本发明专利技术涉及生物医学技术领域，是一种抗乙型脑炎病毒(JEV)感染的新靶点及应用。本发明专利技术以人脑微血管内皮细胞(HBMEC)作为靶细胞，采用RNA干扰技术下调靶细胞宿主蛋白的表达，来寻找可有效抑制JEV感染人脑微血管内皮细胞(HBMEC)的宿主因子，从而保护血脑屏障的功能，预防病毒穿过血脑屏障感染中枢神经系统。本发明专利技术提供了N-乙基马来酰亚胺敏感因子在防治乙型脑炎病毒感染中的应用，本发明专利技术通过实验发现N-乙基马来酰亚胺敏感因子(N-ethylmaleimide sensitive factor,NSF)在JEV感染HBMEC中发挥着重要的作用，下调NSF的表达，能明显抑制JEV的感染。本发明专利技术提供了NSF在制备预防或治疗乙型脑炎病毒感染药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学
，是一种抗乙型脑炎病毒感染的新靶点及应用。
技术介绍
乙型脑炎病毒又称日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV)， 属于黄病毒科（Flaviviridae)黄病毒属（Flavivirus)，为有包膜的单正链RNA病毒 。JEV为流行性乙型脑炎的病原体，主要以蚊虫为媒介进行传播， 感染后能够引发脑炎或脑膜炎等严重的急性神经系统症状，对人类健康威胁巨大。乙型 脑炎主要流行于东亚、东南亚以及大洋洲的部分地区，目前主要的控制手段为疫苗预防 以及蚊虫的消除，然而全球每年报告的乙型脑炎病例仍有35, 000-50, 000例，死亡人数 超过 10,000 例，由于诊断和报告机制不完善，实际的感染和死亡病例要超 过这些数字，可见乙型脑炎仍然是危害公众健康的重大问题，因而研究JEV致病机理和预 防手段，寻找新的抗病毒策略，已成为亟待解决的前沿课题。 JEV感染具有嗜神经性，易造成严重的中枢神经系统（CNS)疾病及其并发症，这 也是导致乙型脑炎患者发展为重症甚至死亡的主要原因 。JEV 经血液循环感染 CNS 需要穿越 血脑屏障，然而病毒如何穿过血脑屏障侵入CNS的机制还不清楚。血脑屏障（Blood Brain Barrier，BBB)是位于循环系统和中枢神经系统之间一道主要的屏障，它限制着不同物质在 两个部位之间的自由运输，对维持CNS的体内平衡以及保护CNS免受外界病原微生物的侵 袭中起着至关重要的作用。血脑屏障是由无窗孔的脑微 血管内皮细胞及其间的紧密连接、星形胶质细胞足突、细胞基膜和周细胞共同组成的一个 细胞复合体。在这个细胞复合体中，最主要的物质结构基础是脑微血管内皮细胞（Brain Microvascular Endothelial Cells，BMECs)及其紧密连接，其严整性的丢失被认为是病毒 感染致脑组织损伤的一个重要原因。因此，探明JEV感染BMECs的机制并以此寻找新的抗 病毒靶点，对于保护血脑屏障的功能，以及防治JEV所导致的中枢神经系统感染至关重要。 为了有效地感染细胞，病毒必须利用宿主细胞自身的物质运输系统将病毒运输 至细胞内特定区域以达到成功感染的目的。因此，作为病毒感染宿主细胞的首要环节， 病毒入侵已成为抗病毒药物筛选的重要靶标。研究表明，JEV可利用不同的宿主因子和 囊泡运输途径来侵入革巴细胞，JEV需借助网格蛋白依赖的内吞途径（clathrin-mediated endocytosis)感染非洲绿猴肾细胞（Vero 细胞），但感染神经细胞并不需要依赖网格蛋白〇 JEV 可 通过其包膜蛋白与热休克蛋白70相互作用来感染白纹伊蚊细胞（C6/36细胞）以及人肝癌细胞（Huh7 细胞） D JEV入侵入靶细胞内需要早期内吞小体分子参与对病 毒颗粒的运输。目前，关于 JEV 感染 BMECs 的途径及机制仍 不清楚。 病毒侵入靶细胞主要借助了参与宿主细胞自身物质运输的宿主细胞分子，这些宿 主细胞运输分子在细胞的跨膜物质运输，囊泡的形成、内吞以及分泌中发挥着重要的作用。 如GTP酶激活蛋白分子GRAFl在网格蛋白非依赖型的囊泡运输中具有重要的调节作用；属 于Rab蛋白家族成员之一的小GTP结合蛋白6 (Rab6)调节了蛋白分子在早期内吞小体以及 由高尔基体到内质网的运输过程；小GTP结合蛋白7(Rab7)参与了中期以及晚期内吞小体 的形成与物质运输过程；N-乙基马来酰亚胺敏感因子（NSF)在囊泡转运、特定靶细胞膜识 别以及膜融合的过程中发挥重要作用；分选连接蛋白（sorting nexin)参与了胞内囊泡的 运输以及蛋白酶由早期内体到溶酶体的转运等。这些分子中在 JEV 感染中的作用还 未有报道。 N-乙基马来酰亚胺敏感因子（N-ethylmaleimide sensitive factor, NSF)是 蛋白转运机制中的一个重要组分，参与多种途径的囊泡介导的蛋白转运以及膜融合的过 程，尤其在细胞内囊泡转运神经肽类激素或神经递质释放过程中起重要作用。NSF也被证实参与了病原微生物对宿主细胞 的感染过程。如NSF受体蛋白分子参与了免疫缺陷病毒（HIV-I)在宿主细胞内的组装 与病毒颗粒的释放过程 ;NSF 受体蛋白分子能够与蓝舌病毒（Bluetongue Virus) 衣壳蛋白VP5相互作用从而影响病毒的组装过程。可见 NSF 在参与病毒感 染与致病过程中发挥着重要作用。 目前还没有任何关于N-乙基马来酰亚胺敏感因子（NSF)在JEV感染中作用的报 道，对于该分子进行深入研究不仅能够提升对JEV感染与致病机制的认识，也可以为预防 与治疗JEV感染提供新的思路与靶点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗乙型脑炎病毒感染的新靶点。 本专利技术的另一目的在于提供N-乙基马来酰亚胺敏感因子（NSF)的新用途，特别是 在抗乙型脑炎病毒感染中的应用。 本专利技术的第三目的在于提供干扰N-乙基马来酰亚胺敏感因子（NSF)表达的 SiRNA0 本专利技术的主要技术方案是： 本专利技术，以人脑微血管内皮细胞（HBMEC)作为靶细胞，采用RNA干扰技术下调靶 细胞宿主蛋白的表达，来寻找可有效抑制JEV感染人脑微血管内皮细胞（HBMEC)的宿主因 子，从而保护血脑屏障的功能。本实验选择了一组参与或调节宿主细胞囊泡运输的分子来 进行筛选，这些分子在宿主细胞的跨膜物质运输，囊泡的形成、内吞以及分泌中发挥着重要 的作用，它们往往也是在病毒感染过程中易被病毒"劫持"并利用的分子。这些分子包括： GTP酶激活蛋白（GRAFl)、N-乙基马来酰亚胺敏感因子（NSF)、小GTP结合蛋白6A(Rab6A)、 小GTP结当前第1页1 2 3 本文档来自技高网...
【技术保护点】
N‑乙基马来酰亚胺敏感因子在制备预防或治疗乙型脑炎病毒感染药物中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：朱勇喆，戚中田，徐庆强，赵平，陈生林，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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