一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其包括检测卡、比色卡和/或胶体金定量读数仪，检测卡包括上样垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸样垫及底板，指标包括肾损伤分子‑1、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白、视黄醇结合蛋白，胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层，其中胶体金标记抗体涂层中的抗体为所述指标的抗体；采用Kim‑1、NGAL和RBP三种标记物，可有效的预测肾衰风险。其诊断灵敏度高、特异性强。

A multi index rapid quantitative colloid gold reagent kit for the detection of renal failure

The utility model relates to a method for rapid quantitative detection of renal failure index detection of colloidal gold kit, which includes testing card, card and / or quantitative colloidal gold detection card reading instrument, including the sample pad, a colloidal gold combined pad, with a detection line and a quality control line bearing, sample suction pad and the bottom. The index includes kidney injury molecule 1, neutrophil gelatinase associatedlipocalin, retinol binding protein, colloidal gold combined pad includes a combination of cushion body and coated on the pad body on the combination of colloidal gold labeled monoclonal antibody coating, the colloidal gold labeled antibody on antibody coating in the index by Kim; 1, NGAL and three RBP markers can predict renal failure risk effectively. Its diagnostic sensitivity is high and its specificity is strong.

【技术实现步骤摘要】
一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒
本技术涉及生物技术诊断领域，具体涉及一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒。
技术介绍
肾衰是一个连续性过程，广泛发生于糖尿病人、交通事故伤害、重症患者、大手术后患者，它按FIFLE标准分为风险、损伤、衰竭、肾功能丧失和终末期肾病。现有技术中，临床检测肾衰的生物标志物是肌酐、尿素氮和尿量。而这些传统指标因为其影响因素较多，造成特异性偏低，导致以肌酐等作为肾衰诊断标志存在严重的局限性。肾衰的早期发生、发展过程包括肾小管损伤、肾小球滤过功能下降，肾衰过程的检测有助于对病人实施保护性治疗，阻止肾脏功能的进一步恶化。鉴于现有临床面临的这些问题，新的早期急性肾损伤的生物标志物已被逐步开发出来。包括肾损伤分子-1(Kim-1)、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NGAL)和视黄醇结合蛋白（RBP）。肾损伤分子-1(Kim-1)是由334个氨基酸残基组成的Ⅰ型跨膜蛋白，在正常的肾组织中几乎不表达，当肾脏发生缺血及肾损伤后，在人近曲小管上皮细胞中呈高表达状态。肾小管受损后第1天KIM-1升高至少5倍以上，而血清肌酐与尿素氮晚到受损后第3天才升高，因此Kim-1是监测早期肾小管损伤的最敏感的标志物之一。Kim-1分子的细胞外ectodomain(金属蛋白酶水解脱下来的，可以分泌到尿液中)是急性肾衰竭(AKI)的定量标志物，尿中KIM-1的检测不受尿液理化物质的影响，心脏手术后几个小时就会检测到Kim-1在尿液中大幅增长现象。