一种用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒，包括检测卡和可选择的荧光免疫定量分析仪，检测卡包括上样垫、结合垫、具有检测线和质控线的检测垫、吸样垫及底板，检测指标包括肾损伤分子‑1和肝型脂肪酸结合蛋白，结合垫包括结合垫本体和涂覆于结合垫本体上的时间分辨荧光微球标记抗体涂层，该时间分辨荧光微球标记抗体涂层中的抗体为所述指标的抗体。通过同时检测Kim‑1、L‑FABP的指标变化，及时、简便、直观、快捷的对急性肾损伤的发生、发展进行同步定量监测，能实现家庭检测和现场检测，所需样本量少，灵敏度高，检测背景信号低，特异性强，线性范围宽，操作简便，结果可靠。

A multi index time resolved fluoroimmunochromatography kit for rapid quantitative detection of acute renal injury

The utility model relates to a multi index time for acute kidney injury rapid quantitative detection of fluorescence immunochromatographic kit, including the detection of quantitative analyzer and card choices, including sample detection card pad, combination pad, a detection line and a quality control line detection pad, sample suction pad and the bottom, detection index including 1 kidney injury molecule and liver type fatty acid binding protein, including the combination of combined pad pad body is coated on the bonding pad on the body of time-resolved fluorescence labeled antibody coated microspheres, antibody of the time-resolved fluorescent microspheres labeled antibody antibody coating for the index. The changes of the simultaneous detection of Kim 1, L FABP, timely, simple, intuitive and fast simultaneous quantitative monitoring of the occurrence and development of acute kidney injury, can realize the detection and detection of family scene, a small amount of sample, high sensitivity, low background signal detection, strong specificity, wide linear range simple operation, reliable results.

【技术实现步骤摘要】
一种用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒
本技术涉及生物技术诊断领域，具体涉及一种用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒。
技术介绍
急性肾损伤（AKI）是一种常见的临床综合征，主要表现为肾功能的快速下降及代谢废物的蓄积，其传统的诊断有赖于血清肌酐（Scr）的升高和尿量的减少，但这些指标存在特异性低、影响检测结果的因素多等缺陷。AKI的发病率高，且呈逐年上升趋势，在住院患者尤其是重症患者中十分常见，重症AKI患者病死率高。肾损伤分子-1(Kim-1)是由334个氨基酸残基组成的Ⅰ型跨膜蛋白，在正常的肾组织中几乎不表达，当肾脏发生缺血及肾损伤后，在人近曲小管上皮细胞中呈高表达状态。肾小管受损后第1天KIM-1升高至少5倍以上，而血清肌酐与尿素氮到受损后第3天才升高，因此Kim-1是监测早期肾小管损伤的最敏感的标志物之一。Kim-1分子的细胞外ectodomain(金属蛋白酶水解脱下来的，可以分泌到尿液中)是急性肾衰竭(AKI)的定量标志物，尿中KIM-1的检测不受尿液理化物质的影响，心脏手术后几个小时就会检测到Kim-1在尿液中大幅增长现象。肾脏缺血时尿Kim-1水平升高，具有较高的特异性，对于AKI患者而言，高水平Kim-1预示患者的预后较差。