培养基添加物及培养基组合物以及使用了它们的细胞或组织的培养方法技术

本发明专利技术提供可在将细胞或组织良好地分散的状态下高效地培养所述细胞或组织、而且可对细胞或组织进行细胞图像分析的培养基添加物及培养基组合物、以及培养方法等。本发明专利技术的培养基添加物或培养基组合物含有琼脂。作为琼脂，优选使用重均分子量为10,000～60,000的低分子量琼脂。若使用所述琼脂，则能在细胞或组织良好地分散于培养基中的状态下进行培养，也可得到细胞或组织的增殖促进效果。另外，通过调整所述琼脂的浓度，从而可在悬浮状态和沉淀的状态中的任意状态下进行培养。

Culture based additive and medium composition and the culture of cells or tissues using them

The invention provides a culture medium additive, a culture medium composition, and a culture method, which can efficiently cultivate cells or tissues in a state of good dispersion of cells or tissues, and analyze cell and tissue images of cells or tissues. The culture medium or medium composition of the present invention contains agar. As agar, it is preferred to use low molecular weight agar with a heavy average molecular weight of 10000~60000. If agar is used, it can be cultured in the state where cells or tissues are well dispersed in the culture medium, and the proliferation and promotion effect of cells or tissues can also be obtained. In addition, by adjusting the concentration of the agar, it can be cultivated in any state in the state of suspended state and precipitation.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】培养基添加物及培养基组合物以及使用了它们的细胞或组织的培养方法
本专利技术涉及能以悬浮或沉降的状态使细胞或组织良好地分散而对其进行培养的培养基添加物及培养基组合物、以及以使用该培养基添加物或培养基组合物为特征的细胞或组织的培养方法。
技术介绍
近年来，用于使在动物、植物体内发挥不同作用的各种器官、组织及细胞在生物体外增殖或维持的技术不断发展。使这些器官、组织在生物体外增殖或维持分别被称为器官培养、组织培养，使从器官、组织分离的细胞在生物体外增殖、分化或维持被称为细胞培养。细胞培养是使分离的细胞在培养基中(即在生物体外)进行增殖或分化、或者得以维持的技术，已成为对于详细地分析生物体内的各种器官、组织、细胞的功能及结构而言必不可少的技术。另外，通过该技术而培养的细胞或组织已被应用于各种领域，例如：化学物质、药品等的药效及毒性评价，酶、细胞生长因子、抗体等有用物质的批量生产，对因疾病或缺损而丧失的器官、组织、细胞加以弥补的再生医疗，植物的品种改良，转基因作物的培育等。对于来自动物的细胞而言，根据其性状，大体分为悬浮性细胞和粘附性细胞两类。悬浮性细胞是生长·增殖不需要支持物的细胞，粘附性细胞是生长·增殖需要支持物的细胞，构成生物体的大部分细胞是后者即粘附性细胞。作为粘附性细胞的培养方法，已知单层培养、分散培养、包埋培养、微载体培养、及细胞球培养(sphereculture)等。有报道称，通过将包含脱酰基结冷胶等具有阴离子性官能团的高分子化合物的结构体混合在液体培养基中，能够在不实质性地提高该液体培养基的粘度的情况下、将动植物细胞及/或组织在静置状态下均匀分散从而进行悬浮培养；通过使用该培养基组合物进行培养，可提高细胞的增殖活性(专利文献1)。另外，还报道了使用甲基纤维素等增稠剂使粘附性细胞分散、促进球状体(spheroid)(是指细胞彼此集合·聚集而成的细胞集合体。本说明书中，有时称为“细胞球(sphere)”)的形成从而增进细胞增殖的例子(专利文献2、非专利文献1)。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2014/017513号专利文献2：日本特开平7-79772号公报非专利文献非专利文献1：PaolaLongati等，BMCCancer2013，13：95
技术实现思路
专利技术所要解决的课题如上所述，专利文献1中报道称，通过将包含脱酰基结冷胶等具有阴离子性官能团的高分子化合物的结构体混合在液体培养基中，能够在不实质性地提高该液体培养基的粘度的情况下、将细胞或组织在静置状态下良好地分散从而进行悬浮培养；通过使用该培养基组合物进行培养，可提高细胞的增殖活性。然而，本申请的专利技术人发现了下述这样的新课题：使用该培养基组合物培养细胞或组织时，细胞或组织为悬浮状态，因此，用细胞成像装置对细胞或组织进行分析时，透镜的焦点不一致，无法将培养物直接供于细胞图像分析。本专利技术的目的在于提供可在将细胞或组织良好地分散的状态下高效地培养所述细胞或组织、而且可对细胞或组织进行细胞图像分析的培养基组合物及培养方法等。用于解决课题的手段本申请的专利技术人为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现，通过将琼脂作为培养基添加物使用，从而能将细胞或组织良好地分散，并且，根据琼脂的浓度，无论是悬浮状态还是沉降的状态均能进行高效的培养。