一种重组美洲大蠊过敏原蛋白的表达方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种重组美洲大蠊过敏原蛋白的表达方法。本发明专利技术的目的是针对蟑螂过敏原浸提液进行免疫耐受治疗的不足，从常见的蟑螂种属美洲大蠊组织中提取总ＲＮＡ，扩增出美洲大蠊主要过敏原基因Ｐｅｒ　　ａ１．０１０１、Ｐｅｒ　　ａ１．０１０２、Ｐｅｒａ１．０１０４、Ｐｅｒａ７．０１的编码基因，通过基因工程手段，在大肠杆菌中低温诱导表达重组蟑螂过敏原蛋白，可用于蟑螂引起的过敏反应疾病的诊断和治疗，避免了天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种重组美洲大蠊过敏原蛋白Ｐｅｒａ１．０１０４的表达方法，其特征在于包括如下步骤：　　　　（１）从美洲大蠊组织中提取总ＲＮＡ；　　　　（２）合成引物：　　　　ｐＥＴ－Ｐｅｒ　　ａ　　１．０１０４－Ｐ１　　ＣＡＴＡＴＧＧＴＴＧＧＴＧＴＣＧＡＴＧＧＴＣＴＣＡＴＡＧＡＣ　　　　ｐＥＴ－Ｐｅｒ　ａ　　１．０１０４－Ｐ２　　ＡＡＧＣＴＴＴＣＡＧＧＧＣＡＧＧＣＣＧＡＡＣＣＡＧ　　　　（３）以总ＲＮＡ为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ获得美洲大蠊过敏原蛋白编码基因片段；　　　　（４）将编码基因克隆入原核表达载体中，转化宿主菌，培养所得重组工程菌，然后诱导其表达目的蛋白；　　　　（５）采用亲和层析方法对目的蛋白进行纯化，从而获得重组美洲大蠊过敏原蛋白Ｐｅｒ　　ａ１．０１０４。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张忠芳，何韶衡，
申请(专利权)人：汕头大学医学院，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]