拆分外消旋混合物得到(‑)‑石杉碱甲的方法技术

一种从含(±)‑石杉碱甲的外消旋混合物拆分出(‑)‑石杉碱甲的方法包括：通过手性高效液相色谱(HPLC)从含(±)‑石杉碱甲的外消旋混合物中分离出(‑)‑石杉碱甲；所述手性高效液相色谱所用的流动相包含有醇和选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的溶液；以及所述高效液相色谱所用的固定相包含多聚糖衍生物。

Get the resolution of racemic mixture () method huperzine A

From a (+) containing huperzine a racemic mixture of split () method including huperzine A: by chiral high performance liquid chromatography (HPLC) with (+) isolated from huperzine a racemic mixture () Huperzine-A the flow of the solution; chiral HPLC using phase containing alcohol and selected from dichloromethane and chloroform and mixtures of substances; and the high performance liquid chromatography with stationary phase containing chitosan derivatives.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】拆分外消旋混合物得到(-)-石杉碱甲的方法
本专利技术的实施方式主要涉及一种拆分石杉碱甲的方法。
技术介绍
天然的石杉碱甲是一种手性分子，也被称作L-石杉碱甲或(-)-石杉碱甲。人工合成的石杉碱甲可以外消旋混合物的形式存在，也被称作(±)-石杉碱甲。石杉碱甲衍生物可用于制药。石杉碱甲是一种倍半萜类生物碱并且是一种有效可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂，其可从一种石松(如蛇足石杉)中提取。在中国，用石杉碱甲治疗肿胀，发热及血液疾病已有上百年的历史。在动物试验和临床试验中，石杉碱甲还被证实具有增强记忆力和保护神经的作用。最近还进行了石杉碱甲治疗阿尔兹海默症的双盲、安慰剂对照临床试验，该临床试验结果显示试验参与者的认知功能和生活质量均被提高了。中国已进行了许多关于石杉碱甲的临床试验，在其他对阿尔兹海默症日益关注的国家，如位于西半球的一些国家，石杉碱甲及其衍生物的医药用途也同样引起了极大地关注。石杉碱甲按IUPAC命名法命名，为(1R,9S,13E)-1-氨基-13-亚乙基-11-甲基-6-氮杂三环[7.3.1.0]十三-2(7),3,10-三烯-5-酮，其化学结构如下所示：石杉碱甲可从多种植物中分离，比如石杉科，石松科或卷柏属。但是，石杉碱甲在这些植物中的含量非常低。例如，，石杉碱甲在石杉中的最高含量仅约0.05％。在中国，1995至2001年间的调查显示石杉碱甲在石杉中的含量随其收获时节和生长地区的不同而不同。石杉碱甲在石杉中的含量大致在46μg/g至133μg/g范围内。和其他植物相比，11种马尾杉中石杉碱甲的含量较高，大致在242μg/g至560μg/g范围内。另外，蛇足石杉的生长周期约为8至10年，所以来源于天然植物的石杉碱甲是有限的，且其提取率非常低。进一步，伐木获取石杉碱甲会破坏植被(如采伐森林)。随着阿尔兹海默症患者日益增多及天然资源的缺乏，从植物中获取石杉碱甲的方式已无法满足其市场需求量。因此，人工合成的石杉碱甲已引起药物化学家的极大关注。人工合成的石杉碱甲可通过多种合成路径制得。药学研究表明(-)-石杉碱甲对乙酰胆碱酯酶的抑制活性比其对映异构体(+)-石杉碱甲高38至50倍。因此，(-)-石杉碱甲的不对称合成和手性拆分引起了人们的关注。石杉碱甲的化学合成方法可分为2大类：不对称合成和外消旋混合物的手性拆分。石杉碱甲的不对称合成分为2大类：由手性催化剂催化进行的不对称Michael-aldol反应和不对称环化反应。不对称合成路径中，可通过β-酮酯与(-)-8-苯甲醇的酯交换反应得到手性酯。所述手性酯然后与异丁烯醛-DNPH经不对称Michael-aldol反应和缩醛反应，形成一种中间体。所述中间体可转化为甲磺酸酯，然后消除得到一种非对映异构体，并由色谱分离法纯化。所述不对称合成路径可如下所示：但是，上述合成方法耗时长，且产率低，并且，需要用色谱分离法和大量的(-)-8-苯甲醇，因此，该路径不适于工业化生产。β-酮酯与异丁烯醛-DNPH还可由金鸡纳属生物碱催化进行不对称Michael-aldol反应和缩醛反应。所述反应可如下所示：上述反应的百分产率仅约45％(百分产率＝化合物2的摩尔数÷化合物1的摩尔数×100)，且选择性低，产生了超过三种比例为10:7:1的非对映异构体。因此，需要使用动态轴向压缩色谱进行后处理。β-酮酯还可与烯丙基氯化钯二聚体，由二茂铁催化进行不对称环化反应。所述反应可如下所示：虽然上述反应的选择性相对更高，但是其手性催化剂二茂铁很难合成，分离，纯化和回收，并且昂贵。因此，该方法多限于实验室应用。所述石杉碱甲的手性拆分被分为2大类：重结晶拆分和色谱拆分。例如，(-)-联苯甲酰-L-酒石酸产生的2种非对映异构体盐可与石杉碱甲的一种前体反应。所述两种盐中的一种可在有机溶剂中重结晶，并在解离后得到石杉碱甲。所述方法可如下所示：经重复拆分和纯化得到的石杉碱甲具备高光学纯度，但是该方法操作繁复且产率低(如，百分产率约为16.2％；百分产率＝终产物中(-)-石杉碱甲的质量÷外消旋混合物中(±)-石杉碱甲的质量×100)。
技术实现思路
