本公开提供病毒微粒，所述病毒微粒包含(至少部分地)嵌埋在聚合物基质中以将治疗性核酸分子局部递送到脊椎动物个体的细胞中(任选地与医用植入物如血管支架平台组合)的基因工程化杆状病毒。所述病毒微粒尤其适用于促进伤口愈合以及血管修复和预防病理学瘢痕。本文还提供了制备所述病毒微粒的方法、包含病毒微粒的药物组合物，以及包含所述病毒微粒以将所述病毒微粒定位于伤口中或者伤口附近的载体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于在脊椎动物个体中促进支架生物功能和伤口愈合的治 疗性病毒微粒 相关申请和f献的夺叉引用 本申请要求2013年4月12日提交的美国临时申请61/811，203的优先权。将这 个优先权申请的内容在此整体并入。 本申请还含有呈电子形式的序列表。这个序列表的内容整体并入本文中。
本公开涉及将治疗性核酸分子特异性和局部性递送到脊椎动物宿主的细胞中以 促进受损血管的修复以及用于伤口愈合应用。由聚合病毒微粒提供治疗性核酸分子，从而 允许基因工程化杆状病毒的受控释放。可以任选地将病毒微粒配制于药物组合物中和/或 包含于用于定位在伤口部位的载体中。
技术介绍
经皮经血管冠状动脉血管成形术和安装支架是治疗冠状动脉疾病的最常用的介 入程序之一。这种治疗形式的常见的长期并发症是支架再狭窄（ISR)现象，其发生在动脉 粥样硬化病变部位，导致在20-30%的患者中在安装支架6个月内扩张的动脉发生阻塞。这 个多因素性病理学事件的主要成因是动脉内衬中内皮痊愈不完全和血管SMC增殖。已经使 用几种方法来改善支架设计和耐久性，如使用经过涂覆的支架来提高支架材料的生物相容 性，以及使用冠状动脉内辐射来抑制炎症和平滑肌细胞增殖。辐射疗法虽然有效，但是伴有 愈合延期和内皮痊愈不完全；而经过涂布的支架在消除所述问题方面还没有完全成功。 已经将引入药物洗脱支架（DES)视为对现有支架设计的明显改善。所用药物大 部分具有抗增殖性，其靶向平滑肌细胞增殖和相关炎症系统。但是直接使用这些化学因素 受限于与以下相关的问题：药物洗脱、其对非标靶细胞的无意作用，以及药物对血管细胞分 裂的未经过选择的抑制从而导致安装支架的血管内皮痊愈不完全。此外，证明晚期支架血 栓形成的提高的风险的DES研究的最近长期元分析已经提出DES的长期安全性的问题。因 为狭窄症的病理学复发主要起源于由支架植入引起的内皮细胞衬里伤害和功能障碍，所以 有助于再内皮化加速的方法可具有明显的重要性，以降低ISR和晚期支架内血栓形成的风 险。此外，这种策略将规避停止另外为DES植入后所需的抗血小板药物疗法所造成的有害 后果。已经提出通过转移促血管新生性血管基因如Vegf来治疗性诱导血管细胞以促进再 内皮化为减弱新生内膜形成和减少再狭窄的有效方式。Vegf细胞因子是与酪氨酸激酶受 体1和2结合、几乎仅在内皮细胞上表达并且广泛用于受损血管内皮结构的选择性增生和 修复的内皮特异性有丝分裂因子家族。虽然哺乳动物病毒载体已经有效地用于血管基因疗 法，但是由于与包括复制胜任病毒和适当最优化人对这些病原体的耐受水平的风险相关的 安全问题，因此临床应用受限。此外，由于高病毒效价、天生毒性和炎症反应的诱导，以及病 毒整合到宿主基因组中的固有风险，因此存在与免疫原性相关的问题。另一方面，非病毒基 因递送系统主要受限于低的体内基因转移效率。 伤口愈合是复杂的生理事件，其使得损伤组织由新的组织替代。伤口的充分愈合 需要伤口附近的细胞的增殖和/或反分化以及细胞外基质的产生和/或重构，而且一旦疤 痕已经形成便返回静止状态（细胞分化、停止增殖并停止基质重构）。在一些病理学情况 下，愈合过程返回静止状态失败或延迟并因此促进了细胞增殖、异常量的细胞外基质（例 如过多或过少）的产生，并且甚至可以导致形成病理学瘢痕（例如皮肤的营养不良性/肥 厚性瘢痕、大血管的再狭窄）。 在伤口愈合过程易于诱导病理学副作用的情况下（例如在支架再狭窄中），将期 望具备可通过在伤口附近局部提供治疗核酸分子以由宿主的细胞转导而有利于体内平衡 性伤口愈合过程的基因递送系统。因为伤口愈合的过程是在特定的时间窗内进行的，所以 在一些实施方案中，将非常期望具备允许治疗性核酸分子在伤口愈合过程期间暂时性转导 的基因递送系统。另外，因为伤口通常限于宿主身上的特定位置，所以在一些实施方案中， 将非常期望具备特异性允许治疗性核酸转导到伤口附近的基因递送系统。优选地，所述基 因递送系统限制并且在一些实施方案中阻止了与所述治疗核酸分子转导相关的免疫反应。
