一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法技术

本发明专利技术提供一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法，包括步骤：(a)大鼠颈椎脱臼处死，消毒并断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑；(b)在无菌条件下，剥离解剖去除小脑、间脑以及去除软脑膜和脑膜大血管等，保留大脑皮质；(c)通过机械酶消化法，并结合连续密度梯度离心法获得纯度较高的脑微血管片段；(d)将纯化的脑微血管片段铺置特制的细胞培养皿，并使用两种不同的培养基分离培养脑微血管内皮细胞。本发明专利技术提供的大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法可获得产量高、纯度高且生存时间较长的大鼠脑微血管内皮细胞。

A method of isolation and culture of rat brain microvascular endothelial cells

The present invention provides isolated microvascular endothelial cells and culture methods, a rat brain comprises the steps of: (a) rats were killed by cervical dislocation, and were placed in glass Petri dish disinfection, open cranial cavity removed after whole brain; (b) under aseptic conditions, removal of the cerebellum, cerebral anatomy dissection and removal of PIA and meningeal vascular retention, cerebral cortex; (c) by mechanical enzymatic digestion, and the continuous density gradient centrifugation to obtain high purity brain microvascular fragments; (d) the purification of brain microvascular fragments laying special cell culture dishes, and the use of two kinds of isolated and cultured cerebromicrovascular vascular endothelial cells. The method of isolation and culture of rat brain microvascular endothelial cells can obtain rat brain microvascular endothelial cells with high yield, high purity and long survival time.

【技术实现步骤摘要】
一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法
本专利技术属于细胞生物学领域，具体涉及一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法。
技术介绍
脑微血管内皮细胞是研究血一脑屏障及脑多种疾病的一个重要模型，分离纯化脑微血管内皮细胞为研究脑内皮细胞的生理和病理特性提供了有效的技术支持。脑微血管内皮细胞具有很多自身特性，如细胞活性低，分离的细胞容易受到成纤维细胞、平滑肌等杂细胞污染等等问题，为此分离培养脑微血管内皮细胞的关键步骤之一就是获得纯度较高的微血管片段。常规方法多采用玻璃匀浆法及尼龙滤网过滤的方法来获得微血管片段。但这些方法存在着微血管活性损伤大及获得率低等问题；本实验采用机械酶消化法，并结合连续密度梯度离心法获得纯度较高的脑微血管片段，将其放置特制的细胞培养皿和培养基中，分离的内皮细胞活性好，纯度高，该实验具有稳定的可重复性。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种可获得产量高、纯度高且生存时间较长的大鼠脑微血管内皮细胞。为了解决解决上述所涉及到的问题，本专利技术采取如下方法获得大鼠脑微血管内皮细胞：大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法，包括步骤：(a)大鼠颈椎脱臼处死，消毒并断头置于玻璃培养皿中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法，其特征在于，包括步骤：(a)大鼠颈椎脱臼处死，消毒并断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑；(b)在无菌条件下，剥离解剖去除小脑、间脑以及去除软脑膜和脑膜大血管等，保留大脑皮质；(c)通过机械酶消化法，并结合连续密度梯度离心法获得纯度较高的脑微血管片段；(d)将纯化的脑微血管片段铺置特制的细胞培养皿，并使用两种不同的培养基分离培养脑微血管内皮细胞。

【技术特征摘要】
1.一种大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法，其特征在于，包括步骤：(a)大鼠颈椎脱臼处死，消毒并断头置于玻璃培养皿中，打开颅腔后取出全脑；(b)在无菌条件下，剥离解剖去除小脑、间脑以及去除软脑膜和脑膜大血管等，保留大脑皮质；(c)通过机械酶消化法，并结合连续密度梯度离心法获得纯度较高的脑微血管片段；(d)将纯化的脑微血管片段铺置特制的细胞培养皿，并使用两种不同的培养基分离培养脑微血管内皮细胞。2.根据权利要求1所述的大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法，其特征在于，所述的大鼠为25-50g，2-3周龄的SD大鼠。3.根据权利要求1所述的大鼠脑微血管内皮细胞分离及培养方法，其特征在于，所述步骤c中机械酶消化法是将剥离干净的大脑皮质剪碎成约1mm3大小，加入混合酶液I，混匀，37℃水浴消化1-1.5h；1000×g室温离心8min，去上清液；沉淀中加入一定浓度的BSA重悬浮，充分混匀，1000×g4℃离心20min，去上清；沉淀加入4ml混合酶液II重悬浮，混匀，37℃水浴消化0.5-1h；700×g室温离心6min，去上清液；所述的混合酶液I是0.05-0.1％II型胶原酶，0.025-0.05％IV型胶原酶，200-400UDNaseI，所述的BSA浓度为15-30％，所述的混合酶液II是0.05-0.1％的胶原酶/分散酶，0...

【专利技术属性】
技术研发人员：田瑞，张亚洲，蒋敏，齐来俊，
申请(专利权)人：江苏齐氏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32