本专利技术的实施方式涉及一种制备光学纯(-)-石杉碱甲的方法。根据本专利技术的实施方式，石杉碱甲及其对映异构体可通过预备的手性高效液相色谱分离。本专利技术的实施方式主要涉及一种拆分人工合成的石杉碱甲(如，一种被称为(±)-石杉碱甲的外消旋混合物)，得到大体上光学纯的(-)-石杉碱甲的方法。根据本专利技术的其中一个实施方式，一种从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物拆分出(-)-石杉碱甲的方法包括：通过手性高效液相色谱(HPLC)从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物中分离出(-)-石杉碱甲；所述手性高效液相色谱所用的流动相包含有醇和选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的溶液；以及所述高效液相色谱所用的固定相包含多聚糖衍生物。所述醇可选自含1至6个碳原子的伯醇、含1至6个碳原子的仲醇及其混合物。所述醇可包括甲醇、乙醇、异丙醇或其混合物。所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比可为8:1至1:8。所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比可为4:1至1:4。所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比可为2:8至5:8。所述流动相可进一步包含以流动相的总体积计的浓度小于5v％的有机碱。所述有机碱在流动相中的浓度以流动相的总体积计可为0.1v％至5v％。所述有机碱在流动相中的浓度以流动相的总体积计可为0.3v％至0.5v％。所述有机碱可包括乙二胺、二乙胺、三乙胺或其混合物。所述手性固定相的多聚糖衍生物可包括三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)直链淀粉、三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)纤维素、三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素或其混合物。例如，所述手性固定相的多聚糖衍生物可包括三(3,5-二氯-苯基氨基甲酸酯)纤维素。所述手性固定相可包括含多聚糖衍生物的颗粒，且该颗粒平均粒径为5μm至20μm。例如，所述颗粒的平均粒径可为10μm至20μm。所述的方法可进一步包括：如下制备两份溶液：所述含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物溶解于流动相中使得浓度在0.05g/ml至0.3g/ml范围内，其中所述手性高效液相色谱的流速ml/min与所述手性高效液相色谱的手性柱的直径mm的比值为1.2至3.5；将一份溶液注入到含所述手性柱的高效液相色谱的注入口中，其中，所述溶液的注入体积ml与该手性高效液相色谱的柱直径mm的比值为0.02至0.6；以及收集所得(-)-石杉碱甲。所述的方法可进一步包括旋干所得(-)-石杉碱甲。所述手性高效液相色谱可利用紫外灯检测器进行。所述紫外灯检测器可用于检测波长在210至310nm范围内的紫外光。所述手性柱的温度可为20至30℃。与其他制备(-)-石杉碱甲的方法相比，本专利技术的实施方式具备以下特点：分离方法时间较短；方法步骤简单，产物光学纯度或对映异构体过剩值(ee)高(如，(-)-石杉碱甲的ee值可约为99.0％或以上，或约为99.5％或以上，其中ee值由(-)-石杉碱甲的高效液相色谱峰面积与(+)-石杉碱甲和(-)-石杉碱甲的高效液相色谱总峰面积之比计算得到)；以及产率较高(如，百分产率至少为48％，比本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从含(±)‑石杉碱甲的外消旋混合物中拆分出(‑)‑石杉碱甲的方法，其特征在于，所述方法包括：通过手性高效液相色谱(HPLC)从含(±)‑石杉碱甲的外消旋混合物中分离出(‑)‑石杉碱甲；所述手性高效液相色谱所用的流动相包含有醇和选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的溶液；以及所述高效液相色谱所用的固定相包含多聚糖衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.03 US 62/059829;2015.06.26 US 14/7526641.一种从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物中拆分出(-)-石杉碱甲的方法，其特征在于，所述方法包括：通过手性高效液相色谱(HPLC)从含(±)-石杉碱甲的外消旋混合物中分离出(-)-石杉碱甲；所述手性高效液相色谱所用的流动相包含有醇和选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的溶液；以及所述高效液相色谱所用的固定相包含多聚糖衍生物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇选自含1至6个碳原子的伯醇、含1至6个碳原子的仲醇及其混合物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述醇包括甲醇、乙醇、异丙醇或其混合物。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比为8:1至1:8。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比为4:1至1:4。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述选自二氯甲烷、三氯甲烷及其混合物的物质的体积与醇的体积的体积比为2:8至5:8。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相进一步包含以流动相的总体积计的浓度小于5v％的有机碱。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述有机碱在流动相中的浓度以流动相的总体积计为0.1v％至5v％。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述有机碱在流动相中的浓度以流动相的总体积计为0.3v％至0.5v％。10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐勇刚，韦浩，陈松，张昊宁，
申请(专利权)人：美药星南京制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32