肾脏缺血时尿Kim-1水平升高，具有较高的特异性，对于AKI患者而言，高水平Kim-1预示患者的预后较差。临床实验证明，Kim-1是早期肾小管损伤最敏感的标志物之一。中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NGAL)是一种小分子量分泌型蛋白，由Kjeldsedn等人于1993年发现，是Lipocalin家族的新成员。生理条件下，NCAL少量合成于骨髓中性粒细胞和肾小管等多个系统的上皮细胞，炎症反应和恶性肿瘤可诱使其在多组织(如子宫、前列腺、唾液腺、肺、肾、气道及消化道上皮等)中大量生成，几个小时内就可以达到峰值，产生速度明显快于其它相关生物标记物。NGAL在急性肾小管损伤早期就已经表达，反映肾小管功能紊乱，它浓度的升高提示肾小管损伤发生，而传统指标血肌酐升高则需24小时以上。NGAL也是目前新型AKI诊断的首选指标物。视黄醇结合蛋白（RBP）是一种分子量约为21KD的小分子量蛋白，主要由肝细胞合成，广泛分布于血液、脑脊液等各类体液，血液中的RBP常与视黄醇及甲状腺转运蛋白结合形成三元复合体，结合状态的RBP无法从肾小球滤过。当肾脏滤过功能降低时,肾小球滤过率和肾血流量降低而使血中各种形式的视黄醇结合蛋白（RBP）贮积而显示血清RBP浓度升高。在慢性肾小球肾炎中,血清RBP与肾功能相关性好,可以作为肾小球滤过功能受损的敏感指标。正常人尿中视黄醇结合蛋白（RBP）含量很少，约为0.1ug/min以下，其水平增加被认为是一种敏感的近端肾小管损伤的诊断指标。RBP与尿白蛋白、NAG、β2-微球蛋白等有显著的正相关。而尿RBP作为肾小管损伤的指标较NAG敏感。在疾病状态下，尿RBP浓度又是NAG的10倍。因此，尿RBP的测定比NAG和β2-MG更有价值。当肾脏疾患或感染等导致肾小管重吸收功能障碍时,尿中RBP浓度升高,因此尿中RBP测定是诊断早期肾小管损伤的敏感指标。
技术实现思路
本技术所要解决的技术问题是提供一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其通过同时检测Kim-1、NGAL和RBP的指标变化，可准确地检测早期肾小管的损伤，具有特异性强、准确性高的特点，用一滴血、一滴尿实现家庭检测和现场检测，避免肾衰的进一步发生，具有极高的社会效益。为解决以上技术问题，本技术采用如下技术方案：一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其包括检测卡、比色卡和/或胶体金定量读数仪，检测卡包括上样垫、胶体金结合垫、具有检测线和质控线的承载膜、吸样垫及底板，检测指标包括肾损伤分子-1、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白、视黄醇结合蛋白，胶体金结合垫包括结合垫本体和涂覆于结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层，其中胶体金标记抗体涂层中的抗体为所述指标的抗体；检测线有三条，这三条检测线相互分离且分别为能够与胶体金标记的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。根据本技术的一个具体方面，检测卡由上样垫、胶体金结合垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上构成。根据本技术的一个优选方面，检测卡还包括滤血膜或尿液过滤膜，滤血膜或尿液过滤膜覆设在上样垫上，上样垫、胶体金结合垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上。根据本技术的又一优选方面，检测卡还包括助推垫，且检测卡由上样垫、胶体金结合垫、助推垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上构成。根据本技术的还一优选方面，检测卡还包括滤血膜或尿液过滤膜和助推垫，滤血膜或尿液过滤膜覆设在上样垫上，上样垫、胶体金结合垫、助推垫、承载膜及吸样垫依次相互交错粘贴在底板上。优选地，助推垫的材质为玻璃纤维素膜或无纺布。根据本技术的一个优选方面，承载膜仅有一条，三条检测线、质控线相互平行且沿着所述承载膜的长度方向依次设置在所述承载膜上。进一步地，三条检测线中靠近胶体金结合垫的检测线为肾损伤分子-1的配对抗体或抗原涂层，靠近吸样垫的检测线为视黄醇结合蛋白的配对抗体或抗原涂层，中间的检测线为中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白的配对抗体或抗原涂层，质控线位于承载膜的靠近吸样垫的端部。根据本技术的又一优选方面，承载膜包括三条承载分膜，三条检测线分别分布在三条承载分膜上。在各承载分膜上分别设置有质控线。