用于生产拉沙里菌素的工程菌及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种用于生产拉沙里菌素的工程菌及其制备方法与应用。本发明专利技术所提供的制备用于生产拉沙里菌素的工程菌的方法，包括如下步骤：抑制拉沙里菌素产生菌中LodE蛋白或其同源蛋白的表达和/或活性，从而获得所述用于生产拉沙里菌素的工程菌；所述LodE蛋白的氨基酸序列如序列表中序列5所示。本发明专利技术实现了阻断拉沙里菌素合成中负效基因表达的目的，使拉沙里菌素产量提升300％，摇瓶产量达到12mg/L。另外，首次构建了链霉菌FXJ1.172的遗传操作系统，成功实现通过基因工程的手段来获得拉沙里菌素高产突变株。

For the production of lasalocid engineering bacterium and preparation method and application thereof

The invention discloses a method for the production of lasalocid engineering bacterium and preparation method and application thereof. The invention provides a preparation method of engineering bacteria for producing bacterium for Lachari, which comprises the following steps: inhibition of cyclosporin LodE proteins produced by Lachari bacteria or its homologous protein expression and / or activity, thereby obtaining the Lachari for the production of bacteriocin engineering bacteria; amino acid sequence of the protein sequence as LodE the list shown in sequence 5. The present invention has realized the purpose of blocking the expression of negative effect gene in the synthesis of Lachari bacteria in the synthesis of Lachari, making the production of Lachari bacteriocin up by 300% and the production of shake flask up to 12mg/L. In addition, for the first time to construct the genetic operating system of Streptomyces FXJ1.172, successfully obtained lasalocid producing mutants by gene engineering method.

【技术实现步骤摘要】
用于生产拉沙里菌素的工程菌及其制备方法与应用
本专利技术属于生物
，涉及一种用于生产拉沙里菌素的工程菌及其制备方法与应用。
技术介绍
放线菌是一类高G+C含量(69-78％)的革兰氏阳性细菌，其具有复杂的形态发育分化过程和丰富的次级代谢产物合成能力，广泛分布于土壤、海洋、植物等各种生境中。链霉菌是放线菌中的一大类进化较为高等的种系，具有繁多的次级代谢通路，是天然产物的主要来源。链霉菌产生的次级代谢产物占微生物活性天然产物总数的三分之一以上且具有广谱活性，如抗细菌、抗真菌、抗寄生虫、抗肿瘤、免疫抑制剂等，被广泛应用于医学、农业和畜牧业等。据不完全统计，截止到2012年，临床上应用的抗生素有80％直接或间接来源于链霉菌。近年来大量研究表明，链霉菌中参与特定次级代谢产物合成的相关基因一般呈现出聚簇排列的规律，形成生物合成基因簇。这些基因通常包括调控基因、结构基因、后修饰基因以及抗性基因，对次级代谢产物的合成和产量发挥着至关重要的作用。拉沙里菌素(lasalocid)是最早被报道的聚醚类离子载体之一。美国科学家Berger等人于1951年从拉沙里链霉菌(Streptomyceslasa本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备用于生产拉沙里菌素的工程菌的方法，包括如下步骤：抑制拉沙里菌素产生菌中LodE蛋白或其同源蛋白的表达和/或活性，从而获得所述用于生产拉沙里菌素的工程菌；所述LodE蛋白的氨基酸序列如序列表中序列5所示。

【技术特征摘要】
2017.09.06 CN 20171079541221.制备用于生产拉沙里菌素的工程菌的方法，包括如下步骤：抑制拉沙里菌素产生菌中LodE蛋白或其同源蛋白的表达和/或活性，从而获得所述用于生产拉沙里菌素的工程菌；所述LodE蛋白的氨基酸序列如序列表中序列5所示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述“抑制拉沙里菌素产生菌中LodE蛋白或其同源蛋白的表达和/或活性”是通过将所述拉沙里菌素产生菌的基因组中所述LodE蛋白或其同源蛋白的编码基因替换为筛选标记基因实现的。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述LodE蛋白的编码基因的序列为序列表中序列2；和/或所述筛选标记基因为neo基因；所述neo基因的序列为序列表中序列1。4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述拉沙里菌素产生菌为链霉菌(Streptomycessp.)FXJ1.172。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述链霉菌(Streptomycessp.)FXJ1.172的基因组中，所述LodE蛋白的编码基因是通过同源重组的方式被所述neo基因替换掉的，上游同源臂的序列如序列表中序列3所示，下游同源臂的序列如序列表中序列4所示。6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄英，刘明皓，刘宁，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11