一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法技术

本发明专利技术提供了一种原代小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：(1)取出正常成年小鼠腿部组织；(2)超净工作台内，用注射器冲出骨髓组织；(3)密度梯度离心，吸取中间白膜层细胞；(4)离心，洗涤，用完全培养基重悬，接种培养瓶；(5)置于37℃，5%CO

Isolation and culture of mouse aortic endothelial cells

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法
本专利技术属于现代生物技术之细胞培养
，具体涉及一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法。
技术介绍
血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成，呈多边形，细胞的边缘呈锯齿状，相互嵌合。它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其它血管壁的接口。血管内皮细胞(VEC)位于血浆与血管组织之间，它不仅能完成血浆和组织液的代谢交换，并且能合成和分泌多种生物活性物质，以保证血管正常的收缩和舒张，起到维持血管张力，调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能，进而保持血液的正常流动和血管的长期通畅。抗凝血材料表面内皮细胞化，可以减少血栓的形成和血小板激活。目前的研究表明，血管内皮细胞是多种心脑血管疾病或危险因子作用的靶器官，内皮功能损伤常伴发和加重心脑血管疾病。血管内皮功能障碍与动脉粥硬化、高血压等一系列疾病和状态有关，是动脉粥硬化最早期的改变。因此，如何早期评价血管内皮的功能对于临床防治血管性疾病具有重要意义。而内皮细胞体外培养方法的建立是研究内皮细胞生物学功能及多种疾病关系的基础。目前，国内外可供应的小本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 取出成年小鼠腿部组织，修剪去除周边结缔组织和肌肉，然后浸泡75%酒精，再以预冷含双抗的PBS缓冲液反复清洗2次； (2) 用5 ml注射器吸取M199培养基冲出骨髓组织直至骨髓腔变白；(3) 收集骨髓液，1200~1500 rpm离心5 min，去掉上清液，保留沉淀；(4) 取两个15 ml离心管，各加入4 ml淋巴分离液。将上述沉淀用M199培养基重悬，按1:2比例将此重悬液加入分离液上方；(5) 然后将离心管放入水平式低速离心机中，2000 rpm离心20 min，离心结束后，吸取中间白膜层细胞到50ml离心管中...

【技术特征摘要】
1.一种小鼠主动脉内皮细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取出成年小鼠腿部组织，修剪去除周边结缔组织和肌肉，然后浸泡75%酒精，再以预冷含双抗的PBS缓冲液反复清洗2次；(2)用5ml注射器吸取M199培养基冲出骨髓组织直至骨髓腔变白；(3)收集骨髓液，1200~1500rpm离心5min，去掉上清液，保留沉淀；(4)取两个15ml离心管，各加入4ml淋巴分离液。将上述沉淀用M199培养基重悬，按1:2比例将此重悬液加入分离液上方；(5)然后将离心管放入水平式低速离心机中，2000rpm离心20min，离心结束后，吸取中间白膜层细胞到50ml离心管中，1200~1500rpm离心5min，去掉上清液，保留沉淀；(6)沉淀用M199培养基清洗1次，1200~1500rpm离心5min，弃上清，保留沉淀；(7)完全培养基配制：M199培养基中加入胎牛血清，碱性成纤维细胞生长因子，血管内皮生长因子，青霉素和链霉素；(8)沉淀加完全培养基重悬，接种纤维连接蛋白包被的25cm2培养瓶...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：江苏齐氏生物科技有限公司，南昌齐氏生物医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32