一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒及检测方法，试剂盒包括DNA提取液、GBS阳性质控、GBS阴性质控、内标溶液，数字PCR反应缓冲液及检测GBS的特异性引物探针、内标的引物探针；检测方法包括以下步骤：①受检样品处理；②质控品的处理；③配制数字PCR反应混合液；④制作油包水PCR微反应液滴；然后对所述微反应液滴进行PCR扩增反应；⑤将PCR反应板放入荧光读取仪器中读数分析。本发明专利技术检测过程无需依靠标准曲线来测定核酸量，而是直接采用数字PCR检测系统通过微滴化处理，使得稀有检测片段从大量的复杂背景中分离出来，直接数出DNA分子的个数，大大简化操作步骤，使该方法结果判读直观可靠，具有可以稳定实施、精确度高、灵敏度高的特点。

A digital PCR detection kit for detection of GBS and its detection method

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于分子诊断生物学
，特别涉及一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
GBS(groupBstreptococcus,GBS)正常寄居于阴道和直肠，它是一种条件致病菌，一般正常健康人群感染GBS并不致病。如果新生儿带了这种菌，大约有1%～3%会出现早期侵入性感染，其中有5%会导致死亡。早在20世纪70年代GBS就已经被证实为围产期母婴感染的重要致病菌之一。GBS，可在分娩时垂直传播给新生儿，可引起新生儿败血症、肺炎、脑膜炎，甚至死亡。在感染后存活的新生儿，还有可能有严重的神经系统后遗症，包括脑积水、智力障碍、小头畸形、耳聋等。目前国内GBS对35-37周的孕妇和新生儿的筛查，主要是通过细菌培养法、免疫学诊断法、实时荧光PCR法。细菌培养法，采用标准细菌培养方法来检测GBS的存在，取样后大约需要18-48小时得到检测结果，比较费时；免疫学诊断方法，血清学方法不能高通量处理样本。由于窗口期的存在，血清学的诊断存在滞后性，不能准确反映当前是否感染；荧光PCR法检测法比较方便，但其定量需要参考标品、标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含数字PCR反应缓冲液、检测GBS的特异性引物对和探针及内标的引物对和探针，所述数字PCR反应缓冲液包括Tris‑HCL、KAC、DTT、MgCl2、硫酸铵、dNTP、PEG35K、UDG酶、Taq酶、上游引物F、下游引物R、探针P；所述检测GBS的特异性引物对和探针的序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示；所述内标的引物对和探针的序列如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含数字PCR反应缓冲液、检测GBS的特异性引物对和探针及内标的引物对和探针，所述数字PCR反应缓冲液包括Tris-HCL、KAC、DTT、MgCl2、硫酸铵、dNTP、PEG35K、UDG酶、Taq酶、上游引物F、下游引物R、探针P；所述检测GBS的特异性引物对和探针的序列如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3所示；所述内标的引物对和探针的序列如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6所示。2.根据权利要求1所述的一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述数字PCR反应缓冲液中的上游引物F包括检测GBS的上游引物和内标的上游引物。3.根据权利要求1所述的一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述数字PCR反应缓冲液中的下游引物R包括检测GBS的下游引物和内标的下游引物。4.根据权利要求1所述的一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述数字PCR反应缓冲液中的探针P包括检测GBS的探针和内标的探针。5.根据权利要求1所述的一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述检测GBS的探针及内标探针5’端连接有荧光报告基团，所述检测GBS的探针及内标探针3’端连接有淬灭基团，所述荧光报告基团可选自FAM、CY5、HEX、VIC中任一种，所述淬灭基团均为BHQ。6.根据权利要求1所述的一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒还包括DNA提取液、GBS阳性质控、GBS阴性质控、内标溶液。7.根据权利要求1所述的一种用于检测GBS的数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述数字PCR反应缓冲液的组分包括：组分浓度（摩尔浓度/酶浓度/质量浓度）Tris-HCL100mmol/L~...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘淑园，陈华云，张天海，王盼盼，
申请(专利权)人：广州和实生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44