根据本技术的又一优选方面，检测卡包括三个独立的检测分卡，上样垫、结合垫、吸样垫和底板分别有三条，每一条上样垫、结合垫、承载分膜、吸样垫和底板组装成一个检测分卡。优选地，质控线通过包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗鸡IgY或羊抗兔IgG等形成。优选地，承载膜为硝酸纤维素膜且为孔径5～12um的多孔样结构膜；上样垫、胶体金结合垫的材质为玻璃纤维素膜或无纺布，吸样垫的材质为吸水滤纸。免疫胶体金技术是已知的。本技术所述的胶体金免疫标记抗体可采用本领域熟知的方法制备。由于以上技术方案的实施，本技术与现有技术相比具有如下优点：本技术试剂盒包括快速检测肾衰的三联检测卡，其采用Kim-1、NGAL和RBP三种标记物，可有效的预测肾衰风险，在诊断试剂的研发方面属于首创，其结构上增加了助推垫，可以有效的去除干扰。其诊断灵敏度高、特异性强，临床监测的准确率高，进行早期预警可及时阻止病人的病情恶化，降低因检测不及时造成的漏诊、误诊，降低死亡率。本技术检测卡将原本只能应用于医院检验科的试剂盒，经过技术创新，通过增加滤血膜或尿液过滤膜，使其可以方便、简易、准确的应用于有肾衰风险的家庭、养老院、条件简陋的社区卫生所，其使用方法也仅是由病人或家属针刺一滴血或直接用尿液来实现肾衰自我检测、监测，减轻去医院挂号、排队、化验、取报告等繁琐过程，减轻公共医疗机构的压力，更有益于患者的日常治疗。进一步地，本技术在结构本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其包括检测卡、比色卡和/或胶体金定量读数仪，所述检测卡包括上样垫（1）、胶体金结合垫（2）、具有检测线和质控线（C）的承载膜（3）、吸样垫（4）及底板（5），其特征在于：所述指标包括肾损伤分子‑1、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白和视黄醇结合蛋白，所述胶体金结合垫（2）包括结合垫本体（20）和涂覆于所述结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层（21），其中所述胶体金标记抗体涂层（21）中的抗体为所述指标的抗体；所述检测线有三条，这三条检测线（T1、T2、T3）相互分离且分别为能够与所述胶体金标记的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。

【技术特征摘要】
1.一种用于肾衰检测的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其包括检测卡、比色卡和/或胶体金定量读数仪，所述检测卡包括上样垫（1）、胶体金结合垫（2）、具有检测线和质控线（C）的承载膜（3）、吸样垫（4）及底板（5），其特征在于：所述指标包括肾损伤分子-1、中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白和视黄醇结合蛋白，所述胶体金结合垫（2）包括结合垫本体（20）和涂覆于所述结合垫本体上的胶体金标记抗体涂层（21），其中所述胶体金标记抗体涂层（21）中的抗体为所述指标的抗体；所述检测线有三条，这三条检测线（T1、T2、T3）相互分离且分别为能够与所述胶体金标记的抗体特异性结合的配对抗体或抗原形成的涂层。2.根据权利要求1所述的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括滤血膜或尿液过滤膜（6），所述滤血膜或尿液过滤膜（6）覆设在所述的上样垫（1）上，所述上样垫（1）、胶体金结合垫（2）、承载膜（3）及吸样垫（4）依次相互交错粘贴在底板（5）上。3.根据权利要求1所述的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括助推垫（7），且所述检测卡由所述上样垫（1）、胶体金结合垫（2）、助推垫（7）、承载膜（3）及吸样垫（4）依次相互交错粘贴在底板（5）上构成。4.根据权利要求1所述的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其特征在于：所述检测卡还包括滤血膜或尿液过滤膜（6）和助推垫（7），所述滤血膜或尿液过滤膜（6）覆设在所述的上样垫（1）上，所述上样垫（1）、胶体金结合垫（2）、助推垫（7）、承载膜（3）及吸样垫（4）依次相互交错粘贴在底板（5）上。5.根据权利要求3或4所述的多指标快速定量检测胶体金试剂盒，其特征在于：所述助推垫（7）的材质为玻...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡文波，
申请(专利权)人：江苏扬新生物医药有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏,32