一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法技术

本发明专利技术提供了一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：（1）无菌条件下切取新鲜肾癌组织；（2）组织处理器械消毒；（3）预冷PBS清洗肾癌组织3次，剔除表面血管、结缔组织；（4）剪碎组织，并用预热的胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分别消化；（5）终止消化，离心，弃上清；（6）取细胞滤液检测细胞活性；（7）用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5% CO2环境中培养；（8）差速贴壁法去除成纤维细胞；（9）细胞形态鉴定；（10）细胞检测与鉴定。本发明专利技术提供的一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法，操作简单，所得细胞数量多，成活率高，是一种理想的原代人肾癌细胞分离与培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。

Isolation and Culture of Primary Human Renal Carcinoma Cells

The present invention provides a method for isolation and culture of primary human renal cancer cells, which includes the following steps: (1) cutting fresh renal cancer tissues under aseptic conditions; (2) tissue processing equipment disinfection; (3) pre-cooling PBS cleaning renal cancer tissues three times, removing surface blood vessels and connective tissues; (4) cutting tissue and digesting it separately with preheated trypsin and type II collagenase; (5) termination. Digestion, centrifugation, discarding supernatant; (6) Cell filtrate was taken to detect cell viability; (7) Complete medium was re-suspended to the coated culture flask and cultured in 37 C, 5% CO2 environment; (8) Differential adherence method to remove fibroblasts; (9) Cell morphology identification; (10) Cell detection and identification. The present invention provides a method for isolating and culturing primary human renal cancer cells, which is simple to operate, has large number of cells and high survival rate. It is an ideal method for isolating and culturing primary human renal cancer cells, and provides reliable cell resources for experiments.

【技术实现步骤摘要】
一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法
本专利技术属于现代生物技术之细胞培养
，具体涉及一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法。
技术介绍
肾癌是起源于肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤，全称为肾细胞癌，简称为肾癌，是最常见的肾脏实质恶性肿瘤。人肾癌细胞贴壁生长，形态呈短梭形。目前肾癌的研究多采用细胞株，如ACHN。但长期的体外传代培养会使其细胞特性和蛋白表达发生改变，在肾癌实验研究中可对实验结果产生干扰，影响实验预期结果。通过原代培养获取的肾癌细胞可以避免细胞系长期传代对细胞特性的影响，为各种实验的研究提供可靠的资料。目前常用的分离原代人肾癌细胞的方法有组织块贴壁法和酶消化法。组织块贴壁法分离得到的细胞纯度不高，数量少，并且培养时间较长。本专利技术在传统酶消化法基础上进行改良，采用一种混合酶消化法和差速贴壁法相结合的方法，旨在提供一种操作简单、高效的获得生长状态好、纯度高的原代人肾癌细胞的分离培养方法，建立一套完善可靠的原代人肾癌细胞体外培养技术。
技术实现思路
根据上述问题，本专利技术提供了一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法，该方法操作简单，细胞产量和成活率高，是一种较为理想的原代人肾癌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）无菌条件下切取新鲜肾癌组织，4℃密封运回实验室；（2）组织处理器械消毒；（3）无菌操作台内，预冷PBS清洗肾癌组织3次，剔除表面血管、脂肪、结缔组织；（4）剪碎组织，并用预热的胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分别消化；（5）终止消化，离心，弃上清；（6）取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；（7）细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5% CO2环境中培养；（8）差速贴壁法去除成纤维细胞；（9）细胞形态鉴定；（10）细胞存活率测定；（11）免疫学鉴定。

【技术特征摘要】
1.一种原代人肾癌细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）无菌条件下切取新鲜肾癌组织，4℃密封运回实验室；（2）组织处理器械消毒；（3）无菌操作台内，预冷PBS清洗肾癌组织3次，剔除表面血管、脂肪、结缔组织；（4）剪碎组织，并用预热的胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分别消化；（5）终止消化，离心，弃上清；（6）取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；（7）细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5%CO2环境中培养；（8）差速贴壁法去除成纤维细胞；（9）细胞形态鉴定；（10）细胞存活率测定；（11）免疫学鉴定。2.根据权利要求1所述的原代人肾癌细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤（3）所用预冷的PBS浓度为0.01M，PH为7.2~7.4。3.根据权利要求1所述的原代人肾癌细胞的分离及培养方法，其特征在于步骤（4）所用胰蛋白酶含0.01%的EDTA以吸收组织中的Ca2+、Mg2+，从而...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：江苏齐氏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32