一种核酸快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种核酸快速检测方法，包括如下步骤：步骤一，取样品放入样品袋，加5

【技术实现步骤摘要】
一种核酸快速检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种核酸快速检测方法。

技术介绍

[0002]随着检测技术的发展，使得POCT(point
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of
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caretesting)式的检测成为近年来检测领域发展的主要方向之一。POCT检测是指在采样现场即刻进行分析，快速得到检验结果的一种检测形式。如POCT核酸检测仪，将核酸提取、扩增、荧光检测等功能全部整合在一台小型化的仪器上，可以在非实验室条件下进行快速、准确的核酸检测。
[0003]我国是世界上重要的水产品生产和出口大国之一，水产养殖业是农业经济的主要支柱产业。水产病原的快速诊断，对水产养殖的良种选育，疾病预防、进出口检疫、水产品食品安全等方面具有重大意义。目前常用的水产病害的检测技术主要包括：目检、镜检、病原的分离鉴定、聚合酶链式反应、核酸杂交、限制性酶切、基因芯片、酶联免疫检测技术、免疫荧光技术；这些检测方法均存在依赖精密仪器、检测成本高、灵敏性和特异性差，操作程序繁琐，难以推广等缺点；而且常规的病原检测技术大都不适合养殖基层的现场快速检测。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种核酸快速检测方法。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：
[0006]提供一种核酸快速检测方法，包括如下步骤：
[0007]步骤一，取样品放入样品袋，加5
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10倍体积的裂解液，封闭袋口，进行匀浆操作，得待测样品；
[0008]步骤二，将待测样品置于反应腔内，在恒温加热条件下，与反应腔内的恒温扩增试剂反应；
[0009]步骤三，使反应后的待测样品流至试剂条上，并且通过检测槽观察试剂条的情况，不同环境的检测可通过更换不同的抗原，实现目视检测和荧光检测。
[0010]进一步地，所述恒温扩增试剂包括酶、引物、探针和缓冲液组分，其中，2种引物或探针标记了特定抗原A和抗原B。
[0011]进一步地，所述恒温扩增试剂包括：正向外围引物1～50pmol；反向外围引物1～50pmol；正向交叉引物10～500pmol；反向交叉引物10～500pmol；正向探针1～100pmol；反向探针1～100pmol；DNA聚合酶5～50U；反转录酶0.5～8U；dNTP10～300nmol；BSA0.1～5μg；缓冲液组分，1～1000mMTris
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HCl，1～50mM(NH4)2SO4，1～100mMKCl，1～10mMMgSO4，0.01～1wt％20。
[0012]进一步地，所述抗原A和抗原B为地高辛、生物素、荧光标记FAM中任意2种。
[0013]进一步地，地高辛标记对应试纸条中使用地高辛抗体；生物素标记对应试纸条中使用SA；FAM标记对应试纸条中使用anti
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FAM抗体。
[0014]进一步地，所述步骤二中，加热时间为15～30分钟。
[0015]本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0016]本专利技术的核酸快速检测方法，能够加快检测速度、成本低廉，安全可靠、无需经过专业培训即可操作。
附图说明
[0017]图1为本专利技术使用的便携式核酸快速检测装置的爆炸图；
[0018]图2为本专利技术使用的便携式核酸快速检测装置的剖视图；
[0019]1、试剂装置；2、加热装置；3、供电装置；4、检测槽；5、反应槽；6、加热板；7、试剂头；8、反应腔；9、试剂条；10、试剂外壳；11、试剂底盖；12、控制外壳；13、控制底板；14、控制板；15、供电接口；16、底座外壳；17、底座盖；18、供电电池；19、充电口；20、输电接口；21、安装板；22、容置空间；23、卡口；24、卡扣；25、密封胶帽。
具体实施方式
