一种核酸检测试剂盒及其使用方法技术

本申请提供一种核酸检测试剂盒及其使用方法，涉及核酸检测技术领域。该核酸检测试剂盒包括核酸提取试纸条、核酸提取液、核酸洗脱液和核酸扩增反应液，其中核酸提取试纸条结构简单，使用过程中不需要复杂仪器，该核酸提取液配方的核酸释放效果好，核酸洗脱液配方的去杂效果好。利用该核酸提取试纸条能在30～50s内对生物样本中的核酸进行快速提取纯化，相较于市面上用的DNA提取方法，本申请的核酸提取试纸条能够节省大量的时间和资金，不需要复杂的仪器设备，可在有限资源的场所使用，如偏远的实验基地或者教学机构。能够广泛地应用于未来的生物样品的现场分子检测上，推动了分子检测走出实验室迈入市场的进程，适用于POCT。适用于POCT。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸检测试剂盒及其使用方法


[0001]本申请涉及核酸检测
，尤其涉及一种核酸检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]核酸检测在实验室科研、病原体检测、基因分型检测等方面具有重要的应用，而核酸检测的第一步都是从复杂的生物样本中提取核酸，这项操作传统上需要专门的设备、训练有素的技术人员和多个液体处理步骤。目前，核酸分离方法的复杂性限制了在实验室环境之外的许多核酸扩增技术的使用。
[0003]市售的顺磁珠具有各种不同的功能化表面化学物质，用于捕获和纯化核酸，从而消除了离心的需要，通过磁铁吸引并将顺磁珠固定在试管的一侧，以便在清洗和洗脱步骤中去除上清液。虽然基于顺磁粒子的核酸纯化相对较快(约10分钟)，而且不需要电气设备，但对于在现代实验室环境之外进行的应用，它仍然过于复杂。
[0004]使用不同类型的滤膜快速提取核酸是通过直接将核酸进行扩增，消除了不需要单独的核酸洗脱步骤，从而简化了核酸纯化过程，与许多其他固相萃取技术相比，这是一个优势，然而，尽管消除了洗脱步骤，所有这些方法都需要相对复杂的制造或实验设置、多个移液步骤或电气设备来帮助纯化核酸，依赖昂贵而复杂的设备、大量的样品和专业技术人员，不适用于即时检验(point
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of
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care testing，POCT)。