临床实验证明，Kim-1是早期肾小管损伤最敏感的标志物之一。肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)是脂肪酸结合蛋白超家族中的重要成员,主要功能是机体对脂肪酸的吸收、转运及细胞内长链脂肪酸的转运,以及脂肪酸在细胞器内的再分布利用。L-FABP与肾损伤L-FABP在人肾脏近端肾小管细胞内表达。各种原因引起急性肾损伤时,如缺血/再灌注、造影剂相关急性肾损伤、败血症及感染性休克等,肾小管细胞内显著升高的游离脂肪酸及其氧化产生的活性氧和脂质过氧化产物可造成细胞内ATP衰竭和氧化应激,加重肾小管间质损伤,改变肾小管细胞膜通透性促使L-FABP快速溢出。在急性肾损伤动物模型和临床病例研究中均发现,肾组织缺血后1h尿L-FABP升高,在早期发现并准确测定急性肾小管坏死方面比传统肾功能标志物尿素氮更具优势。造影剂相关急性肾损伤的尿L-FABP比血肌酐更敏感,帮助医师发现和监测注射造影剂前已有肾小管损伤的患者。表明尿L-FABP可成为预测早期肾损伤的生物标志物。
技术实现思路
本技术所要解决的技术问题是克服传统诊断的缺陷，提供一种高特异性、高准确率的用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其可提高早期AKI诊断的准确性和特异性，解决现有临床检测的缺陷。此外，该种检测卡适于全血样品和尿样，可在家庭、养老院、条件简陋的社区卫生所等场合应用。为解决以上技术问题，本技术采用如下技术方案：试剂盒包括检测卡和可选择的荧光免疫定量分析仪，检测卡包括上样垫、结合垫、具有检测线和质控线的检测垫、吸样垫及底板，检测指标包括肾损伤分子-1和肝型脂肪酸结合蛋白，结合垫包括结合垫本体和涂覆于结合垫本体上的时间分辨荧光微球标记抗体涂层，该时间分辨荧光微球标记抗体涂层中的抗体为所述指标的抗体；检测线有二条，这二条检测线相互分离且分别为能够与时间分辨荧光微球标记抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。检测垫上包被有分别与Kim-1、L-FABP相对应的单克隆抗体、多克隆抗体，或相应的抗原构成的检测线和鼠IgG抗体构成的质控线。本技术还提供另一种用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒的方案，该试剂盒包括检测卡和可选择的荧光免疫定量分析仪，检测卡包括上样垫、结合垫、具有检测线和质控线的检测垫、吸样垫及底板，指标包括肾损伤分子-1和肝型脂肪酸结合蛋白，试剂盒还包括荧光标记抗体溶液，其中时间分辨荧光微球标记抗体涂层中的抗体为所述指标的抗体；检测线有二条，这二条检测线相互分离且分别为能够与时间分辨荧光微球标记抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。根据本技术的一个具体方面，检测卡由上样垫、结合垫、检测垫及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上构成。根据本技术的一个优选方面，检测卡还包括滤血膜或尿液过滤膜，滤血膜或尿液过滤膜覆设在上样垫上，上样垫、结合垫、检测垫及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上。根据本技术的又一优选方面，检测卡还包括助推垫，且检测卡由上样垫、结合垫、助推垫、检测垫及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上构成。根据本技术的还一优选方面，检测卡还包括滤血膜或尿液过滤膜和助推垫，滤血膜或尿液过滤膜覆设在上样垫上，上样垫、结合垫、助推垫、检测垫及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上。优选地，助推垫的材质为玻璃纤维素膜或无纺布。根据本技术的一个优选方面，所述检测垫仅有一条，所述二条检测线、质控线相互平行且沿着所述检测垫的长度方向依次设置在所述检测垫上。进一步地，二条检测线中靠近结合垫的检测线为肾损伤分子-1的配对抗体或抗原涂层，靠近吸样垫的检测线为肝型脂肪酸结合蛋白的配对抗体或抗原涂层，质控线位于检测垫的靠近吸样垫的端部。根据本技术的又一优选方面，所述检测垫包括二条检测分垫，所述二条检测线分别分布在二条检测分垫上。在各检测分垫上分别设置有质控线。Kim-1、L-FABP相对应的单克隆抗体、多克隆抗体，或相应的抗原分别包被在二条检测垫上，每条检测垫上平行设置质控线，包被羊抗鼠IgG、羊抗鸡IgY或羊抗兔IgG等抗体，或仅对结合垫经过玻纤处理液处理，制备包含荧光微球标记的Kim-1单克隆抗体、荧光微球标记的L-FABP单克隆抗体的荧光液。根据本技术的又一优选方面，检测卡包括二个独立的检测分卡，上样垫、结合垫、吸样垫和底板分别有二条，每一条上样垫、结合垫、检测分垫、吸样垫和底板组装成一个检测分卡。