此外，发现通过用使用了该培养基添加物的组合物进行培养，能快速且简便地利用细胞成像装置对细胞或组织进行分析，从而完成了本专利技术。即，本专利技术如下所述：[1]培养基添加物，其含有琼脂。[2]如[1]所述的培养基添加物，其中，琼脂的重均分子量为10,000～60,000。[3]如[1]或[2]所述的培养基添加物，其为液态。[4]如[3]所述的培养基添加物，其中，相对于培养基添加物的总量而言，琼脂的含量为0.001(w/v)％～5(w/v)％。[5]培养基组合物，其含有琼脂。[6]如[5]所述的培养基组合物，其中，琼脂的重均分子量为10,000～60,000。[7]培养基组合物，其含有[1]～[4]中任一项所述的培养基添加物。[8]如[5]～[7]中任一项所述的培养基组合物，其中，相对于培养基组合物的总量而言，琼脂的含量为0.005(w/v)％以上且低于2(w/v)％。[9]如[5]～[8]中任一项所述的培养基组合物，其中，琼脂的含量为0.1(w/v)％时，所述培养基组合物的37℃时的粘度为2.5mPa·s以下。[10]如[5]～[9]中任一项所述的培养基组合物，其用于细胞培养。[11]如[10]所述的培养基组合物，其中，细胞为粘附性细胞或悬浮性细胞。[12]如[11]所述的培养基组合物，其中，粘附性细胞被粘附于载体表面、或被包埋在载体内部。[13]如[11]所述的培养基组合物，其中，粘附性细胞被粘附于微载体。[14]如[11]所述的培养基组合物，其中，粘附性细胞形成细胞球。[15]如[11]～[14]中任一项所述的培养基组合物，其中，粘附性细胞选自由癌细胞、肝细胞和癌细胞株组成的组。[16]细胞或组织培养物，其包含：[5]～[15]中任一项所述的培养基组合物；以及细胞或组织。[17]细胞或组织的培养方法，其中，以将细胞或组织分散于[5]～[15]中任一项所述的培养基组合物中的状态培养所述细胞或组织。[18]如[17]所述的培养方法，其中，细胞为粘附性细胞或悬浮性细胞。[19]如[18]所述的培养方法，其中，粘附性细胞被粘附于载体表面、或被包埋在载体内部。[20]如[18]所述的培养方法，其中，粘附性细胞被粘附于微载体。[21]如[18]所述的培养方法，其中，粘附性细胞形成细胞球。[22]如[18]～[21]中任一项所述的培养方法，其中，粘附性细胞选自由癌细胞、肝细胞及癌细胞株组成的组。[23]药品候选物质的筛选方法，所述筛选方法包括下述工序：(a)在存在及不存在待测物质的情况下、在[5]～[15]中任一项所述的培养基组合物中培养细胞的工序；以及(b)对细胞的生理学功能的变化进行分析的工序。[24]如[23]所述的筛选方法，所述筛选方法还包括：(c)选择与不存在待测物质的情况相比、抑制或增强细胞的生理学功能的物质作为药品候选物质的工序。[25]如[23]或[24]所述的筛选方法，其中，(b)对细胞的生理学功能的变化进行分析的工序利用细胞图像分析进行。[26]如[23]～[25]中任一项所述的筛选方法，其中，相对于培养基组合物的总量而言，培养基组合物中的琼脂的含量为0.005(w/v)％以上且低于0.07(w/v)％。[27]抗癌药候选物质的筛选方法，所述筛选方法包括下述工序：(a)在存在及不存在待测物质的情况下、在[5]～[15]中任一项所述的培养基组合物中培养癌细胞或癌细胞株的工序；以及(b)对癌细胞或癌细胞株的增殖变化进行分析的工序。[28]如[27]所述的筛选方法，所述筛选方法还包括：(c)选择与不存在待测物质的情况相比、抑制癌细胞或癌细胞株的增殖的物质作为抗癌药候选物质的工序。[29]如[27]或[28]所述的筛选方法，其中，(b)对癌细胞或癌细胞株的增殖变化进行分析的工序利用细胞图像分析进行。[30]如[27]～[29]中任一项所述的筛选方法，其中，相对于培养基组合物的总量而言，培养基组合物中的琼脂的含量为0.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
培养基添加物，其含有琼脂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.16 JP 2015-084590;2015.11.25 JP 2015-229971.培养基添加物，其含有琼脂。2.如权利要求1所述的培养基添加物，其中，琼脂的重均分子量为10,000～60,000。3.如权利要求1或2所述的培养基添加物，其为液态。4.如权利要求3所述的培养基添加物，其中，相对于培养基添加物的总量而言，琼脂的含量为0.001(w/v)％～5(w/v)％。5.培养基组合物，其含有琼脂。6.如权利要求5所述的培养基组合物，其中，琼脂的重均分子量为10,000～60,000。7.培养基组合物，其含有权利要求1～4中任一项所述的培养基添加物。8.如权利要求5～7中任一项所述的培养基组合物，其中，相对于培养基组合物的总量而言，琼脂的含量为0.005(w/v)％以上且低于2(w/v)％。9.如权利要求5～8中任一项所述的培养基组合物，其中，琼脂的含量为0.1(w/v)％时，所述培养基组合物的37℃时的粘度为2.5mPa·s以下。10.如权利要求5～9中任一项所述的培养基组合物，其用于细胞培养。11.如权利要求10所述的培养基组合物，其中，细胞为粘附性细胞或悬浮性细胞。12.如权利要求11所述的培养基组合物，其中，粘附性细胞被粘附于载体表面、或被包埋在载体内部。13.如权利要求11所述的培养基组合物，其中，粘附性细胞被粘附于微载体。14.如权利要求11所述的培养基组合物，其中，粘附性细胞形成细胞球。15.如权利要求11～14中任一项所述的培养基组合物，其中，粘附性细胞选自由癌细胞、肝细胞和癌细胞株组成的组。16.细胞或组织培养物，其包含：权利要求5～15中任一项所述的培养基组合物；以及细胞或组织。17.细胞或组织的培养方法，其中，以将细胞或组织分散于权利要求5～15中任一项所述的培养基组合物中的状态培养所述细胞或组织。18.如权利要求17所述的培养方法，其中，细胞为粘附性细胞或悬...

【专利技术属性】
技术研发人员：安部菜月，西野泰斗，大谷彩子，
申请(专利权)人：日产化学工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP