18β‑甘草次酸（或盐）作为减轻化疗药顺铂引起的急性肾损伤的辅助治疗药物的应用制造技术

本发明专利技术属于药物治疗学领域，具体涉及甘草中的主要成分之一的18β‑甘草次酸（或盐）作为减轻化疗药顺铂引起的急性肾损伤的辅助治疗药物的应用。顺铂作为常用化疗药物，其肾脏毒性制约了其临床应用。本发明专利技术中的18β‑甘草次酸可抑制顺铂诱导的急性肾损伤中肌酐、尿素氮的水平，降低KIM‑1损伤蛋白的表达，抑制顺铂引起的肾小管上皮细胞的凋亡，本发明专利技术首次发现18β‑甘草次酸对顺铂引起的急性肾损伤具有保护作用，其机制与其抑制肾小管上皮细胞凋亡有关，在中药抗癌的辅助治疗中提供了新的潜在药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物治疗学领域，公开了18β-甘草次酸(或盐)作为减轻化疗药顺铂引起的急性肾损伤的辅助治疗药物的应用。
技术介绍
临床化疗药物的肾毒性一直是肿瘤治疗的瓶颈，如何降低化疗药物的毒副作用，是肿瘤治疗过程中研究的重点之一。顺铂(cis-dichlorodiamminoplatinumⅡorCisplatin,CP)作为广泛使用的细胞毒性化疗药物，对多种肿瘤具有较好的疗效。顺铂活性与氯离子浓度相关，在细胞内液的低氯环境中，顺铂结构中氯离子发生水合解离，被水取代，生成带正电荷的水合配离子，与DNA发生加成反应，破坏细胞DNA的复制、转录等功能，阻滞细胞周期，导致细胞凋亡。临床观察发现，应用顺铂治疗的住院病人中肾损害发生率达25％～35％，其引起的急性肾损伤严重限制了其临床应用。顺铂进入体内大部分直接经肾脏排泄，还可以被肾小管分泌，表明肾脏细胞对顺铂有较强的聚集作用，尤其是肾小管细胞，因其浓缩和重吸收作用更易受到药物毒性效应的影响，在肾小管上皮细胞中的顺铂浓度比血液中高5倍左右，顺铂在肾脏组织中高浓度蓄积是其肾毒性作用的基础。顺铂导致的肾损伤涉及多种机制，包括炎症介质释放、氧化应激产生、凋亡及坏死、自噬等多种途径。研究发现，顺铂在体内产生的自由基可攻击心磷脂，促进细胞色素C释放，从而激活caspase-3。此外，顺铂还能够激活促凋亡蛋白Bax、Bak，这些促凋亡蛋白能够使线粒体膜通透性增加，引起细胞色素C的释放和caspases的激活，引起肾小管上皮细胞凋亡。因此阐明顺铂引起的急性肾损伤形成的相关分子机制，寻找药物可能的作用靶点，以预防和减轻顺铂引起的急性肾损伤，对于降低临床化疗药物的肾毒性，增加其临床应用具有重要的意义。甘草为豆科植物，性平味甘，具有补脾益气，和中缓急，调和诸药的功效，广泛地被用于保肝、降血脂、抗癌及增强细胞免疫调节等方面。甘草中有100多种化学成分，甘草酸(Glycyrrhizicacid,GA)为其主要活性成分，药理作用广泛，具有抗炎、抗肿瘤等作用。甘草次酸是口服甘草酸的最主要的活性代谢产物，是甘草酸在体内发挥活性的主要形式之一。本专利技术拟通过整体、细胞、蛋白水平研究，深入观察探讨18β-甘草次酸(18β-GA)对CP诱导的急性肾损伤保护作用及可能的作用机制，为预防和减轻顺铂引起的急性肾损伤发现新的药物作用靶点提供实验依据。
技术实现思路
本专利技术公开了18β-甘草次酸(或盐)作为减轻化疗药顺铂引起的急性肾损伤的辅助治疗药物的应用。本专利技术的目的是为寻找预防和减轻顺铂引起的肾脏损伤新的药物，为实现上述目的，探讨了甘草的活性成分甘草次酸对顺铂引起的急性肾损伤的保护作用。药效学结果显示在整体动物和细胞水平上发现甘草次酸对顺铂诱导的急性肾损伤模型具有较强的保护作用，探究其机制，在整体动物和细胞水平上均证实甘草次酸可通过抑制肾小管上皮细胞凋亡对顺铂引起的急性肾损伤发挥保护作用。本专利技术的研究方案如下：(1)在整体动物水平考察甘草次酸对急性肾损伤的保护作用，通过动物大体观、肾脏的病理、血清的肌酐、尿素氮水平，损伤蛋白KIM-1的表达变化，证明甘草次酸对急性肾损伤具有保护作用。(2)在整体动物水平，运用TUNEL染色及组织中Caspase3的活性变化证明甘草次酸可通过抑制肾小管上皮细胞的凋亡对顺铂引起的急性肾损伤发挥保护作用。(3)运用药代动力学方法，考察小鼠口服灌胃给药后，甘草次酸在肾脏组织中的浓度变化，为甘草次酸的肾脏药理学研究提供物质基础。