高 频再生和高效转化体系较难建立，因此其遗传转化研究工作发展较慢，成功 的实例也较少。高粱与其他作物相比，通过组织培养获得再生植株相对更难 一些。最早进行高粱组织培养研究的是StrogonolB.P.， 1968年他利用高粱根 和分蘖节在培养基上附加lmg/L 2， 4-D、 lmg/L KT、 5mg/L泛酸转、lmg/L 抗坏血酸，诱导出愈伤组织，但是他并没有得到再生植株。此后，高粱组织 培养研究工作得到一定重视。各国学者相继开展了高粱组织培养研究工作， 所用的外植体主要有未成熟胚、成熟胚、幼穗、茎尖、种子、幼叶、花药、 幼苗等。在成熟胚组织培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高粱成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立的方法，其特征在于实施步骤如下：　　　　（１）进行成熟胚愈伤组织诱导培养　　　　将种子从颖壳中剥出，挑选无虫蚀、无裂痕、完整的、大小均匀一致的种子，在超净工作台上依次用７５％酒精浸泡０．５－１ｍｉｎ，５－２０％次氯酸钠消毒２０－５０ｍｉｎ、０．１％升汞消毒１０－２０ｍｉｎ，再用无菌水冲洗４－５次，然后用无菌滤纸吸干种子表面的水分，晾干后接种于诱导培养基中；愈伤组织诱导基本培养基为ＭＳ，添加外源激素为２，４－Ｄ和ＫＴ；２，４－Ｄ的浓度为１．５－４．０ｍｇ／Ｌ，ＫＴ的浓度为０．０－２．０ｍｇ／Ｌ，并在诱导培养基中加入０－３０ｍｇ／Ｌ的ＡｇＮＯ↓［３］；ｐＨ为...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙守钧，裴忠有，王丽艳，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]