优选地，质控线通过包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗鸡IGY或羊抗兔IgG等形成。优选地，检测垫为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜；上样垫、结合垫的材质为玻璃纤维素膜或无纺布，吸样垫的材质为吸水滤纸。荧光微球时间分辨技术和免疫层析检测技术是已知的。本技术所述的时间分辨荧光微球标记抗体可采用本领域熟知的方法制备。由于以上技术方案的实施，本技术与现有技术相比具有如下优点：本技术可通过同时检测血清、血浆、全血或尿液中Kim-1、L-FABP的指标变化，及时、简便、直观、快捷的对急性肾损伤的发生、发展进行同步定量监测，能实现家庭检测和现场检测，所需样本量少，灵敏度高，检测背景信号低，特异性强，线性范围宽，操作简便，结果可靠。本技术检测卡将原本只能应用于医院检验科的试剂盒，经过技术创新，通过增加滤血膜或尿液过滤膜，使其可以方便、简易、准确的应用于对急性肾损伤的发生、发展进行同步定量监测，适用于家庭、养老院、条件简陋的社区卫生所，其使用方法也仅是由病人或家属针刺一滴血（或直接用尿液）来实现对急性肾损伤的发生、发展进行同步定量监测，减轻去医院挂号、排队、化验、取报告等繁琐过程，减轻公共医疗机构的压力，更有益于患者的日常治疗。进一步地，本技术在结构上增加了助推垫，可以有效的去除背景干扰，从而进一步提高诊断灵敏度高和准确度，此外助推垫还有助于加快检测样品流动，提高检测效率，缩短检测时间。附图说明图本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其包括检测卡和可选择的荧光免疫定量分析仪，所述检测卡包括上样垫（1）、结合垫（2）、具有检测线和质控线（C）的检测垫（3）、吸样垫（4）及底板（5），其特征在于：所述指标包括肾损伤分子‑1和肝型脂肪酸结合蛋白，所述结合垫（2）包括结合垫本体（20）和涂覆于所述结合垫本体上的时间分辨荧光微球标记抗体涂层（21），其中所述时间分辨荧光微球标记抗体涂层（21）中的抗体为所述指标的抗体；所述检测线有二条，这二条检测线（T1、T2）相互分离且分别为能够与所述时间分辨荧光微球标记抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。

【技术特征摘要】
1.一种用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其包括检测卡和可选择的荧光免疫定量分析仪，所述检测卡包括上样垫（1）、结合垫（2）、具有检测线和质控线（C）的检测垫（3）、吸样垫（4）及底板（5），其特征在于：所述指标包括肾损伤分子-1和肝型脂肪酸结合蛋白，所述结合垫（2）包括结合垫本体（20）和涂覆于所述结合垫本体上的时间分辨荧光微球标记抗体涂层（21），其中所述时间分辨荧光微球标记抗体涂层（21）中的抗体为所述指标的抗体；所述检测线有二条，这二条检测线（T1、T2）相互分离且分别为能够与所述时间分辨荧光微球标记抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。2.一种用于急性肾损伤快速定量检测的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其包括检测卡和可选择的荧光免疫定量分析仪，所述检测卡包括上样垫（1）、结合垫（2）、具有检测线和质控线（C）的检测垫（3）、吸样垫（4）及底板（5），其特征在于：所述指标包括肾损伤分子-1和肝型脂肪酸结合蛋白，所述试剂盒还包括荧光标记抗体溶液，其中所述时间分辨荧光微球标记抗体涂层中的抗体为所述指标的抗体；所述检测线有二条，这二条检测线（T1、T2）相互分离且分别为能够与所述时间分辨荧光微球标记抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。3.根据权利要求1或2所述的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括滤血膜或尿液过滤膜（6），所述滤血膜或尿液过滤膜（6）覆设在所述上样垫（1）上，所述上样垫（1）、结合垫（2）、检测垫（3）及吸样垫（4）依次相互交错粘贴在底板（5）上。4.根据权利要求1或2所述的多指标时间分辨荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括助推垫（7），且所述检测卡由所述上样垫（1）、结合垫（2）、助推垫（7）、检测垫（3）及吸样垫（4）依次相互交错粘贴在所述底板（5）上构成，所述助推垫（7）的材质为玻璃纤维素膜或无纺布。5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡文波，晏小云，
申请(专利权)人：江苏扬新生物医药有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏,32