技术实现思路
本公开提供病毒微粒，其中使用嵌埋的基因工程化杆状病毒以将治疗性核酸分子 递送到脊椎动物个体的细胞中。可将病毒微粒配制在药物组合物中并且任选地包含于载体 中。所述病毒微粒有利于血管的充分修复以及伤口愈合。 根据第一方面，本公开提供一种用于将重组型治疗性核酸分子递送到脊椎动物个 体的细胞中的病毒微粒。所述病毒微粒包含可生物降解的生物相容性聚合物的基质作为第 一组分。病毒微粒进一步包含至少一个（或在一个实施方案中是多个）基因工程化杆状病 毒作为第二组分，所述基因工程化杆状病毒具有包含/编码重组型治疗性核酸分子的病毒 基因组并且没有在脊椎动物个体的细胞中复制的能力。在一个实施方案中，可生物降解的 生物相容性聚合物是/包含聚酯。在另一实施方案中，所述聚酯是/包含乳酸-羟基乙酸 共聚物（P〇ly(lactic-co_glycolicacid))。在又一个实施方案中，基因工程化杆状病毒来 自核型多角体病毒属，并且在又一个实施方案中，基因工程化杆状病毒是多粒包埋型病毒 (multicapsidvirus)。在又一个实施方案中，基因工程化杆状病毒来自亚型苜蓿丫纹夜蛾 多粒包埋型核型多角体病毒属（AcMNPV)。在一个实施方案中，基因工程化杆状病毒至少部 分嵌埋在基质中。在另一实施方案中，重组型核酸分子编码生长因子，如血管生成性生长因 子（例如血管内皮生长因子（VEGF))。在另一实施方案中，基因工程化杆状病毒进一步包 含覆盖杆状病毒表面的至少一部分的阳离子聚合物涂层。在另一实施方案中，阳离子聚合 物是/包含树枝状聚合物。在又一个实施方案中，树枝状聚合物是/包含聚（酰胺基胺） (PAMAM)，如G0PAMAM。在一个实施方案中，病毒微粒的相对直径为约5μm和约10μm。 第二方面，本公开提供一种用于制备将重组型治疗性核酸分子递送到脊椎动物个 体的细胞中的病毒微粒的方法。大体上，所述方法包括（a)将具有包含重组型治疗性核酸 分子的病毒基因组的经基因修饰的杆状病毒再悬浮在水溶液中以获得水性制剂；(b)合并 并均质化步骤（a)的水性制剂与可生物降解的生物相容性聚合物和与水不混溶的挥发性 有机溶剂的溶液以形成油包水（w/o)乳剂；（c)合并并搅拌（并任选地均质化）步骤（b)的 油包水乳剂与油以形成油包油包水（w/o/o)乳剂；以及（d)从步骤（c)的油包油包水乳剂 蒸发所述与水不混溶的挥发性有机溶剂以形成病毒微粒。在一个实施方案中，所述方法进 一步包括（e)复原并洗涤在步骤（d)中获得的病毒微粒。在一个实施方案中，油进一步包 含表面活性剂，如非离子表面活性剂。在另一实施方案中，油是植物油。在又一个实施方案 中，方法进一步包括在步骤（a)之前用阳离子聚合物涂布，至少部分地涂布，经基因修饰的 杆状病毒。 第三方面，本公开提供一种通过本文所述的方法获得的用于将重组型治疗性核酸 分子递送到脊椎动物个体中的病毒微粒。 第四方面，本公开提供一种药物组合物，其具有（i)胶凝剂和（ii)本文所述的或 通过本文所述的方法获得的病毒。在一个实施方案中，胶凝剂包含蛋白质和/或蛋白质片 段，如纤维蛋白原和/或纤维蛋白。 第本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于将重组型治疗性核酸分子递送到脊椎动物个体的细胞中的病毒微粒，所述病毒微球包含(i)可生物降解的生物相容性聚合物的基质以及(ii)基因工程化杆状病毒，所述杆状病毒具有包含所述重组型治疗性核酸分子的病毒基因组并且没有在所述脊椎动物个体的细胞中复制的能力。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S·普拉卡什，A·保罗，D·舒穆蒂姆，
申请(专利权)人：芒果基因制药公司，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA
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