技术实现思路

[0005]本申请的目的在于提供一种核酸检测试剂盒及其使用方法，旨在解决现有的核酸提取方法依赖昂贵而复杂的设备、大量的样品和专业技术人员，不适用于即时检验的问题。
[0006]为实现以上目的，本申请提供一种核酸检测试剂盒，包括检测试剂和检测耗材，所述检测耗材为核酸提取试纸条，所述核酸提取试纸条由纤维素滤纸制成；所述检测试剂包括核酸提取液、核酸洗脱液和核酸扩增反应液；
[0007]所述核酸提取液的组分包括：0.08～0.1mol/L的Tris，1～1.5mol/L的NaCl，1.8～2.3mol/L的PVP
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40，0.01～0.015mol/L的EDTA，以及体积百分比0.05～0.1％的SDS；
[0008]所述核酸洗脱液的组分包括：0.008～0.012mol/L的Tris。
[0009]其中，纤维素滤纸可以快速结合核酸，在短的洗涤步骤中保留核酸以去除污染物，然后直接洗脱到扩增反应中，它非常适合于实验室外基于核酸扩增的应用，包括有限的资源场所，无需任何移液，使用了一种与其他系统不同的纯化机制，是利用核酸和其他化合物之间通过纤维素基质捕获和保留动力学的差异。大的核酸分子被纤维素迅速捕获并在洗涤步骤中保留，而其他较小的化合物，包括一些DNA扩增抑制剂，要么不与纤维素结合，要么迅速释放到洗涤溶液中。扩增体系中的dNTPs催化作用，以及液体通过纤维素基质的液体运动导致纤维素上的核酸的释放。通过纤维素滤纸提取核酸是一种简单的、不需要电气设备的方法，它可以在短时间内从广泛的植物、动物和微生物样本中纯化核酸，适用于现代实验室环境外的核酸应用。
[0010]优选地，所述核酸提取液和所述核酸洗脱液的pH值为8.0～8.3。
[0011]优选地，所述核酸扩增反应液为LAMP扩增反应液。
[0012]优选地，所述LAMP扩增反应液的组分包括：dNTPs、缓冲液、DNA聚合酶、引物。
[0013]优选地，所述缓冲液包括：Tris
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HCl、BSA。
[0014]优选地，所述核酸提取试纸条包括：手柄和核酸结合区，所述核酸结合区为纤维素滤纸，所述手柄包裹石蜡成为疏水端。
[0015]本申请还提供一种如上述的核酸检测试剂盒的使用方法，包括：
[0016]将核酸提取试纸条浸入到加有样本的核酸提取液中，以捕获核酸；
[0017]将捕获核酸后的核酸提取试纸条浸入核酸洗脱液中，以去除杂质；
[0018]将去除杂质后的核酸提取试纸条浸入核酸扩增反应液中，以进行核酸扩增得到检测结果。
[0019]优选地，所述“将核酸提取试纸条浸入到加有样本的核酸提取液中”包括：
[0020]将所述核酸提取试纸条的核酸结合区完全浸入所述加有样本的核酸提取液中，保持时间为5～10秒。
[0021]优选地，所述“将捕获核酸后的核酸提取试纸条浸入核酸洗脱液中”包括：
[0022]将捕获核酸后的核酸提取试纸条反复浸入核酸洗脱液中4
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8次，总时间为5～10秒。
[0023]优选地，所述“将去除杂质后的核酸提取试纸条浸入核酸扩增反应液中”包括：
[0024]将去除杂质后的核酸提取试纸条浸入核酸扩增反应液中18
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22次，总时间为20～25秒。
[0025]与现有技术相比，本申请的有益效果包括：
[0026]本申请提供的核酸检测试剂盒包括核酸提取试纸条、核酸提取液、核酸洗脱液和核酸扩增反应液，其中核酸提取试纸条结构简单，使用过程中不需要复杂仪器，该核酸提取液配方的核酸释放效果好，核酸洗脱液配方的去杂效果好。利用该核酸提取试纸条能在30～50s内对生物样本中的核酸进行快速提取纯化，相较于市面上用的DNA提取方法，本申请的核酸提取试纸条能够节省大量的时间和资金，不需要复杂的仪器设备，可在有限资源的场所使用，如偏远的实验基地或者教学机构。能够广泛地应用于未来的生物样品的现场分子检测上，推动了分子检测走出实验室迈入市场的进程，适用于POCT。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对本申请范围的限定。
[0028]图1为本申请的核酸检测试剂盒检测尿液HPV的PCR结果图；
[0029]图2为现有的病毒核酸提取试剂盒检测尿液HPV的PCR结果图；
[0030]图3为本申请的核酸检测试剂盒检测尿液HPV阳性样品的结果示意图；
[0031]图4为本申请的核酸检测试剂盒检测大豆的各个组织的结果示意图。
具体实施方式
[0032]如本文所用之术语：
[0033]“由
……
制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0034]连接词“由
……
组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由
……
组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸检测试剂盒，其特征在于，包括检测试剂和检测耗材，所述检测耗材为核酸提取试纸条，所述核酸提取试纸条由纤维素滤纸制成；所述检测试剂包括核酸提取液、核酸洗脱液和核酸扩增反应液；所述核酸提取液的组分包括：0.08～0.1mol/L的Tris，1～1.5mol/L的NaCl，1.8～2.3mol/L的PVP
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40，0.01～0.015mol/L的EDTA，以及体积百分比0.05～0.1％的SDS；所述核酸洗脱液的组分包括：0.008～0.012mol/L的Tris。2.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述核酸提取液和所述核酸洗脱液的pH值为8.0～8.3。3.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述核酸扩增反应液为LAMP扩增反应液。4.根据权利要求3所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP扩增反应液的组分包括：dNTPs、缓冲液、DNA聚合酶、引物。5.根据权利要求4所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括：Tris
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HCl、BSA。6.根据权利要求1所述的核酸检测试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试纸条包括：手柄...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈华云，文素珍，唐彬，黎秋华，黄汉伟，
申请(专利权)人：广州和实生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：