[0020]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为本专利技术的限定。需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0021]本专利技术提供一种核酸快速检测方法，使用便携式核酸快速检测装置，包括如下步骤：
[0022]步骤一，取样品放入样品袋，加5
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10倍体积的裂解液，封闭袋口，进行匀浆操作，得待测样品；
[0023]步骤二，将待测样品置于反应腔内，在恒温加热(加热时间为15～30分钟)条件下，与反应腔内的恒温扩增试剂反应；
[0024]步骤三，使反应后的待测样品流至试剂条上，并且通过检测槽观察试剂条的情况，不同环境的检测可通过更换不同的抗原，实现目视检测和荧光检测。
[0025]上述恒温扩增试剂包括酶、引物、探针和缓冲液组分，其中，2种引物或探针标记了特定抗原A和抗原B，抗原A和抗原B为地高辛、生物素、荧光标记FAM中任意2种，地高辛标记对应试纸条中使用地高辛抗体；生物素标记对应试纸条中使用SA；FAM标记对应试纸条中使用anti
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FAM抗体。
[0026]具体地，恒温扩增试剂包括：正向外围引物1～50pmol；反向外围引物1～50pmol；正向交叉引物10～500pmol；反向交叉引物10～500pmol；正向探针1～100pmol；反向探针1～100pmol；DNA聚合酶5～50U；反转录酶0.5～8U；dNTP10～300nmol；BSA0.1～5μg；缓冲液组分，1～1000mMTris
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HCl，1～50mM(NH4)2SO4，1～100mMKCl，1～10mMMgSO4，0.01～1wt％20。
[0027]如图1
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2所示，本专利技术使用的上述便携式核酸快速检测装置包括：试剂装置1、加热装置2、供电装置3、试剂头7。
[0028]加热装置2安装于供电装置3的上端，且供电装置3与加热装置2电连接；试剂装置1安装于加热装置2的上端；其中，试剂装置1上设有检测槽4和反应槽5；加热装置2的加热板6正对反应槽5设置；试剂头7安装于反应槽5内，试剂头7内设有一反应腔8，反应腔8与检测槽4连通设置；检测槽4内设有一试剂条9；试剂头7上还设有一导液槽，反应腔8通过导液槽与废液池连通。
[0029]在实际使用过程中，例如对现场水产品特定病原核酸进行检测时，先通过一取样装置进行取样，然后将样品放入试剂头7中的反应腔8内，此时加热装置2中的加热板6通电可对反应腔8内的样品进行加热，使得样品的反应加快，如样品中存在特定靶序列，则试剂在特定温度下反应的过程中，经过扩增的序列形成带两种抗原的复合物，如不存在特定靶序列，带抗原的序列相互独立。样品反应之后通过导液槽流入至检测槽4中的试剂条9上，能够形成稳定的可检测条带，并且可通过检测槽4观察试剂条9的情况，若不形成复合物则试剂条9上无检测条带。不同环境的检测可通过更换不同的抗原，实现目视检测和荧光检测。具体的，加热装置2与外界控制系统相连接，使得可通过外界的控制系统控制加热装置2的加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸快速检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，取样品放入样品袋，加5
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10倍体积的裂解液，封闭袋口，进行匀浆操作，得待测样品；步骤二，将待测样品置于反应腔内，在恒温加热条件下，与反应腔内的恒温扩增试剂反应；步骤三，使反应后的待测样品流至试剂条上，并且通过检测槽观察试剂条的情况，不同环境的检测可通过更换不同的抗原，实现目视检测和荧光检测。2.根据权利要求1所述的核酸快速检测方法，其特征在于，所述恒温扩增试剂包括酶、引物、探针和缓冲液组分，其中，2种引物或探针标记了特定抗原A和抗原B。3.根据权利要求2所述的核酸快速检测方法，其特征在于，所述恒温扩增试剂包括：正向外围引物1～50pmol；反向外围引物1～50pmol；正向交叉引物10～500pmol；反向交叉引物10～500pmol；正向探针1～10...

【专利技术属性】
技术研发人员：石坚，吴文巍，罗成，
申请(专利权)人：吴文巍，
类型：发明
国别省市：