一种鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法技术

本发明专利技术属于生物技术技术领域，具体涉及一种鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法。包括处死、卵巢处理、消化、过滤、离心洗涤、分离的步骤，其中卵巢处理步骤中对卵巢进行初步剪碎后，使用匀浆操作破碎卵巢组织3‑10min；分离步骤中在体视显微镜下分离并测量单个卵泡。本发明专利技术首次通过采用匀浆‑消化的分离方法来分离鹅早期卵泡(原始、初级、次级卵泡)，解决了以前其他物种中卵泡分离方法中机械分离所用时间过长的问题，进而提高了分离后的卵泡活性，减小了对卵泡的损伤；消化后采取显微操作，即显微镜下使用拉伸玻璃巴氏吸管吸取卵泡，从而做到对卵泡的单个挑取，也能记录卵泡的直径与阶段。

A method for separating primary, primary and secondary follicles from Goose

The invention belongs to the technical field of biological technology, and in particular relates to a method for separating the original, primary and secondary follicles of a goose. Including death, ovarian processing, digestion, filtration, washing, centrifugal separation steps, initial shear on the ovary which ovarian processing step, the use of broken 3 ovarian tissue homogenate operation 10min; separation step in stereo microscope measurement and separation of single follicle. The present invention through separation method to separate digestion using homogenate goose early follicular (original, for the first time primary and secondary follicles), to solve the previous follicles in other species separated by mechanical separation of the problem of long time method, thus improving the follicular activity after separation, reduce the follicle damage; take digestion and micromanipulation after that, under the microscope using tensile glass to absorb Straw pasteurized follicle, single out of follicles, can also record the follicle diameter and stage.

【技术实现步骤摘要】
一种鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法
本专利技术属于生物技术
，具体涉及一种鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法。
技术介绍
禽类产蛋性能与其卵泡生长发育能力密切相关，随着鹅产业的快速发展，鹅产蛋性能较低(平均年产蛋量仅为40～90枚)已成为制约鹅产业化发展的重要因素。鹅产蛋性能主要取决于卵巢中卵泡的生长和发育水平，并受品种、环境和饲养管理等因素的影响。鹅的早期卵泡主要分为原始、初级、次级卵泡，在鹅早期卵泡发育至等级前卵泡的过程中会涉及多种生物学进程，包括卵泡激活、募集、生长发育、凋亡等，这些过程为后期的鹅卵泡等级发育制度提供基础，进而影响鹅产蛋性能，因此研究卵泡的发育过程及其调控机理具有重要意义。卵泡分离方法具有重要的实用价值。卵泡体外培养无疑是研究早期原始卵泡激活、生长发育及闭锁等关键过程的重要技术手段(E.P.A.Jorssen等，2015)，而建立一种有效的且对卵泡损伤较小的分离方法是开展卵泡体外培养的前提。目前禽类早期卵泡的分离技术手段主要有酶消化法、机械分离法和酶加机械法等，但存在分离效果不佳、操作时间长、影响卵泡活性、不能实现确定阶段单个卵泡的分离、对卵泡损伤大的缺陷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法，包括处死、卵巢处理、消化、过滤、离心洗涤、分离的步骤，其特征在于：所述卵巢处理步骤中对卵巢进行初步剪碎后，使用匀浆操作破碎卵巢组织3‑10min；所述分离步骤中在体视显微镜下分离并测量单个卵泡。

【技术特征摘要】
1.一种鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法，包括处死、卵巢处理、消化、过滤、离心洗涤、分离的步骤，其特征在于：所述卵巢处理步骤中对卵巢进行初步剪碎后，使用匀浆操作破碎卵巢组织3-10min；所述分离步骤中在体视显微镜下分离并测量单个卵泡。2.如权利要求1所述的鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法，其特征在于由以下步骤组成：(1)处死：将鹅颈动脉放血处死，取出卵巢清洗；(2)卵巢处理：去掉卵巢髓质部、血管、结缔组织；对卵巢进行初步剪碎后，使用匀浆操作破碎卵巢组织；过滤；(3)消化：加入混合消化液消化，而后加入胎牛血清终止消化；(4)过滤：过滤后获得卵泡悬液；(5)离心洗涤：反复离心洗涤，收集卵泡沉淀于α-MEM培养基中；(6)分离：在体视显微镜下分离并测量单个卵泡。3.如权利要求2所述的鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法，其特征在于：所述步骤(1)将鹅处死后，用75％酒精棉擦拭鹅腹部后剪开腹部皮肤取出卵巢，将取得的卵巢放入70％的酒精清洗两次，再用生理盐水冲洗3次，最后转移至磷酸盐缓冲液中清洗2次。4.如权利要求2所述的鹅原始、初级、次级卵泡的分离方法，其特征在于：所述步骤(2)使用匀浆机进行3-10min分钟的匀浆操作，转速为...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱谋，高山雁，米红奎，王继文，何桦，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51