本专利技术拟通过整体、细胞、蛋白水平研究，深入观察探讨18β-GA对CP诱导的急性肾损伤保护作用及可能的作用机制，为预防和减轻顺铂引起的急性肾损伤发现新的药物作用靶点提供实验依据。附图说明图1为18β-GA对CP(20mg/kg,3d)诱导的AKI小鼠一般状况与肾脏大体的影响图；图2为18β-GA对CP(20mg/kg,3d)诱导AKI小鼠肾脏病理的影响图；图3为18β-GA对CP(20mg/kg,3d)诱导AKI小鼠血清Cr、BUN的影响；A.18β-GA对CP(20mg/kg,3d)诱导AKI小鼠血清Cr的影响；B.18β-GA对CP(20mg/kg,3d)诱导AKI小鼠血清BUN的影响；**p<0.01vsvehicle；#p<0.05,##p<0.01vsmodel；图4为18β-GA对CP(20mg/kg,3d)诱导AKI小鼠肾脏组织中KIM-1表达的影响；A.KIM-1免疫荧光变化(x40)；B.KIM-1蛋白变化，**p<0.01vsvehicle,##p<0.01vsmodel；图5为18β-GA(50mg/kg)抑制CP(20mg/kg,3d)诱导的AKI小鼠肾脏组织凋亡(x40)；图6为18β-甘草次酸在肾脏匀浆液中代表性色谱图。A.18β-GAB.空白肾组织匀浆C.空白肾组织匀浆+25μg/ml18β-GAD.小鼠给药1h后肾组织匀浆1：18β-GA。具体实施方式：实施例1：18β-GA对CP诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠一般状况与肾脏的影响主要步骤如下：60只雄性C57BL/6J小鼠，体重18±2克，随机分为如下6组(n＝10)：对照组(Vehicle)、对照+18β-GA(100mg/kg)组、CP组、CP+18β-GA(25mg/kg)组、CP+18β-GA(50mg/kg)组和CP+18β-GA(100mg/kg)组。第1天对照组及对照+18β-GA(100mg/kg)组经腹腔注射0.9％氯化钠0.5ml，CP组、CP+18β-GA(25mg/kg)组、CP+18β-GA(50mg/kg)组和CP+18β-GA(100mg/kg)组腹腔注射CP(20mg/kg)，与此同时CP+18β-GA(25mg/kg)组、CP+18β-GA(50mg/kg)组和CP+18β-GA(100mg/kg)连续灌胃给药3天，第四天腹腔注射10％的水合氯醛，麻醉后处死动物，称重并收集血液，用于生化指标的检测；收集肾组织冻存或固定，用于石蜡切片和冰冻切片的制备和蛋白及RNA的制备。结果发现：与CP诱导AKI小鼠相比，应用18β-GA(25、50、100mg/kg)，可不同程度改善小鼠一般状态。大体观，与CP诱导AKI小鼠相比，18β-GA(25、50、100mg/kg)可缓解CP诱导的AKI小鼠肾脏紧张度，颜色亦逐渐加深(见图1)。实施例2：18β-GA对CP诱导的小鼠肾脏病理的影响主要操作步骤：将不同组别的小鼠肾脏组织固定于福尔马林溶液中24h～48h，样品经过酒精脱水和二甲苯透明后，用石蜡包埋。待包埋好的组织块变硬，用切片机进行切片。染色前，在二甲苯中脱去石蜡切片中的石蜡，经过由高浓度到低浓度的乙醇脱水后，最后用清水(蒸馏水)冲洗即可开始染色。于苏木素染色液中染色5min～15min，用流水稍洗去多余的染色液。在1％盐酸乙醇中作用1～3s，稍水洗后加入蓝液(0.5％淡氨水)返蓝10～30s后，用0.5％伊红染液进行染色1～3min左右。蒸馏水稍洗后，再在由低浓度到高浓度乙醇溶液中进行脱水处理，二甲苯中透明、中性树脂胶封片后在显微镜下观察，分析结果后选取需要的位置拍照本文档来自技高网...

【技术保护点】
18β‑甘草次酸作为减轻化疗药顺铂引起的急性肾损伤的辅助治疗药物的应用。

【技术特征摘要】
1.18β-甘草次酸作为减轻化疗药顺铂引起的急性肾损伤的辅助治疗药物的应用。...

【专利技术属性】
技术研发人员：马陶陶，李俊，黄成，孟晓明，李增，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34